微生物纯系分离应注意哪些问题

A. 为什么微生物的纯系分离操作必须按无菌操作的方式进行

纯系分离，就是要保证你要的菌不被其他的菌种污染，如果不是无菌操作的话，很容易（基本上是一定）会被污染。

B. 影响微生物纯系分离的因素有哪些

影响微生物纯系分离的因素：
1.其它细菌侵害；
2.生长过程中变异；
3.温度和湿度要适宜。
简介：
微生物的纯系分离：通过某些方法设法把某种细胞挑选出来达到“菌落线”或“菌株线”的水平的选种方法。
微生物的纯系分离的方法：
（1）稀释平板分离
将待检样品按照一定方法逐级稀释成一定浓度梯度，选择适合稀释浓度样品，并接种，培养一定时间，可获得微生物
菌落。
（2）平板划线分离
用接种工具挑取适量样品（微生物混合样），按照一定方法在培养基平板上划线，经过一定时间的培养，可获得微生
物菌落，进而获得微生物纯培养体。
（3）选择培养分离
根据所培养的微生物的独特生理特性，采用针对性强的选择性培养基进行培养。

C. 微生物的分离纯化实验需要注意什么

操作无菌，先粗筛根据不同的微生物对底物的应用，后复筛定量测相应的酶活。

D. 我想请教一下各位，在微生物的纯系分离过程中应注意哪些问题

注意不要让其它细菌侵害，防止生长过程中变异！！再就是温度和湿度要适宜

E. 微生物纯种分离的方法有哪些

自然界中的微生物总是杂居在一起 即使一粒土或一滴水中也生存着多种微生物 要研究其中某一种微生物 首先必须将它分离出来 下面介绍几种纯种微生物的分离方法
平板划线分离 将已经熔化的培养基倒入培养皿中制成平板 用接种环沾取少量待分离的材料 在培养基表面平行或分区划线（图5-5）然后 将培养皿放入恒温箱里培养 在线的开始部分 微生物往往连在一起生长 随着线的延伸 菌数逐渐减少 最后可能形成纯种的单个菌落
液体稀释法 将待分离的样品经过大量稀释后 取稀释液均匀地涂布在培养皿中的培养基表面 培养后就可能得到单个菌落
利用选择培养基进行分离 不同的微生物对不同的试剂 染料 抗生素等具有不同的抵抗能力 利用这些特点可配制出适合某种微生物生长而限制其他微生物生长的选择培养基 用这种培养基来培养微生物就可以达到纯种分离的目的
菌丝尖端切割 这种方法适于丝状真菌 用无菌的解剖刀切取位于菌落边缘的菌丝的尖端 将它们移到合适的培养基上培养后 就能得到新菌落

F. 求一篇微生物的纯系分离及保藏的实验报告。

实验报告你自己写下吧，我好多年没写这个了。下面是实验报告的材料，希望对你有帮助：-）！
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~分离~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
分离技术主要是稀释和选择培养。稀释是在液体中或在固体表面上高度稀释微生物群体，使单位体积或单位面积仅存留一个单细胞，并使此单细胞增殖为一个新的群体。最常用的为平板划线法。如果所要分离的微生物在混杂的微生物群体中数量极少或者增殖过慢而难以稀释分离时，需要结合使用选择培养法，即选用仅适合于所要分离的微生物生长繁殖的特殊培养条件来培养混杂菌体，改变群体中各类微生物的比例，以达到分离的目的。为保证分离到的微生物是纯培养，分离时必须用。

~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~保种~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
定期移植法 将菌种接种于所要求的培养基上，在最适温度中培养，至静止期或产生成熟的孢子时，置入 5℃的冰箱(或冰库)保存。在培养和保存的过程中，由于代谢产物的累积而改变了原菌的生活条件，结果菌落群体中的个体就不断衰老和死亡，因此每5～15天或 1～4个月重新移植一次，具体间隔时间因种而异。凡能人工培养的微生物都可用此法保存。此法不需特殊设备，但烦琐，费时，而且经常移植容易引起菌种退化。
矿油封藏法
将化学纯的液体石蜡(矿油)经高压蒸气灭菌，放在40℃恒温箱中蒸发其中的水分，然后注入斜面培养物中，使液面高出斜面约 1厘米。将试管直立，放在15～20℃室温中保存。由于在斜面培养物上覆盖一层液体，既能隔绝空气，又能防止培养基因水分蒸发而干燥，可以延长菌种保藏的时间。但注入的液体必须不与培养基混溶、对菌种无毒，不易被利用和挥发。此法适用于酵母菌、芽孢杆菌；不适用于固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、法门氏菌和毛霉目中的大多数属种。此法简便易行，但必须注意防火和污染。
沙土管法
将沙或土过筛、烘干、装管、灭菌、然后将菌种制成孢子悬液滴入其中混匀，放到盛氯化钙的干燥器里吸除水分，干燥后保存或用火焰封管后保存。吸附在干燥沙土上的孢子因缺水而处于休眠状态，可保存较长时期。此法适用于芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、放线菌、镰刀菌等。
麸皮法
将麸皮制成培养基，培养要保存的菌种，待生长良好后，置干燥器中保存。这是根据中国酿造酒、醋、酱时制麴的经验所采用的一种保藏方法，适用于谷物微生物区系中的种类。
L－干燥法
又称液体干燥法或真空干燥法，用含3％谷氨酸钠的0．1M磷酸缓冲溶液 (pH7.0)做分散媒，将待保藏的微生物制成高浓度的细胞悬液，滴入无菌安瓿瓶中，每管0.05毫升；将安瓿瓶固定在多歧管上，并以水浴保持安瓿瓶内样品温度为10℃，在 13.3～1.3帕的真空度下干燥，火焰封管保存。此法不经冻结，用真实泵迅速抽乾，可避免菌种的冻伤或死亡。广泛应用于病毒、噬菌体、细菌、酵母菌、蓝藻、原生动物等。
梭氏法
将容有 1滴细胞悬液的小管，置于盛有氢氧化钾或五氧化二磷吸水剂的大试管中，用真空泵抽至1.3帕时，将大试管密封保存。这是为减少细胞死亡率而采取的一种不经冻结、缓慢脱水的干燥保藏法，适用于多种细菌、真菌。
冷冻真空干燥法
将细胞悬液每0.1～0.2毫升注入一无菌安瓿瓶，于-40℃预冻1小时，再于-20～30℃、真空度为13.3帕的条件下脱水。在脱水过程后期，安瓿瓶外温度可逐渐升至25℃。脱水后的样品含水量应在 3％以下。最后，将安瓿瓶保持真空度 1.3帕，用火焰溶封，置10℃保存。为防止细胞在冻结和脱水过程中损伤或死亡，要用保护剂制备细胞悬液。保护剂有脱脂牛奶、血清、10％蔗糖或葡萄糖溶液等，其作用是通过氧和离子键对水和细胞所产生的亲合力来稳定细胞成分的构型。此法适用于病毒、衣原体、枝原体、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等的长期保存，是当前保藏菌种的一个重要方法。但是，盐杆菌、发光杆菌、黏杆菌、阿舒囊霉、多囊霉、担子菌中的大多数属种不适用于此法保存。
液态氮超低温冻结法
用甘油或二甲亚(DMSO)作保护剂制备细胞悬液，分装入无菌安瓿瓶，每管0.2毫升，在控制温度下降速率为1℃/分钟的条件下预冻至-40℃，然后立即放入液氮生物贮存罐中气相(-150℃)保存。恢复培养时，先直接侵入38℃水浴中解冻 5～10分钟，再种植于适宜培养基内培养。这是根据在低于-130℃时一切生化反应处于停止状态、微生物也不能进行代谢活动而设计的冻结法。为避免冻死、冻伤和细胞内形成大量冰晶，用保护剂制备悬液并控制预冻时的冷却速率和解冻时融化速率。微生物的大多数属种适于慢速冻结和快速解冻。此法适用于病毒、枝原体、各种细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌、蓝藻等。

G. 微生物各种分离方法的优缺点

最常用的两种方法：
1．平板划线分离法
把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离。
缺点：不能计数，一般用于从菌种的分离纯化。
例如：筛选大肠杆菌菌种。
2．稀释涂布平板法
将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。
优点：可以计数，可以观察菌落特征。
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。一般用于平板培养基的回收率计数。
例如：测定纯净水中大肠杆菌的含量。

H. 在微生物实验中分离纯化操作过程中注意哪些问题

无菌操作、纯培养技术、单孢分离技术、细胞染色技术、显微观察技术,这些是微生物分离纯化操作所必须的技术,也是必须注意的问题.

I. 微生物分离方法

微生物分离法是获得微生物纯培养物的一种分离方法。通过这个方法可实现一种微生物的培养，或获得一个细胞的后代。其具体方法有：

1、稀释倒平皿法。将待分离的材料作一系列稀释，取不同稀释度适量涂布于固体培养基平板上或与已熔化的固体培养基一起倾注入平板内，经过培养即有一个微生物细胞繁殖来的单个菌落。

2、划线法。先将已熔化的固体培养基制成平板，待凝后，取分离材料在上面划线，可作平行划线、扇形划线或其他形状的连续划线，使菌样逐渐减少，最后得到单个孤立的菌落。

(9)微生物纯系分离应注意哪些问题扩展阅读：

微生物分离技术的应用措施：

1、减少毒性氧物质的毒害作用：由于常规培养方法使用的高浓度营养基质不利于微生物生长，适当降低营养基质的浓度可以减弱这种不利影响。发现低浓度基质的培养基培养出的细菌在数量和种类上均多于高浓度基质的培养基，但营养浓度过低时会使培养出的微生物数量反而下降。

2、维持微生物间的相互作用：在培养基中加入微生物相互作用的信号分子就可简单模拟微生物间的相互作用，满足微生物生长繁殖的要求。

3、供应新型的电子供体和受体：不同微生物的代谢过程不同，因此对反应的底物要求也不尽相同。供应微生物需要的特有底物有助于新陈代谢反应的进行及微生物的正常生长。大量的研究表明，将新颖的电子供体和受体应用到微生物培养中，能够发现未知的生理型微生物。

4、分散微生物细胞：自然界中很多微生物聚集生长，形成“絮体”和“颗粒”等，致使其内部的微生物不易被培养。对“絮体”和“颗粒”进行适度的超声处理，将细胞分散再进行培养，可以使更多的微生物接触培养基而得到培养。

5、延长培养时间：对“寡营养菌”的培养，可适当延长培养时间，使其能长至肉眼可见的尺度。当然培养时间不能无限增长，因为培养时间越长，对培养环境的无菌要求就越高[4]。

6、利用琼脂替代物：琼脂对某些微生物具有毒性作用，采用无害且凝结作用较好的替代物质作为培养基固化剂，可以增加微生物的可培养性。

J. 采用稀释平板法分离微生物的过程中,应该注意哪些问题

1.全过程要在无菌条件下进行
2.接种环使用前在酒精灯上灼烧至红热
3.蘸取少量菌液,先在培养皿上划一条,不要转动接种环
涂布平板操作的步骤: ①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中. ②取少量菌液,滴加到培养基表面. ③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却 8～10s. ④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面.
灭菌后,培养基冷却到 55℃后应及时进行倒平板操作.如果不能及时操作,需要将培 养基放到 55℃左右的电热箱中保温,以防止琼脂凝固
实验后,所有用过的培养基,培养液等都需要统一进行高压蒸汽灭菌后再丢弃,否则 将会造成环境污染