通过哪些方法可获得微生物的纯培养

㈠ 如何获得某一细菌的纯培养（或病毒的纯培养)简述整个过程。

先对分泌物进行第一次培养后，挑出其中的可疑菌落，一环就够了，然后接种到一个新的培养基再培养，这就是细菌的分离纯化过程，也就是纯培养，整个过程一定要注意无菌操作，挑选可以菌落时，一定要注意和杂菌区分。

很多细菌无法培养。能培养的细菌需要去查它的培养基配方，和培养时的条件。病毒一般是作为二元培养物而存在，也就是感染易感菌。当然也有许多并不不能培养。

(1)通过哪些方法可获得微生物的纯培养扩展阅读：

纯培养最重要的是在于微生物的生理研究，方法是依靠灭菌和分离，是由巴斯德（L．Pasteur）和柯赫（R．Koch）建立起来的。在自然界中，有的培养条件很困难，特别是具有密切共生关系的生物及进行寄生性营养的生物；也有一些在理论上不可能进行纯粹培养的生物。

㈡ 怎样获得纯培养物

利用固体培养基，让微生物在培养基的表面生长，就可以获得微生物的纯培养，但是这需要进行一个操作，就是划线分离。通过使用接种环划线分离，划线过程中，接种环上的细菌不断减少，逐渐就可以分离出单个菌落，当然这是需要一个经验和技巧的，经验越丰富的人，通过划线分离，获得单个菌落的效果就越好。

㈢ 怎样获得某种微生物的纯培养

常用的纯培养物分离发法：
（1）稀释涂布
（2）平板划线
（3）单细胞直接分离：对于个头大的细胞可以通过显微操作仪直接进行分离
筛选过程：采样：根据待分离的微生物性质选择特定的环境取样
富集：设计特定的有利于待分离菌株生长的环境，同时抑制其他菌株生长
初筛：设计选择性培养基，稀释涂布，挑选目标菌株（产透明圈等）划线
复筛：将获得的单菌落接种于复筛培养基，给于一定条件进行培养，对产物产率、性能等相关标准进行评价，即可挑出所需要的菌株

㈣ 获得微生物纯培养的方法及特点

一、固体培养基分离
1、稀释倒平板
特点：菌落分离较为均匀，进行微生物计数结果相对准确。但操作相对麻烦，热敏感菌有时易被烫死，而严格好氧菌也可能因被固定在培养基中生长受到影响。
2、涂布平板法
特点：操作相对简单，是较常使用的常规方法。但有时会因涂布不均匀使某些部位的菌落不能分开，进行微生物计数时需对稀释和涂布过程的操作特别注意，否则不易得到准确的结果。
3、平板划线法
特点：操作简单，多用于对已有纯培养的确认和再次分离。
应用：这三种方法可用于所有能在固体培养基表面形成菌落的微生物的纯培养分离。并且，通过选用适当的选择平板及培养条件，可直接分离各种具有特定生理特征的微生物。和厌氧罐或厌氧手套箱技术结合，这3种方法也可用于获得各种厌氧菌的纯培养。
4、稀释摇管法
特点：稀释倒平板法的一种变通形式，但由于菌落形成在琼脂柱的中间，观察和挑取都相对困难。
应用：在缺乏专业的厌氧操作设备的情况下对严格厌氧菌进行分离和观察。
二、液体培养基分离
1、稀释法
特点：工作量大，是否获得纯培养需依靠统计学的推测。
应用：不能或不易在固体培养基上生长的微生物进行纯培养分离或数量统计。
2、富集培养
特点：一般不能直接获得微生物的纯培养，在通过富集培养使原本在自然环境中占少数的微生物的数量大大提高后，需再通过平板法进行相应微生物纯培养的分离和检测。
应用：
（1）根据某种微生物的特殊生长要求，按照意愿从自然界中对这种微生物进行有针对性的有效分离；
（2）分离培养出由科学家设计的特定环境中能生长的微生物，尽管我们并不知道什么微生物能在这种特定的环境中生长。
三、显微操作
单细胞（孢子）挑取
特点：分离过程直观，可靠，但对仪器和操作技术要求较高，多限于高度专业化的科学研究。而挑取的微生物单细胞或孢子需经固体或液体培养基培养后才能获得其纯培养物。
应用：从样品中直接分离所需的微生物细胞或孢子，获得其纯培养。

㈤ 一株细菌被其他微生物污染如何重新获得其纯培养物利用何种方法对该菌株进行

用“微生物分离纯化”的方法。
微生物分离纯化是研究微生物的基本方法。将特定的微生物个体从群体中或从混杂的微生物群体中分离出来的技术叫做分离；在特定环境中只让一种来自同一祖先的微生物群体生存的技术叫作纯化。
分离技术主要是稀释和单细胞培养。稀释是在液体中或在固体表面上高度稀释微生物群体，使单位体积或单位面积仅存留一个单细胞，并使此单细胞增殖为一个新的群体。最常用的为“平板划线法”。液体培养后的培养液经适当稀释后，用“平板涂布法”，也可以得到纯培养微生物。

㈥ 设计一个如何获得微生物的纯培养的实验

具体看你要培养什么类型的微生物呢？
大致就分以下几步吧1.培养基的配制2.菌种的接种操作3,菌种的保藏
以细菌培养为例，实验操作
1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
⑴制备流程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板
⑵实验注意事项
①全程要求无菌操作：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。
②50℃左右开始倒平板：培养基用高压灭菌锅灭菌后，需冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。操作时使锥形瓶的瓶口通过火焰灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
③冷却后倒置的原因：平板冷凝后，培养皿盖上会凝结小水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高。将平板倒置，即可以使培养皿表面的水分更好的挥发，又可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
④在倒平板过程中，不能将培养基溅在培养皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
2、纯化大肠杆菌的接种方法（即微生物的接种方法）
微生物最常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。
⑴平板划线法
①原理
连续划线：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。由于划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
②特点
操作简单，但是单菌落不易形成。
③操作注意事项
A、第一次划线及每次划线之前接种环都需要灼烧灭菌，划线操作结束时仍需灼烧接种环，每次灼烧的目的不同。
Ⅰ 第一次灼烧目的：避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。
Ⅱ 每次划线前灼烧：杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种来自上次划线末端。
Ⅲ 划线结束灼烧：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
B、灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高，杀死菌种。
C、划线时最后一个区域不要与第一个区域相连。
⑵稀释涂布平板法
①原理
将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养皿表面形成单个菌落。
②特点
操作复杂，但是但菌落容易分离
③操作注意事项
A、将涂布器末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。且待酒精燃尽后，冷却8～10s后，方能进行涂布。
B、操作中一定要注意防火！不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。
C、在所用操作过程中都应在火焰附近进行。应从操作的各个细节上保证“无菌”。如：对涂布器等接种器皿进行消毒和灭菌、酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。
3、结果分析与评价
⑴培养基制备成功的标准
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则实验失败需要重新制备。
⑵接种操作成功的标准
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌的菌落特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，实验失败，需要分析原因，再次制备。
⑶及时细致地观察与记录
培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微变化。可用图表来记录菌落的颜色、大小、形状、数目等。
4、要点：菌种的保藏
⑴目的
菌种放在低温环境中保藏的目的是降低新陈代谢速率，延缓菌种衰老。
⑵方法
①临时保藏法：适用于频繁使用的菌种。
方法：将菌种接种到固体斜面培养基上，在适宜的温度下培养。当菌落长成以后，将试管置于4℃的冰箱中保藏。
缺点：保存时间不长，菌种容易被污染或产生变异。
②甘油冷冻管藏法：适用于需要长期保存的菌种。
方法：在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱中保藏。

㈦ 实验室微生物菌种纯化方法

1、倾注平板法
首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物 2、涂布平板法
首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。3、平板划线法
最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。
4、富集培养法
富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。所创造的条件包括选择最适的碳源、能源、温度、光、pH、渗透压和氢受体等。在相同的培养基和培养条件下，经过多次重复移种，最后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。
5、厌氧法
在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水0浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。

㈧ 微生物培养的方法有哪些

微生物培养法是在人为条件下繁殖微生物的方法。根据微生物的种类以及对养料、温度、氧气、水分、酸碱度等环境条件的要求不同，并联系生产和实验上的具体要求，可有不同的培养方法。可分好气培养法和厌气培养法两类。中海生物技术的培养基一是好气微生物培养法，常用：
①摇床培养法，即将微生物接种于盛有液体培养基的三角瓶后，放在恒温培养室中的摇床上作有节奏的振荡，使空气不断进入培养液中，促其良好生长;
②浅盘培养法，又称表面培养法，在盘内放一浅层培养基，使微生物能够充分接触空气，而有利于生长繁殖，但此法所需空间大，并且容易污染杂菌;
③深层培养法，适用于好气微生物的大规模发酵培养，在大容积的液体培养基中，通入无菌空气，并不断搅拌，可使微生物充分接触空气，迅速繁殖并积累代谢产物。二是厌气微生物培养法，实验室常用化学还原剂或抽气机吸除培养基中的分子氧，也有用静止状态的深层培养法。在生产中常用密封式发酵罐或不通风的固体发酵法。

㈨ 分离纯化微生物的方法有哪些各方法适用分离什么菌种

主要有：划线法、倒平板法、涂布法，根据分离的菌种选择不同的培养基。

稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离法、选择培养分离法等。其中前三种方法最为常用，不需要特殊的仪器设备，分离纯化效果好。

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离。

分离技术

主要是稀释和选择培养，稀释是在液体中或在固体表面上高度稀释微生物群体，使单位体积或单位面积仅存留一个单细胞，并使此单细胞增殖为一个新的群体。最常用的为平板划线法。

如果所要分离的微生物在混杂的微生物群体中数量极少或者增殖过慢而难以稀释分离时，需要结合使用选择培养法，即选用仅适合于所要分离的微生物生长繁殖的特殊培养条件来培养混杂菌体，改变群体中各类微生物的比例，以达到分离的目的。为保证分离到的微生物是纯培养，分离时必须用。

以上内容参考：网络-微生物分离纯化