高温生物监测怎么看

㈠ 3M生物培养指示剂的压力蒸汽灭菌生物监测

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该压力蒸汽灭菌生物培养指示剂用于压力蒸汽灭菌效果的生物监测(包括下排气锅和预真空锅);通过培养基颜色变化，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。
1. 将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试包中;
2. 按照国家规范, 分别将测试包放于锅内不同位置;
3. 灭菌完毕, 取出该生物指示剂;
4. 挤破内含的安瓿, 与一支对照管一起放于56℃培养锅内培养;48小时后阅读结果。
结果阅读：
1.培养后指示管不变色(呈紫色), 表示灭菌通过;
2.培养后指示管变色(呈黄色), 表示灭菌不通过,(必须及时查出灭菌失败原因)。
3.同时培养的对照管应为阳性(呈黄色), 如阴性,可能的原因为: 培养条件不符合要求; 生物指示剂有问题; (应及时查出阴性原因)。
注意事项：
1. 灭菌完毕, 含生物指示剂的包裹很热并有一定压力; 需至少冷却10分钟以上, 否则可能引起塑料管内的安瓿破裂, 飞溅的碎片导致损伤;
2. 只有对照管为阳性, 其生物监测结果才算有效。
3. 贮存于室温: 15-30℃; 相对湿度为35-60%;避免靠近灭菌器和化学消毒剂。
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该生物指示剂可用以121℃下排气和132℃预真空压力蒸汽灭菌锅。
3M™ ATTESTTM压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速)在与3M ATTEST 290 培养锅共用时, 通过酶活性的灭活与否，探测嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌结果。
使用方法:
1－在生物指示剂标签上注明灭菌器锅号, 负荷数量, 灭菌日期; 不要在指示剂的瓶或盖上另贴一个标签。将生物指示剂放于一个标准测试包内，并置于最难灭菌的位置。
2- 将含有生物指示剂的测试包放在灭菌器最难灭菌的位置，通常是灭菌器底层，近门或排气口上面。
3- 正常装载。
4－灭菌循环完毕, 取出生物指示剂。
5- 灭菌结束后，从灭菌器内取出含有生物指示剂的测试包，打开散热5分钟后才能取出生物指示剂。同时在压碎安瓿之前，让生物指示剂在培养锅外再冷却10分钟后才能压碎，然后进行生物培养。
6－检查生物指示剂标签上的化学指示剂，颜色由玫瑰色变成棕色证明生物指示剂经过压力蒸汽灭菌过程的处理。该颜色的变化并非表明该处理达到灭菌的目的，如果化学指示剂没有变化，请检查灭菌过程。
7－戴上防护眼镜，挤碎安瓿，然后培养生物指示剂。详细步骤请参阅3M ATTEST 290 培养锅操作说明。
8－每次培养须同时培养一个未灭菌过的生物指示剂进行阳性对照，阳性对照生物指示剂与经过灭菌处理的生物指示剂为相同生产日期和批号。
阳性对照的目的是保证：1）－正确的培养条件
2）－指示剂的活性（不适当的贮存条件可能影响有效期内的指示剂活性）
3）－3M ATTEST 290 培养锅功能完好
9－在3M ATTEST 290 培养锅（培养温度62+/-20C）内，培养阳性对照和已处理的指示剂3小时，读出最终结果。阳性对照必须得出荧光阳性结果(阅读器显示为红灯或+)，如阳性对照读出荧光阴性(绿灯或-)，应检查培养锅温度和操作过程，直至阳性对照为阳性结果，生物监测的结果才是有效的。对于经过灭菌处理的指示剂，荧光阳性(红灯或+)表明灭菌过程失败，荧光阴性(绿灯或-)表明灭菌过程合格。
10－如果需要通过颜色变化检测生物监测结果，应将生物指示剂放在培养锅内继续培养。同时随时监测阳性结果的出现，如8、12、24，直至168小时（7天），最终视觉效果应在168小时（7天）得出。黄色表明细菌生长，灭菌过程失败。168小时（7天）没有颜色变化（培养基为紫色）表明灭菌过程合格。
11－对任何为阳性生物监测结果应立即采取行动，如追回同锅次的灭菌物品，和寻找原因。直至生物指示剂的结果呈阴性。
注意事项:
冷却之前压碎或过度处理生物指示剂可能导致玻璃安瓿的破碎, 飞溅的碎屑会使人员受伤; 因此建议在从灭菌器内取出生物指示剂时戴防护眼镜和手套, 在压碎生物指示剂时也需要戴防护眼镜。
禁忌：该生物指示剂不能用于121℃预真空和132℃下排气压力蒸汽灭菌锅，及干热、化学蒸汽、环氧乙烷和其他的低温灭菌过程的生物监测。
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3M™Attest™压力蒸汽灭菌标准生物测试包能够可靠地检测压力蒸汽灭菌过程的生物监测结果。通过培养基颜色变化，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。该生物测试包用于132℃预真空压力蒸汽灭菌器时在132℃运行≥4分钟。
1-在生物测试包标签上注明灭菌器，负荷数，灭菌日期，将测试包置于灭菌器最难灭菌的位置。
2-最难灭菌的位置，通常是底层，近门或排气口上面。
3-正常装载。
4-灭菌循环完毕，取出生物测试包。
注意事项：
冷却之前压碎或过度挤压生物指示剂可能导致玻璃安瓿瓶的破碎，飞溅的碎屑会使人员受伤。因此建议在从灭菌器内取出生物测试包时戴防护眼镜和手套，在从测试包内取出及压碎生物指示剂时也需要戴防护眼镜。
1－从灭菌器内取出测试包，打开散热5分钟后才能取出生物指示剂，在压碎之前，让生物指示剂在培养器外再冷却10分钟后才能压碎。
2－检查生物指示剂标签上的化学指示剂，颜色由玫瑰色变成棕色证明生物指示剂经过压力蒸汽灭菌过程的处理。该颜色的变化并非表明该处理达到灭菌的目的，如果化学指示剂没有变化，请检查灭菌过程。
3－戴上防护眼镜，挤碎安瓿瓶，然后在56±2°C培养生物指示剂。
4－每次培养须同时培养一个未处理的测试包的生物指示剂进行阳性对照，包内阳性对照生物指示剂与处理的生物指示剂为相同制造日期和标号。
阳性对照的目的是保证：1）－正确的培养条件
2）－指示剂的活性（不适当的贮存条件可影响有效期内的指示剂活性）
3）- 培养基促进细菌快速生长的能力
5－通过颜色变化检测生物监测结果，随时监测阳性结果出现，如8、12、24，直至48小时（2天）。最终视觉效果应在48小时（2天）得出。黄色表明细菌生长，灭菌过程失败。48小时（2天）没有颜色变化（培养基为紫色）表明灭菌过程合格。
8－对任何为阳性生物监测结果应立即采取行动，直至生物指示剂的结果呈阴性。
禁忌：该生物指示剂不能用于121℃预真空和132℃下排气压力蒸汽灭菌锅，及干热、化学蒸汽、环氧乙烷和其他的低温灭菌过程。
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3M™Attest™压力蒸汽灭菌标准生物测试包(快速) 内含有3M™压力蒸汽灭菌生物指示剂(快速)，在与3M™Attest™阅读器配合使用时，能够迅速可靠地检测压力蒸汽灭菌过程的生物监测结果。
通过阅读器观测荧光发生与否或者后继培养基颜色变化与否，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。该生物测试包用于132℃预真空压力蒸汽灭菌器时在132℃运行≥4分钟。
1-在生物测试包标签上注明灭菌器，负荷数，灭菌日期，并将测试包置于灭菌器最难灭菌的位置。
2-最难灭菌的位置，通常是底层，近门或排气口上面。
3-正常装载。
4-灭菌循环完毕，取出生物测试包。
注意事项：
冷却之前压碎或过度挤压生物指示剂可能导致玻璃安瓿瓶的破碎，飞溅的碎屑会使人员受伤。因此建议在从灭菌器内取出生物测试包时戴防护眼镜和手套，在从包内取出生物指示剂及压碎时也需要戴防护眼镜。
1－从灭菌器内取出测试包，打开散热5分钟后才能取出生物指示剂，在压碎之前，让生物指示剂在阅读器外再冷却10分钟后才能压碎，不要用手指压碎玻璃安瓿瓶。
2－检查生物指示剂标签上的化学指示剂，颜色由玫瑰色变成棕色证明生物指示剂经过压力蒸汽灭菌过程的处理。该颜色的变化并非表明该处理达到灭菌的目的，如果化学指示剂没有变化，请检查灭菌过程。
3－戴上防护眼镜，挤碎安瓿瓶，然后培养生物指示剂。详细步骤请参阅Attest™290阅读器操作说明。
4－每次培养须同时培养一个未处理的生物测试包的指示剂进行阳性对照，包内阳性对照生物指示剂与处理的生物指示剂为相同制造日期和标号。
阳性对照的目的是保证：1）－正确的培养条件
2）－指示剂的活性（不适当的贮存条件可影响有效期内的指示剂活性）
3）－Attest™阅读器功能完好
5－在Attest™阅读器60+/-20C内，培养阳性对照和已处理的指示剂3小时，读出最终结果。阳性对照必须得出荧光阳性结果(阅读器显示为红灯或+)，如阳性对照读出荧光阴性(绿灯或-)，应检查阅读器温度和紫外灯，直至阳性对照为阳性结果，生物监测的结果才是有效的。对于经过灭菌处理的指示剂，荧光阳性(红灯或+)表明灭菌过程失败，荧光阴性(绿灯或-)表明灭菌过程合格。
6－如果通过颜色变化检测生物监测结果，应在阅读器内继续培养，如培养基仍为紫色，检查阅读器温度和贮存条件。该指示剂应在专门的阅读器60+/-20C的湿性环境中培养，避免干燥。随时监察阳性结果的出现,如8、12、24，直至168小时（7天）。最终视觉效果应在168小时（7天）得出。黄色表明细菌生长，灭菌过程失败。168小时（7天）没有颜色变化（培养基为紫色）表明灭菌过程合格。
7－对任何阳性生物监测结果应立即采取行动，直至生物测试包内生物指示剂的结果呈阴性。
禁忌：该生物测试包不能用于121℃预真空和132℃下排气压力蒸汽灭菌锅，及干热、化学蒸汽、环氧乙烷和其他的低温灭菌过程。
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该产品用于压力蒸汽灭菌过程常规检测。该产品用于121°C（≥30分钟）下排气或132°C（≥4分钟）预真空压力蒸汽灭菌器中装载棉布包、金属器械及硬质容器等的灭菌监测。每个测试包含一个1292 3M™ATTEST™压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速)(棕色瓶盖)，一片记录卡，和一个1243 3MTM压力蒸汽灭菌包内化学指示卡(爬行式)。在蒸汽条件下，化学指示卡中的黑色颜料染料条达到或通过ACCEPT区，并且1292安瓿瓶上的化学指示剂由玫瑰色变为棕色，同时培养和阅读1292生物指示剂。
1292 3M™ATTEST™压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速) 是一种双重阅读生物指示系统，当结合3M ATTEST 190/290阅读器共用时，可以快速可靠的监测压力蒸汽灭菌过程。1292 3M™ATTEST™压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速) 通过酶活性的灭活与否，探测嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活。通过非荧光培养基中酶分解产生的荧光剂来检测酶的存在。荧光剂的产生可以通过3M ATTEST 190/290阅读器检测。荧光剂的变化指示压力蒸汽灭菌过程失败。
1292 3M™ATTEST™压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速) 也可以通过可见的颜色变化判断嗜热脂肪杆菌芽孢的存在。嗜热脂肪杆菌芽孢的繁殖和代谢会产生酸性副产品，pH降低导致培养基颜色由紫色变为黄色，指示压力蒸汽灭菌过程的失败。然而，由于3小时荧光结果的高灵敏性，就没必要培养1292 3M™ATTEST™压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速)超过3小时。
使用方法:
1. 将该测试包标签朝上放在满负载的灭菌器中最难灭菌的区域，通常为灭菌器底层、近门处和排气口上方。
2. 按照程序运行灭菌循环。
3. 灭菌循环结束后，佩戴好防护眼镜和手套将灭菌器的门完全打开冷却至少5分钟，然后取出测试包。
4. 打开测试包冷却5分钟，然后取出生物指示剂再冷却10分钟后才能压碎。
5. 取出指示剂。
6. 阅读1243化学指示卡。当黑色颜料块到达化学指示卡的ACCEPT窗口时说明整个灭菌负荷达到灭菌条件；当黑色颜料块没有到达化学指示卡的ACCEPT窗口时即在REJECT区域时说明未达到灭菌条件。视为灭菌失败，此时须察看灭菌过程。
7. 检查1292生物指示剂标签上的化学指示剂，颜色由玫瑰色变成棕色证明生物指示剂经过压力蒸汽灭菌过程的处理。该颜色的变化并非表明该处理达到灭菌的目的，如果化学指示剂没有变化，请检查灭菌过程。
8. 在1292生物指示剂标签上注明灭菌器锅号, 负荷数量, 灭菌日期。
9. 在记录卡和1243化学指示卡背面填写必要的灭菌信息作为永久记录；记录生物指示剂的监测结果。
10. 丢弃测试包，因为该测试包为一次性使用，反复使用导致测试结果无效。
11. 戴上防护眼镜，挤碎安瓿，然后培养生物指示剂。详细步骤请参阅3M ATTEST 190/290 培养锅操作说明。
12. 每次培养须同时培养一个未灭菌过的1292生物指示剂进行阳性对照，阳性对照生物指示剂与经过灭菌处理的生物指示剂为相同生产日期和批号。
13. 在阳性对照1292指示剂标签上注明C和日期。挤碎安瓿，然后培养阳性对照生物指示剂。详细步骤请参阅3M ATTEST 190/290 培养锅操作说明。
14. 在3M ATTEST 190/290 培养锅内，培养阳性对照和已处理的指示剂3小时，读出最终结果。
15. 得到结果后，可丢弃生物指示剂。也可以通过阳性对照生物指示剂的目测颜色变化来指示蒸汽灭菌过程。这样可以确保：
 正确的培养条件
 指示剂的活性（不适当的贮存条件可能影响有效期内的指示剂活性）
 培养基的能力
3M ATTEST 190/290 培养锅功能完好
黄色表明细菌生长，灭菌过程失败。没有颜色变化表明灭菌过程合格。最终阴性结果应在培养48小时后得出。阳性对照为阳性结果时，生物监测的结果才是有效的。
16. 记录经过灭菌过程和阳性对照指示剂的结果。对任何结果为阳性的生物监测结果应立即采取行动。如追回同锅次的灭菌物品，和寻找原因。直至生物指示剂的结果呈阴性。
警告：
冷却之前压碎或过度处理生物指示剂可能导致玻璃安瓿的破碎，飞溅的碎屑会使人员受伤，因此需要注意以下事项：
 将安瓿瓶挤碎前需要冷却一定时间
 从灭菌器内取出生物指示剂时戴防护眼镜和手套
 在压碎生物指示剂时也需要戴防护眼镜
 不要用手指直接挤碎玻璃安瓿瓶
 不要在手指间滚动瓶子避免弄湿孢子带

㈡ 怎样进行高压灭菌生物监测法

用生物指示剂（自含式）：
1、将自含式生物指示剂置于灭菌最难达到的位置；
2、对负载灭菌，应根据有关规定，放置遍及负载的足够数量的自含式生物指示剂。注：建议不少于2个，通常每个循环使用10个。
3、使负载暴露于一个灭菌循环；
4、暴露后，在负载冷却或接触空气时尽快取出自含式生物指示剂；
5、压碎装有培养基的小玻璃瓶；
6、在适宜条件下培养，达规定时间后进行观察，读取结果；
7、若经过一个灭菌周期后，若有芽孢存活，则培养液会变浑浊或由紫色变为黄色；若芽孢被全部杀死，则培养液会保持最初的颜色。
8、记录试验结果；
9、阳性样品需经高压蒸汽灭菌处理。

自含式生物指示剂是一种带培养液的生物指示剂，根据其构造的不同可分为两类，一类是将菌片与装有培养液的小玻璃安瓿同放在一塑料软管中，软管顶端有滤纸封好的通气孔，灭菌后压碎安瓿，培养液与菌片混合之后培养观察；另一类是将培养液与细菌芽孢一同封于小玻璃安瓿中制成，灭菌后直接进行培养观察。不同类型的自含式生物指示剂适用于不同的灭菌方法、灭菌环境。自含式生物指示剂使用方便，具有无需无菌移种和无菌配制培养基、可避免假阳性结果、且培养时间短等优点，在医疗卫生及工业领域应用广泛。

㈢ 医用高压锅生物指示剂监测方法

每周监测一次，可以用自含式的压力蒸汽灭菌生物指示剂，随同待灭菌物品一起放到里面进行灭菌，灭菌后56℃培养48小时，观察颜色变化，如颜色依然为淡紫色，说明灭菌合格；注意，要有一支没经过灭菌的作阳性对照试验。

㈣ 高压灭菌的温度,时间,适用范围,如何对高压灭菌效果进行监测

压力蒸汽灭菌效果监测包括物理监测、化学监测和生物监测。
(1)物理监测：每次灭菌应连续监测并记录灭菌时的温度、压力和时间等灭菌参数。温度波动范围在+3℃以内，时间满足最低灭菌时间的要求，同时应记录所有临界点的时间、温度与压力值，结果应符合灭菌的要求。
(2)化学监测：包括包外、包内化学指示物监测。具体要求为灭菌包包外应有化学指示物，高度危险性物品包内应放置包内化学指示物，放于包内最难灭菌的部位。通过观察化学指示物颜色的变化，判定是否达到灭菌合格要求。采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时，应直接将包内化学指示物置于待灭菌物品旁进行化学监测。
(3)生物监测：将嗜热脂肪杆菌芽孢片制成标准生物测试包、生物PCD（灭菌过程验证装置），或使用一次性标准生物测试包，对灭菌器的灭菌质量进行生物监测。将生物监测包置于灭菌器最难灭菌的部位，并设阳性对照和阴性对照。根据微生物芽孢的死亡情况来判断灭菌是否成功，考核灭菌器负荷是否达到无菌保障水平，这是确定压力蒸汽灭菌是否有效的最可靠的方法

㈤ 微生物生长的常用检测方法

一、生长量测定法

1.1体积测量法：又称测菌丝浓度法。

通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。

1.2称干重法：

可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activitydryyeast,ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。

1.3比浊法：

微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。

1.4菌丝长度测量法：

对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适

的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长

二、微生物计数法

2.1血球计数板法:

血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1mm2面积上刻有400个小方格。通过油镜观察，统计一定大格内微生物的数量，即可算出1毫升菌液中所含的菌体数。这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。

2.2染色计数法：

为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。借助不同的染料对菌体进行适当的染色，可以更方便的在显微镜下进行活菌计数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液，染色后在显微镜下观察，活细胞为无色，而死细胞为蓝色。

2.3比例计数法：

将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的'细胞浓度。这种计数方法比较粗放。并且需要配制已知颗粒浓度的悬液做标准。

2.4液体稀释法：

对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样，接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN（mostprobablynumber）得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。

2.5平板菌落计数法：

这是一种最常用的活菌计数法。将待测菌液进行梯度稀释，取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在凝固前均匀混合，或将菌液涂布于已凝固的固体培养基平板上。保温培养后，用平板上出现的菌落数乘以菌液稀释度，即可算出原菌液的含菌数。一般以直径9cm的平板上出现50-500个菌落为宜。但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数，而且同时将菌液中的细菌进行了一次分离培养，获得了单克隆。

2.6试剂纸法：

在平板计数法的基础上，发展了小型商品化产品以供快速计数用。形式有小型厚滤纸片，琼脂片等。在滤纸和琼脂片中吸有合适的培养基，其中加入活性指示剂2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，无色）待蘸取测试菌液后置密封包装袋中培养。短期培养后在滤纸上出现一定密度的玫瑰色微小菌落与标准纸色板上图谱比较即可估算出样品的含菌量。试剂纸法计数快捷准确，相比而言避免了平板计数法的人为操作误差。

2.7膜过滤法：

用特殊的滤膜过滤一定体积的含菌样品，经丫叮橙染色，在紫外显微镜下观察细胞的荧光，活细胞会发橙色荧光，而死细胞则发绿色荧光。

2.8生理指标法：

微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的生理指标很多，它们可作为生长测定的相对值。

2.9测定含氮量：

大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母为7.5%，霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25，即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，如用硫酸，过氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas测N2气法。Dumas测N2气法是将样品与CuO混合，在CO2气流中加热后产生氮气，收集在呼吸计中，用KOH吸去CO2后即可测出N2的量。

2.10测定含碳量：

将少量（干重0.2-2.0mg）生物材料混入1毫升水或无机缓冲液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在1000C下加热30分钟后冷却。加水稀释至5毫升，在580nm的波长下读取吸光光度值，即可推算出生长量。需用试剂做空白对照，用标准样品做标准曲线。

2.11还原糖测定法：

还原糖通常是指单糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通过还原糖的测定可间接反映微生物的生长状况，常用于大规模工业发酵生产上微生物生长的常规监测。方法是，离心发酵液，取上清液，加入斐林试剂，沸水浴煮沸3分钟，取出加少许盐酸酸化，加入Na2S2O3临近终点时加入淀粉溶液，继续加Na2S2O3至终点，查表读出还原糖的含量。

2.12氨基氮的测定：

方法是，离心发酵液，取上清液，加入甲基红和盐酸作指示剂，加入0.02N的NaOH调色至颜色刚刚褪去，加入底物18%的中性甲醛，反应数刻，加入0.02N的使之变色，根据NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根据培养液中氨基氮的含量，可间接反映微生物的生长状况。

2.13其他生理物质的测定：

P，DNA，RNA，ATP，NAM（乙酰胞壁酸）等含量以及产酸，产气，产CO2（用标记葡萄糖做基质），耗氧，黏度，产热等指标，都可用于生长量的测定。也可以根据反应前后的基质浓度变化，最终产气量，微生物活性三方面的测定反映微生物的生长。如我所在BMP-2的发酵生产上，随时监测溶氧量的变化和酸碱度的变化，判断细菌的长势。

拓展：微生物的现代定义

肉眼难以看清，需要借助光学显微镜或电子显微镜才能观察到的一切微小生物的总称。微生物包括细菌、病毒、真菌和少数藻类等。（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。）病毒是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的“非细胞生物”，但是它的生存必须依赖于活细胞。根据存在的不同环境分为空间微生物、海洋微生物等，按照细胞结构分类分为原核微生物和真核微生物。

微生物的主要特征

体小面大

一个体积恒定的物体，被切割的越小，其相对表面积越大。微生物体积很小，如一个典型的球菌，其体积约1mm，可是其表面积却很大。这个特征也是赋予微生物其他如代谢快等特性的基础。

吸多转快

微生物通常具有极其高效的生物化学转化能力。据研究，乳糖菌在1个小时之内能够分解其自身重量1000-10000倍的乳糖，产朊假丝酵母菌的蛋白合成能力是大豆蛋白合成能力的100倍。

生长繁殖快

相比于大型动物，微生物具有极高的生长繁殖速度。大肠杆菌能够在12.5-20分钟内繁殖1次。不妨计算一下，1个大肠杆菌假设20分钟分裂1次，1小时3次，1昼夜24小时分裂24×3=72次，大概可产生4722366500万亿个（2的72次方），这是非常巨大的数字。但事实上，由于各种条件的限制，如营养缺失、竞争加剧、生存环境恶化等原因，微生物无法完全达到这种指数级增长。 已知大多数微生物生长的最佳pH范围为7.0 (6.6~7.5)附近，部分则低于4.0。

微生物的这一特性使其在工业上有广泛的应用，如发酵、单细胞蛋白等。微生物是人类不可或缺的好朋友。

适应强 易变异

分布广 种类多

微生物对我们生活的影响

微生物对人类最重要的影响之一是导致传染病的流行。在人类疾病中有50%是由病毒引起。微生物导致人类疾病的历史，也就是人类与之不断斗争的历史。在疾病的预防和治疗方面，人类取得了长足的进展，但是新现和再现的微生物感染还是不断发生，像大量的病毒性疾病一直缺乏有效的治疗药物。一些疾病的致病机制并不清楚。大量的广谱抗生素的滥用造成了强大的选择压力，使许多菌株发生变异，导致耐药性的产生，人类健康受到新的威胁。一些分节段的病毒之间可以通过重组或重配发生变异，最典型的例子就是流行性感冒病毒。每次流感大流行流感病毒都与前次导致感染的株型发生了变异，这种快速的变异给疫苗的设计和治疗造成了很大的障碍。而耐药性结核杆菌的出现使原本已近控制住的结核感染又在世界范围内猖獗起来。

微生物千姿百态，有些是腐败性的，即引起食品气味和组织结构发生不良变化。当然有些微生物是有益的，它们可用来生产如奶酪，面包，泡菜，啤酒和葡萄酒。微生物非常小，必须通过显微镜放大约1000 倍才能看到。比如中等大小的细菌，1000个叠加在一起只有句号那么大。

微生物能够致病，能够造成食品、布匹、皮革等发霉腐烂，但微生物也有有益的一面。最早是弗莱明从青霉菌抑制其它细菌的生长中发现了青霉素，这对医药界来讲是一个划时代的发现。后来大量的抗生素从放线菌等的代谢产物中筛选出来。抗生素的使用在第二次世界大战中挽救了无数人的生命。一些微生物被广泛应用于工业发酵，生产乙醇、食品及各种酶制剂等；一部分微生物能够降解塑料、处理废水废气等等，并且可再生资源的潜力极大，称为环保微生物；还有一些能在极端环境中生存的微生物，例如：高温、低温、高盐、高碱以及高辐射等普通生命体不能生存的环境，依然存在着一部分微生物等等。看上去，我们发现的微生物已经很多，但实际上由于培养方式等技术手段的限制，人类现今发现的微生物还只占自然界中存在的微生物的很少一部分。

微生物间的相互作用机制也相当奥妙。例如健康人肠道中即有大量细菌存在，称为正常菌群，其中包含的细菌种类高达上百种。在肠道环境中这些细菌相互依存，互惠共生。食物、有毒物质甚至药物的分解与吸收，菌群在这些过程中发挥的作用，以及细菌之间的相互作用机制还不明了。一旦菌群失调，就会引起腹泻。

随着医学研究进入分子水平，人们对基因、遗传物质等专业术语也日渐熟悉。人们认识到，是遗传信息决定了生物体具有的生命特征，包括外部形态以及从事的生命活动等等，而生物体的基因组正是这些遗传信息的携带者。因此阐明生物体基因组携带的遗传信息，将大大有助于揭示生命的起源和奥秘。

工业微生物涉及食品、制药、冶金、采矿、石油、皮革、轻化工等多种行业。通过微生物发酵途径生产抗生素、丁醇、维生素C以及一些风味食品的制备等；某些特殊微生物酶参与皮革脱毛、冶金、采油采矿等生产过程，甚至直接作为洗衣粉等的添加剂；另外还有一些微生物的代谢产物可以作为天然的微生物杀虫剂广泛应用于农业生产。通过对枯草芽孢杆菌的基因组研究，发现了一系列与抗生素及重要工业用酶的产生相关的基因。乳酸杆菌作为一种重要的微生态调节剂参与食品发酵过程，对其进行的基因组学研究将有利于找到关键的功能基因，然后对菌株加以改造，使其更适于工业化的生产过程。国内维生素C两步发酵法生产过程中的关键菌株氧化葡萄糖酸杆菌的基因组研究，将在基因组测序完成的前提下找到与维生素C生产相关的重要代谢功能基因，经基因工程改造，实现新的工程菌株的构建，简化生产步骤，降低生产成本，继而实现经济效益的大幅度提升。对工业微生物开展的基因组研究，不断发现新的特殊酶基因及重要代谢过程和代谢产物生成相关的功能基因，并将其应用于生产以及传统工业、工艺的改造，同时推动现代生物技术的迅速发展。

经济作物柑橘的致病菌是国际上第一个发表了全序列的植物致病微生物。还有一些在分类学、生理学和经济价值上非常重要的农业微生物，例如：胡萝卜欧文氏菌、植物致病性假单胞菌以及中国正在开展的黄单胞菌的研究等正在进行之中。日前植物固氮根瘤菌的全序列也刚刚测定完成。借鉴已经较为成熟的从人类病原微生物的基因组学信息筛选治疗性药物的方案，可以尝试性地应用到植物病原体上。特别像柑橘的致病菌这种需要昆虫媒介才能完成生活周期的种类，除了杀虫剂能阻断其生活周期以外，只能通过遗传学研究找到毒力相关因子，寻找抗性靶位以发展更有效的控制对策。固氮菌全部遗传信息的解析对于开发利用其固氮关键基因提高农作物的产量和质量也具有重要的意义。[10]

在极端环境下能够生长的微生物称为极端微生物，又称嗜极菌。嗜极菌对极端环境具有很强的适应性，极端微生物基因组的研究有助于从分子水平研究极限条件下微生物的适应性，加深对生命本质的认识。

㈥ 怎样进行压力蒸汽灭菌生物监测谢谢

1、检测方法:
将压力蒸汽灭菌生物指示剂放于标准测试包中，分别将测试包放于锅内不同位置，灭菌完毕，取出该生物指示剂，挤破内含的安瓿，于56℃培养锅内培养，48小时后阅读结果。
2、结果判定:
每个指示剂接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基都不变色，判定为灭菌合格；指示菌片之一接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基，由紫色变为黄色时，则灭菌过程不合格。
3、注意事项:
监测所用菌片须经卫生部认可，并在有效期内使用。生物指示物监测应1月1次。