㈠ 基因工程中的ICM是什么
inner cell mass (abbreviated ICM and also known as the embryoblast or pluriblast）
也就是胚胎早期,中间的那个纤山纯细胞毁咐陀,由多能干细胞组成唯拦
㈡ 生物信息学笔记-术语篇
它是一种度量两个变量间相关程度的方法。它是一个介于 1 和 -1 之间的值，其中，1 表示变量完全正相关， 0 表示无关，-1 表示完全负相关。
r值就是皮尔逊相关系数的大小，代表了相关的强度，即两个变量共变性的程度，取值范围为（-1,1）。
p值是显着性，与皮尔逊相关显着性检验有关，P<0.05时表示相关显着，即在当前的样本下可以明显的观察到两变量的相关，两个变量的相关有统计学意义。
能提供有关数据位置和分散情况的关键信息，尤其在比较不同的母体数据时更可表现其差异。
如上图所示，标示了图中每条线表示的含义，其中应用到了分位值（数）的概念。
随访研究，如对 某人群进行跟踪，直至出现一个特殊事件或终点，如死亡、癌症复发等，对所有研究对象从某特定时间点开始追踪，记录出现特殊事件的时间。通常，当所有研究对 象出现该事件时研究才结束，但也有些研究对象可能失访，或者研究提前结束，这样就有一些对象的结局未知，对这些对象记录跟踪的时间（截尾数据）。
假设检验 是推断统计中的一项重要内容。用SAS、SPSS等专业统计软件进行假设检验，在假设检验中常见到P值( P-Value，Probability，Pr)，P值是进行检验决策的另一个依据。
P值即概率，反映某一事件发生的可能性大小。统计学根据显着性检验方法所得到的P 值，一般以P < 0.05 为显着， P<0.01 为非常显着，其含义是样本间的差异由抽样误差所致的概率小于0.05 或0.01。实际上，P值不能赋予数据任何重要性，只能说明某事件发生的机率。
主要包含六个数据节点，将一组数据从大到小排列，分别计算出他的上边缘，上 四分位数 Q3， 中位数 ，下四分位数Q1，下边缘，还有一个 异常值 。
是表示这两组之间的生存率是否有差异。
因为一般生存分析研究的都是一个实验组的治疗方法之类的， 一个对照组的传统方法之类。通过生存分析对比，可以发现两组生存率之间是否存在差异，继而说明两种实验处理是否有差异，或者哪种处理更有效
是整体比较，比如你的生存时间是5年的，那自然是比较整体5年下来的生存率，如果你的生存时间是10年的跟踪数据，那自然是比较整体10年下来的生存率。
生存分析比较的生存率，本来就是一个整体一段时间持续下来的生存率，而不是单个时间点的生存率
数据标准化是指：数值减去均值，再除以标准差;所谓中心化， 是指变量减去它的均值.
又称蛋白质印迹(Western blotting)，是一种借助特异性抗体鉴定抗原的有效方法。该方法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术，既具有凝胶电泳的高分辨率又具备固相免疫测定的高特异性和高灵敏性，可检测1－5ng的中等大小蛋白。其优点是方法简便、标本可长期保存、结果便于比较，故被广泛应用于分子生物学等领域，成为一种常用的一种研究方法。
保守性一般是在进化理论中应用较多，“保守性好”指的是发生突变的几率低。以蛋白为例，一般用于进化或物种亲缘关系分析的蛋白都含有可变部分——非保守区，和稳定部分——保守区。
顺式作用元件(cis-acting element)是指DNA分子上对基因表达有调节活性的特定核苷酸序列。顺式作用元件的活性只影响同一DNA分子上的基因。这种DNA序列多位于基因上游或内含子中。
真核基因的顺式作用元件按其功能可以分为：启动子、增强子和静止子。
启动子的结构和功能
启动子是转录因子和RNA聚合酶的结合位点，位于受其调控的基因上游，邻近基因转录起始点，是基因的一部分。
增强子的结构和功能
增强子（enhancer），又称强化子（transcriptional enhancer），是一种远端调控元件，至少距转录起始点上游100bp以上，通常位于－700～－1000处，所以又称为上游激活序列(upstream activator sequence, UAS)。
增强子也要通过与特定的蛋白质因子(转录因子)结合而实现其对转录的增强作用。
静止子
是一种类似增强子但起负调控作用的顺式作用元件。有人称为沉默基因。静止子与相应的反式作用因子结合后，可以使正调控系统失去作用。
不论是启动子还是增强子序列，他们的转录调节功能都是通过与特定的DNA结合蛋白的相互作用而实现的。
真核生物的RNA聚合酶与原核生物的RNA聚合酶不同，它本身不能启动转录，纯化了的真核生物RNA聚合酶在体外是不能启动转录的。因此必须事先有一套转录因子装配到启动子上，RNA聚合酶才能启动转录。
这些转录因子一般并不是RNA聚合酶的组成成分。
能直接或间接识别各种顺式调控元件并与之结合从而调控基因转录效率的各种蛋白质分子称为反式作用因子 (trans-acting factor)。
能激活真核生物基因转录的蛋白质称为转录因子(transcription factor, TF)。转录因子是参与正调控的反式作用因子，是转录起始过程中RNA聚合酶所需要的辅助因子。
是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。
将混合抗原样品在凝胶板上进行单向或双向电泳分离, 然后取 固定化 基质膜与凝胶相贴。在印迹纸的自然吸附力、 电场力 或其它外力作用下, 使凝胶中的单一抗原组份转移到印迹纸上, 并且固相化。最后应用免疫覆盖液技术如免疫同位素探针或免疫酶探针等, 对抗原固定化 基质 膜进行检测和分析。
有时称为短干扰RNA（short interfering RNA）或沉默RNA（silencing RNA），是一个长20到25个 核苷酸 的双股RNA，在生物学上有许多不同的用途。
CpG表示核苷酸对，其中G在DNA链中紧随C后。CpG对很少出现在人类基因中。然而，在许多基因的 启动子 （promotor）或 转录起始位点 （transcription start site，TSS）区域周围， 甲基化 经常被抑制。这些区域包含浓度相对较高的CpG对，与染色体一起称作 CpG岛 ，其长度通常在几百到几千核苷酸的长度内变化。
CpG双核苷酸在人类基因组中的分布很不均一，而在基因组的某些区段，CpG保持或高于正常概率，这些区段被称作CpG岛，在哺乳动物基因组中的1~2kb的DNA片段，它富含非甲基化的CpG双倍体。
所谓阴性和阳性指的是细胞生存下来的条件。阳性选择指的是只有反应的细胞才能生存，否则凋亡。阴性选择指的是只有不反应的细胞才能生存，否则凋亡。
对于B细胞来说
阴性选择指的是只有在骨髓发育中不予自身抗原反应的B细胞才能生存；阳性选择指的是在外周在体细胞高频突变的过程中能高亲和力识别T细胞提呈的B细胞才能增殖。B细胞是先阴选后阳选
对于T细胞来说
阳性选择指的是只有在胸腺皮质发育中识别MHC分子的T细胞才能生存；阴性选择指的是只有在胸腺髓质发育中不予自身抗原反应的T细胞才能生存；T细胞是先阳选后阴选
一般指基因组中由短的重复单元(一般为1～6个碱基)组成的DNA串联重复序列。
微卫星DNA符合孟德尔遗传模式，共显性表达，广泛分布于真核生物的基因组中，包括编码区和非编码区.研究表明，可能是DNA复制过程中的“链滑”(strand slippage)现象造成微卫星DNA多态性信息容量(polymorphic information content, PIC)较高.
由于微卫星具有数量多、在基因组内分布均匀、多态性信息丰富、易于检测等优点被作为优良的遗传标记(genetic marker)而得到广泛应用。
根据重复单元的构成与分布,微卫星DNA序列被分为3种类型：单一型(pure)，复合型(compound)和间断型(interrupted), 例如:
单一型:ATATATATATATATATATATATAT
复合型: ATATATCACACACACACACAC
间断型: ATATATCA ATATATCA ATATATA
某一物种的染色体图谱（也就是我们所知的连锁图谱），显示所知的基因和/或遗传标记的相对位置，而不是在每条染色体上特殊的物理位置。由遗传重组测验结果推算出来的、在一条染色体上可以发生的突变座位的直线排列（基因位点的排列）图。
遗传图谱即遗传连锁图谱，是基因组研究中的一个重要组成部分，它是指基因组中基因以及专一的多态性标记之间相对位置的图谱。即通过两点测验和三点测验对统计的各种带型个体数进行连锁分析计算，建立连锁群。也可从第二个标记开始，测验与前一个标记是否协同分离。根据分离资料，用最大似然法估计不同标记位点间的重组率数值并转换成遗传距离，连锁的遗传标记间距离，一般用cM表示，IcM为同源染色体配对期望交换值1%的染色体长度。随着计算机技术的发展，目前已有多个构建遗传图谱的软件，研究者用的较多的软件主要有MapMaker及 JoinMap 3.0 。
在某些情况下，待检验样本中不含待测物质或者含有但是浓度很低，为了证明自己建立的方法能对样本中待测物质进行有效的检测，可在待检样本中加入一定量的待测物质（外标）来进行该方法检测能力的验证。有时，这种加入外标的物质，也可用作为阳性对照。
In genetics, a mosaic, or mosaicism describes the presence of two or more populations of cells with different genotypes in one indivial, who has developed from a single fertilized egg.Mosaicism has been reported to be present in as high as 70% of cleavage stage embryos and 90% of blastocyst-stage embryos derived from in vitro fertilization.
WGA是一组对全部基因组序列进行 非选择性扩增的技术，其目的是在没有序列倾向性的前提下大幅度增加 DNA 的总量。其中最具代表性方法是 DOP-PCR 和 PEP-PCR。 DOP-PCR 和 PEP-PCR 的基本原理都是通过其随机引物与基因组 DNA 多处退火从而使大部分基因组序列得到扩增。DOP-PCR 的引物是由其 3′和 5′端的特异核苷酸序列和中间的 6 个核苷酸构成的随机引物组成。PEP-PCR 的引物是由15 个随机核苷酸组成的完全随 机引物。
㈢ icm在医学是什么意思
内细胞团(Inner Cell Mass)
㈣ 什么是ICM
应该是.ICM
21世纪商品分销模式的重大创新突破ICM的定义和原理
交互式合作营销是一种独创的崭新营销模式，其英文表述为∶Interactive Cooperation Marketing，简称∶ICM。它独创了顾客成为经营者且平等参与社会财富分配的新型商业营销模式，提出了21世纪商品分销和零售领域的游戏规则---“顾客同我们都是老板”！打破了20世纪商品分销和零售领悉晌迅域的游戏规则---“顾客是我们的老板”！把顾客与零售终端消费的关系只是一买一卖的纯顾客关系变成了跟零售消费终端是合作经营的生意伙伴关系。ICM的诞生并非一夜空穴来风，它是集体智慧结晶之结果，是许多营销专家、企业管理专家以及许多有识之士艰苦卓绝努力探索之结果，是西方营销文化同东方文化相互交融之结果，是21世纪挑战和机遇并存而改变旧观念大胆创新之结果，是有识之士复兴中华梦想的伟大使命之结果！
一、ICM的基本原理
ICM的基本原理∶消费者通过自身的完善和进步与企业一道去影响其它消费者在同一消费终端消费或者影响其它自然人或法人成为消费终端的方式且多劳多得而获取佣金收入的一种企业产品分销模式。
ICM有6大特点∶
1、它是全世界最简单的一种个人生意模式；
2、它是企业最迅速、最公道、最人性的产品分销模式；
3、它提供全球高品质的产品和商品；
4、它是当今各种营销模式（如整合营销、数据库营销、绿色营销、一对一营销、体验营销等）的集合体；
5、它是未来营销模式致高境界“五网合一”的模式，即消费含零售终端网络、顾客消费网络、电子商务网络、物流配送网络、电脑数据库及信息网络，这五种网络系统合而为一的网络化模式；
6、它属于第三个经济时代产品经济时代、服务经济时代、体验经济时代，即体验经济时代的体验营销模式。
怎样理解ICM Interactive Cooperation Marketing的简称？简单地讲ICM既是一种公司创业模式又是一种个人创业模式。为了使读者深入了解ICM，这里我们以个人创业模式为由来谈一谈。
如果说“进商场或店铺买东西给您发奖金”是ICM。那么，有人会讲，那有这种好事！如果有，还不是“羊毛出在羊身上”。玩这种游戏的商场或店铺里我见得多了，比如石家庄“女人世界商场”就是购物返还你50%的现金！她讲得很有道理，所以，这不是ICM。
如果说进商场买东西给您发奖金倒不假，比如北京当代商城就是这么做。如果您在当代商城年消费额累计在10000~29999元，它就返还给您2%的礼金券或者赠送礼品。也就是讲当您购物累计到10000元时，它返还您200元与之相当价值的东西，反正不是现金。我们说这300%肯定不是ICM。
如果说“给您一个赚钱的机会”是ICM。您会说赚钱的机会多了，报纸上天天都有“给您一个发财的机会”，那报纸上的机会不是都成了谨帆交互式合作营销了。看来这也不是ICM。
如果说“您只要推荐或介绍别人进商场或店铺买东西您就有钱赚”是ICM。听起来有一点道理，不过会有“非法传销”的嫌疑，甚至会与“非法传销”划等号。由此看来这也揭示不了ICM的内涵。
如果说“给您一个梦想成真的机会”是ICM。您会讲，这跟“给您一个发财的机会”有什么区别！看来这也说明不了ICM，善于“联想”的人很容易又与“非法传销”划等号，因为“非法传销”就是这么“喊”的。
如果说“消费者都可以平等地成为经营者参与社会财富分配的一个机会”是ICM。听起来倒挺顺耳，不过消费者怎样才能平等地参与社会财富分配？几百年都没解决，怎么今天您解决了？反正死活不相信。等您解释清楚，他也睁此听得不耐烦了。看来这样理解ICM也不行。
如果说“专门有人教您挣钱的方式”是ICM。您说我暂且相信有这种好事。您会问教我挣钱那他挣不挣钱？我说几乎不挣或挣得很少。您会问教我挣钱而他不挣钱？那他吃什么？反而把我问倒；如果说他当然挣您钱。您会问那他挣我多少钱？如果我说少了，您不相信；如果我说多了，您说他太黑，您不干！看来这也揭示不了ICM的内涵。
如果说“您替商场或店铺卖商品，然后商场或店铺按你的销售额给您返一定比例的奖金给你”是ICM。您说大街上那家公司不是这样做。这跟推销有什么区别？看来这也不是ICM。
如果说“培养您如何当老板建立自己的生意”是ICM。您会说人人都想当老板，但是我天生不是当老板的料！我说当老板很简单。您会说既然当老板很简单，那为什么这个世界还是老板少，打工的多？反而我没有道理了。看来这也不是ICM。
如果说ICM是就是建立一个“网络”的生意。您会问是不是又是“非法传销”？我说“网络”是一个非常宽泛的概念。建立“营销网络”几乎是所有公司的一个最基本的营销手段。ICM当然是要建立“营销网络”的，但“营销网络”不一定是传销！保险公司也在做“网络”，麦当劳也在做“网络”，三九集团也在做“医药连琐网络”。
由此看来，想用一句话说明什么是ICM恐怕不行，二句话恐怕也不行！我们把ICM的基本内涵讲出来，你来总结应该怎样正确理解ICM？首先我们应该懂得人性中的几个真理∶
ⅰ、人人都想过美好的生活！
ⅱ、人人都渴望经济自由！
ⅲ、人人都愿意努力！
ⅳ、人人都对陌生的东西害怕！
ⅴ、人人都渴望被别人尊重！
ⅵ、人人都渴望成为传奇式人物！
在商品经济社会中，人们最渴望得到二种东西∶一种是经济自由；一种是渴望成为传奇式人物！一些人对经济自由要求强烈一点，而成为传奇式人物要求弱一点，这是大部份人；而一些人对成为传奇式人物要求强烈一点，而对经济自由要求弱一点，这是少部份人。我们知道营销的本质在于“发现”人的需要和欲望needs and wants并且“满足”她。那么，怎样去满足人们的这二个需要和欲望呢？仅靠打工不是不可以，但是一般比较难！这是少数人的权利。那怎样让大多数人也拥有这个权利？就成为了ICM的基本出发点。
但问题又出来了，先说经济自由这个问题。我们先讲一个真理∶人人都可以得到经济自由。那又为什么多数人没有得到经济自由呢？我们说人人都可以得到经济自由，这是一个真理，但是并不是人人都愿意为了实现经济自由而努力的，因为愿意努力的只是一部分人，这也是一个真理。ICM是给愿意实现经济自由的人搭建的一个平台。这个平台对任何人任何消费者都是一样的。不会因为您是明星就特别关照您，也不会因为您是普通百姓就对您不公平。用一句话来讲就是∶ICM是给愿意实现经济自由的人或消费者搭建的一个可以通过其努力实现经济自由的平台。这是它的第一层含义。
怎么搭建呢？问题又出来了∶一是消费者没有太多的“有形资本”，即看得见，摸得着的资本，比如货币、房产等。二是消费者缺乏“无形资本”，即看不见，摸不着的资本，比如知识、经验、信息等。三是消费者从来没有做过老板，她害怕！她怀疑自己到底行不行？她对成功有本能的恐惧！而且，您又不可能借给消费者一笔钱；其二，您又不可能送给消费者股份，让她成为您的股东？其三，您又不可能教消费者如何挣钱？即使教几乎都要免费！所以，在这种情况下，在20世纪工业化为背景的条件下，您要给愿意实现经济自由的人或消费者搭建的一个通过其努力实现经济自由的平台，几乎难于做到！但难不等于不可能，20世纪做不到，但21世纪就有可能做到。唯一的办法就是二个字∶创新！所以我们讲21世纪是一个以创新为第一生存法则的世纪。那么又怎样创新呢？就是您要带领消费者推翻“三座大山”∶ 一座是“有形资本”的大山；第二座是“无形资本”的大山；第三座是“对成功本能的恐惧”的大山！也就是讲您要让消费者起步的投资他要能够承受；二是要把您如何实现经济自由的知识、经验、信息等教授给他，而且收费也要他能够承受；三是您要教授并且协助他克服“对成功本能的恐惧”。ICM给消费者搭建了二个舞台∶一个是让消费者起步他能够承受得起的投资，并且经过他的努力可以获得无限不封顶收入的舞台；另一个是教授他如何实现经济自由的知识、经验、信息等，并且协助他如何克服“对成功本能的恐惧”，而且收费也要他能够承受得起的舞台。用一句话来说就是∶一个是给消费者搭建参与社会财富分配机会的舞台；另一个是不断提升消费者分配世界财富能力的舞台！这是它的第二层含义。
那消费者如何在这二个舞台上获得自己想要的东面呢？会不会别人白送给她？当然不会！会不会轻轻松松就获得巨大的收入？300%更不会！否则就不符合多劳多得的原则。就是讲舞台是给她搭好了，灯光、音乐也给她准备好了，导演也来了，但是她想在舞台上展示自己的歌喉，是不是最终还是靠她自己的努力？为了让她练习唱歌，公司指定了一所很有实力的学校和老师来教她，这就是教育和培训。其目的就是提升她的综合素质能力。一句话，成功靠她自已去赢得。这是它的第三层含义。
居然成功靠她自已去赢得，就是说只有付出才会有收获，但是ICM是不用专职去从事的。这是一个兼职的附带的个人生意。做生意当然是要赚钱，那么，这个兼职的附带的生意可以赚多少钱呢？少了她会觉得浪费她的时间，还不如看电视；多了当然好，但太多了她又害怕！所以，我们讲ICM可以让她兼职附带地赚到跟“她目前的收人”差不多的一份收入。比如，她目前的工资是800元/月，那么，经过她的努力，她就可以兼职附带地赚到800元/月左右的收入；如果她目前的工资是6000元/月，那么，经过她的努力，她也可以兼职附带地赚到6000元/月左右的收入。一句话ICM是一个兼职的附带的生意。这是它的第四层含义。
21世纪是一个网络化社会，未来我们不是“自投落网”就是被合种各样的网罩住，可以讲未来几乎所有的生意都是网络化的。ICM就是一个网络化的生意。消费者同公司合作注意不是雇佣一起共同去构建一个“营销网络”。这个“营销网络”属于双方共有，但是它是私人财产，公司无权剥夺和非法占有，就好像您购买的私人房产一样，您有权利继承、转让和迫买，不过公司有优先购买权。一句话这个“营销网络”是您的私人财产。这是它的第五层含义。
ICM又是一个非常简单的生意，人人都可以来实践操作。它是一个“全天候”的生意，就是全天24小时任何时候、任何地点、任何环境都可以做的生意。你可以在出差途中的火车上、飞机上、轮船上；也可以朋友聚会上、生日上、婚礼上；也可以在谈判的间隙中、工作的间隙中、逛商场中、逛公园中；也可以在出国旅行中、朋友家串门中、业务活动中……总之，随时随地都可以做的生意，甚至给别人赠一张名片，让他上网，你的生意就开始了，甚至简单到你只须发名片，可能就有奖金发的地步。一句话ICM是一个简单的生意。不过我们要提醒读者，ICM这个生意虽然看起来很简单，但简单并不代表容易！相反可能更难，总之只有一分耕耘才有一分收获。这是它的第六层含义。
ICM能不能满足人们成为传奇式人物的需求呢？当然可以！当她经过自己艰辛的努力真正成功以后，大家向她鼓掌的时候，她就已经是一个传奇式的人物了！这是ICM的第七层含义。
这就是ICM的基本内涵。用一二句话是不是难于讲明白？您能用通俗的话把这“七个层次”的内涵让别人听明白，这就是ICM。为了让读者更好地理解ICM，我们再来谈一谈“营销网络Marketing network”。ICM的最终结果就是当代市场学权威美国西北大学教授菲利普.科特勒Philip Kotler在其所着并且被世界公认为市场学“圣经”的营销管理一书中所说的建立一个“营销网络”。他讲∶“关系营销的最终结果是建立起公司的独特资产，即一个营销网络Marketing network。营销网络由公司与所有它的利益关系方（顾客、员工、供应商、科学家、广告代理人和其它人建立互利的业务关系。这样竞争不是在公司之间进行，而是在整过网络之间进行。一个建立了更好营销网络的公司将获胜。该操作原则是简单的∶与关键的利益关系者建立良好的关系后，利润就会滚滚而来”。
ICM的营销网络Marketing network由五大部分组成∶
第一部分∶超级消费终端网络；
第二部分∶顾客消费网络；
第三部分∶电子商务网络；
第四部分∶物流配送网络；
第五部分∶电脑数据库及信息交换网络。
这五个网络是一而不是五，它是“五网合一”的，不是分开的，而是相互叠加、相互融合的。工业化时代，“消费含零售终端”就像一座座“孤岛”，不会成为网络；消费者与消费者之间、顾客与顾客之间是“隔断”的，也不会自动形成一个网络；公司与企业之间，公司与顾客之间更不会自动形成一个网络。电子商务就根本没有。信息化社会的共同特征是要求信息的迅速传播和共享。这就要求个体与个体之间必须连接起来，而且还要高效，就像一台一台电脑相互连接起来一样。网络化是21世纪社会一个最基本的特征，所以，在21世纪您如果不会做网络，恐怕难于生存，更不用说竞争。ICM的立足点就是网络，可以讲它是一个“织网”的营销。完全可以讲，未来任何一个企业，只要具有一个强大的营销网络，就会产生巨大的附加值。“附加值”就是额外增加的收入。任何一种商业模式，如果不能带来附加值就算不上是一个好的商业模式。
什么是ICM的附加值？这里我们举几个例子∶
例一∶ICM不仅仅局限在商品分销和零售领域。它是一个很宽泛意义上的营销模式和盈利系统。它可以用零售终端商场和店铺作为平台向其它领域或行业延伸。比如公司可以跟全国某连琐的加油站合作，使加油站也成为一个“零售终端”。这样出租汽车司机再去加油时，他就会去这样一个“交互式加油站”零售终端加油！为什么？因为司机已经从一名纯消费者变成了自己生意的老板。他再去加油，已经不再是像过去那样去“买”油了，而是在做他自己的“生意”了。在过去传统思维模式下，他是不会主动介绍其它的司机也去“交互式加油站”这个零售终端加油的，而今天，他却可以在休闲聊天的时候这样做，因为他是经营自己的生意，而不是再去“买”油。
又比如公司可以跟某航空公司合作，在公司的“超级专营店”增设机票代理处或者把航空公司售票处变成一个“零售终端”。这样消费者在购买机票时就会进“超级专营店”机票代理处购买或者只去这家航空公司售票处购买。为什么？一样的道理，因为她已经从一名纯消费者变成了自己生意的老板。她再去购买机票，就不再是像过去那样随意购买了，而是懂得在经营她自己的“生意”。在过去传统思维模式下，他是不会主动介绍其它的消费者也去这家航空公司售票处购票的，而今天，他却可以在坐飞机的旅途中向别人推荐这种既消费又做生意的方式，因为他是在经营自己的生意。
又比如公司可以跟某城市的优秀连琐餐馆不连琐也可以合作，把连琐餐馆也变成为一个“零售终端”，变成为一个“交互式餐馆”。这样顾客在就餐时，就会主动选择进这家连琐餐馆就餐，并且还会主动介绍其它顾客也去这家连琐餐馆就餐。还是一样的道理，因为她已经从一名纯消费者变成了自己生意的老板。他再去就餐时，就不再是像过去那样随意了，而是懂得在经营她自己的“生意”。在过去传统思维模式下，她是不会主动介绍其它的消费者也去这家交互式连琐餐馆就餐的，而今天，他却可以在任何时候向别人推荐这种就餐既消费又做自己生意的方式，因为他是在经营自己的生意。
又比如公司可以跟某保险公司合作，把其保险代理公司或分公司变成一个“零售终端”，变成为一个“交互式保险公司”。这样顾客在购买保险时，就会主动选择进这家保险公司，并且还会主动介绍其它顾客也选择进这家保险公司。还是一样的道理，因为她已经从一名纯顾客变成了自己的老板。他在购买保险时，就不再是像过去那样随意了，而是懂得在经营她自己的“生意”。在过去传统思维模式下，他是不会主动介绍其它的顾客也去这家保险公司购买保险的，而今天，他却可以在任何时候向别人推荐这种购买保险就是做自己生意的方式，因为他是在经营自己的生意。
又比如公司可以跟某电话公司合作，把电话公司变成一个“零售终端”，变成为一个“交互式电话公司”。这样顾客在选择安装电话时，就会主动选择这家电话公司，并且还会主动介绍其它顾客也选择这家电话公司。还是一样的道理，因为她已经从一名纯顾客变成了自己的老板。他在选择安装电话时，就不再是像过去那样随意了，而是懂得在经营她自己的“生意”。在过去传统思维模式下，他是不会主动介绍其它的顾客也选择这家电话公司安装电话的，而今天，他却可以在任何时候向别人推荐这种装电话打电话就是做自己生意的方式，因为他是在经营自己的生意！例如可以造择跟“网通公司合作”。让顾客购买网通IP卡打电话或者推荐别人也购买网通IP卡打电话，他还能为自己赚钱。
例二∶ICM的顾客消费网络比零售终端网络还要大，顾客的本来面目是人。（公司）巨大的顾客群，需要对他们做大量的培训，这种培训可能是免费的，因而它会给公司带来巨大的潜在顾客。这个效益是无法用金钱来衡量的，因而未来培训你的顾客、培训你的消费者将成为流行时尚。
例三∶21世纪是网络为王的时代。有了遍及全国乃至全球的“超级专营店”这个实实在在的看得见、摸得着的，长在地上的，能吸引周围忠诚顾客的，又紧密相连的，冲不断、打不垮的网络终端，其本身就是财富。现很多国外大型企业，看中的就是你手中的网络终端这个王牌，所以，这个附加值也是很大的。如公司可以跟国外某药业或某保健品公司合作，让他们的非处方药和保健品进入“超级专营店”。让顾客购买非处方药品和保健品或者推荐别人也购买非处方药品和保健品，他还能为自己赚钱。
这样的例子可以举无数个，也就是讲理论上任何一家企业都可以进行ICM，而不仅仅是生产企业或零售企业，所以，我们可以肯定讲，ICM模式将成为21世纪一个最普遍应用的留住顾客并使顾客忠诚于公司的常用营销手段。ICM虽然在世界上是我们首先在世纪之初提出来，但10年后、20年后它将成为一种流行方式。尽管我们有此信心，但并不意味着它很快会被人们接受，相反，它首先会被人们反对、怀疑甚至攻击！道理很简单∶人性的弱点是对陌生事物心存恐惧！对陌生环境心存恐惧！人的本能是排斥新生事物，而喜好旧有事物。这就很好理解中国改革开放之初观念的变革国人所遭遇到的巨大阻碍和痛苦！但是，旧有的东西毕竟会消失，新生的东西毕竟会降临，就在于它代表着历史发展的必然，代表着人们的希望和梦想。
㈤ 我想知道“多物种非人兽混合胚胎”发育后会出现什么现象新个体是否会融合多物种的特征
你所说的就饥悉芹是生命科学研究上的嵌合体
嵌合体研究进展
1 嵌合体的概念
嵌合体(Chimera)一词源于希腊文,古希腊神话中用它
代表羊头、狮身、蛇尾这样一些由不同种类的动物所拼凑成
的怪物,这意味着人们改造自然的愿望。20世纪60年代中
期,在高等哺乳动物上得到了由两个或两个以上不同遗传性
状组成的胚胎发育成的个体,这种个体的组织器官是由基因
型不同的细胞群所组成,故称之为嵌合体。有的学者用非自
主表型(Allophene)一词代表这种个体,意指不同的表型是由
于有不同基因型的缘故。为了方便起见,Ford(1969)把在发
育的很早期,如卵裂期甚至受精卵期所形成的嵌合体,称为
原发性嵌合体(Primary Chimera);把在发育的晚期,如胚层
已分化,或器官开始形成后通过组织移植或嫁接等方法所形
成的部分组织或器官的嵌合,称为次生型嵌合体(Secondary
himera)。通常所说的嵌合体指原发性嵌合体,即人工地将
两个或两个以上具有不同陆碧遗传性状的早期胚胎,或者把具有
特种遗传性状的细胞和早期胚胎聚合或显微注射所产生的
嵌合体〔1〕。嵌合胚内不同来源的细胞相互调节、相互作用以
至共同完成胚胎发育。由于嵌合体能携带适当的遗传标记
并能在个体发育中表现出来,因而它成为研究所有动物个体
发育最为理想的实验材料和遗传研究模型。
2 嵌合体研究概况
2.1 小鼠嵌合体的研究进展
嵌合体研究至今已有80多年的历史。1942年,Nicholas
和Hall就曾试图用不同品系的大鼠,将其早期分裂球进行聚
合制作嵌合体,结果只得到一个死胎,未能证明为嵌合体。
之后,Tarkowski(1961,1963)〔2〕将具有不同毛色和葡萄糖磷
酸异构酶(Glucose Phosphate Isomerase,GPI)迁移率不同的两
种小鼠的胚胎,在卵裂的不同时期,如8-细胞期、16-细胞
期,甚至桑葚胚进行聚集,成功地制作了世界上第一只嵌合
体小鼠。通过毛色和同工酶的测定,证明这些嵌合体的各种
组织中都有来自两种胚胎的细胞。至此以后,嵌合体技术受
到了国内外哺乳动物发育生物学工作者们的极大重视。
Gardner在1968年又创建了囊胚注射法,并用这种方法
成功地获得嵌合体,因此法具有许多优点,可将不同类型的
细胞直接注射到囊胚腔内,所以成为目前获得嵌合体的主要
研究手段〔3〕。1981年,Evans和Kaufman〔4〕及Martin〔5〕首次
报道了从正常小鼠胚胎中分离建立了胚胎多能干细胞系,简
称ES细胞(Embryonic Stem Cells)。由于这种细胞来源于正
常胚胎,在细胞形态、生化特性、细胞表面抗原组成、体内外
分化能力等方面与分离的胚胎内细胞团(Inner Cell Mass,
ICM)十分相似,多数具有完整二倍体核型,可以有较高的频
率形成嵌合体。1984年,Bradley等〔6~8〕通过囊胚注射法获
得了首例小鼠ES细胞种系嵌合体,种系嵌合体的获得是实
现ES细胞介导的转基因途径的决定步骤。ES细胞种系分
化能力的保持是决定种系嵌合的前提条件,尽管可通过体内
外分化实验及全能性细胞分子标记推测ES细胞系是否具有
多方向的发育潜能,但嵌合体的制作及种系嵌合体的获得则
是判定ES细胞系是否具有种系分化能力的唯一方法。
Robertson等〔9〕及Gossler等〔10〕在1986年,分别以
PSVmos-1neo和pSVtkneoβ融合基因转化小鼠ES细胞
并成功实现种系传递,宣告了ES细胞途径的诞生。与原核
注射及逆转录病毒感染等其他转基因途径相比,ES细胞途
*为通讯作者。
径的优点在于ES细胞可在体外连续培养并保持发育全能
性,使得目的突变的筛选可在细胞水平而非烂毕个体水平进行。
尤为重要的是,利用基因组同源序列及合适的选择标记基因
可构建基因打靶(gene targeting)载体转化ES细胞获得小概
率的同源重组事件,进而经由种系嵌合体得到内源基因定位
致变(knock—out)或外源基因定点整合(knock—in)的突变品
系,这是迄今为止任何其他转基因途径所无法实现的。
1987年,Thomas和Capecchi将基因定位整合技术与ES
细胞途径相结合,首次获得了内源基因(Hprt)定位失活的转
基因小鼠。随后,人们以同样的方法成功地定位改变了一系
列的内源基因,例如:通过ES细胞对MT基因和对tPA基因
的研究,在分子和个体水平上使人们对这些基因有了更深的
了解,同时,也充分显示了ES细胞途径的潜力所在。宋震涛
等〔11〕在1993年,用囊胚注射法将小鼠胚胎多能干细胞—
CCE细胞注射到发育3.5 d的昆明和C57BL/6J小鼠受体囊
胚腔内,经假孕鼠借腹怀胎,获3只CCE细胞毛色嵌合鼠。
实验共注射胚胎654个,经培养其恢复成活率73.8%,胚胎
移植后,假母受孕率及产仔率分别为32.9%和53%。在所
获3只嵌合鼠中,2只为CCE—昆明毛色嵌合鼠,1只为
CCE—C57BL/6J毛色嵌合鼠,这是国内首次利用胚胎多能
干细胞获得嵌合鼠。同年,Wood等人报道了用ES细胞
R—1进行囊胚注射,注射后移胚631个,出生250只(40%),
嵌合体95只(15%)。Stewart等(1994)〔12〕按照Resnick〔13〕
的方法从7枚9dpc129/SV系小鼠胚胎PGCs分离并建立了
3个EG细胞系。待其观察到干细胞克隆时,将其转移到无
bFGF的PMEF上维持培养。对传至4代的EG细胞系做核
型分析及嵌合体实验,3个细胞系核型分别为40∶XY(EG1)、
40∶XX(EG3)、39∶XO(EG2)。将PGCs注射C57BL/6J小鼠
囊胚99枚,出生仔鼠62只,其中20只为皮毛嵌合体,嵌合
面积10%~90%,嵌合体正常。12只(5♀7♂)嵌合体小鼠
与C57BL/6J小鼠交配,出生539只后代,其中6只(4♀2♂)
嵌合体小鼠的169只后代为刺鼠型,证明这6只小鼠为生殖
系嵌合体。研究结果证实EG细胞与ES细胞同样具有形成
功能性配子和实现生殖系嵌合,产生嵌合体的能力。
1996年,吴白燕等〔14〕用北京大学生命科学学院所建立
的ES细胞系MESPU13通过囊胚显微注射到C57BL/6J小
鼠的囊胚中构建嵌合体小鼠。在注射了2~9个ES细胞的
136个囊胚中,127个囊胚(93%)经过3 h的培养后重新出现
囊胚腔。当把119个恢复的囊胚移植到假孕雌鼠的子宫时,
获得63只(52.9%)出生鼠。在59只存活到可以判定毛色
阶段的小鼠中,有21只(35.6%)被判定为嵌合鼠,显示了该
ES细胞系具有较高的嵌合能力。同年,何维等〔15〕采用源于
Swiss小鼠远交群的昆明品系小鼠囊胚成功建成了三个远交
系小鼠ES细胞系,核型正常率均达到70%以上,自第八代
起分批冻存。复苏后,培养至第12代,消化成单细胞,通过
囊胚显微注射,将其注射到615品系小鼠胚胎获得嵌合体,
这是首例用远交系小鼠胚胎干细胞系培育成功嵌合体小鼠。
在1999年,陈伟胜等〔16〕选用近交系C57BL/6J及远交系
KMW和ICR为受体胚胎提供者,分别通过囊胚注射法和
8—细胞期桑葚胚注射法进行了嵌合体构建实验。共获得嵌
合体81只,经毛色分析确定在进行测交的42只嵌合体中有
19只是种系传递者,为国内小鼠ES细胞种系嵌合体的首例
报道。通过对小鼠ES细胞囊胚注射后形成嵌合体,进一步
培育出整合于生殖系的小鼠品系。囊胚注射法制作嵌合体
这一套技术路线在制备基因剔除小鼠时已成功运用,该技
的优点是可以对每个单克隆细胞进行分析,并由此培育出
克隆细胞发育出来的小鼠。由于首先在ES细胞水平进行
操作,获得表达目的基因的单克隆细胞,经囊胚显微注射得
到表达目的基因的嵌合体小鼠,再由此培育出纯系小鼠,所
以在整个过程中ES细胞的分化潜能直接关系到小鼠的正常
发育。姚玉成等(2001)〔17〕为了探讨小鼠ES细胞参与早期
胚胎发育的潜能,以neo基因作为目的基因进行了ES细胞
的转染,经G418的筛选,获得表达neo基因的单克隆细胞,
然后进行囊胚注射60枚受体小鼠囊胚,恢复培养后移植到5
只假孕小鼠,得到了携带有neo基因的嵌合体小鼠,通过对
嵌合体小鼠各组织PCR分析发现,neo基因可以在皮肤、肝
脏、血液等多种组织中存在。
除了种内嵌合体,小鼠种间嵌合体早已有成功的报道。
虽然大小鼠嵌合胚、田鼠和小鼠嵌合胚能成功地附植,但没
有成活的嵌合体出生。Rossant用ICM注入法,首次获得了
小鼠种间嵌合体(Mus musculus←→Mus caroli)。在嵌合体内
没有发现细胞系之间的选择性排斥关系。用GPI酶分析,显
示骨骼肌中有杂交的GPI酶,说明两种不同来源的成肌细胞
融合为正常功能的肌纤维。正常小鼠胚胎与多倍体胚胎、雌
核发育胚胎所制作的聚合胚也分别被用来进行了大量嵌合
体的研究〔18~20〕:正常胚胎在细胞松弛素B作用下,染色体
加倍形成三倍体或四倍体胚胎。这种多倍体胚胎发育迟缓、
组织畸形,即使出生也不能存活。与正常胚胎嵌合后,3n或
n细胞虽参与各种组织形成,但仍影响正常胚胎发育。Lu
1980)和Azuma(1991)分别获得了成活的4n←→2n、3n←→
n嵌合小鼠,并具有正常生殖能力,繁殖实验证明,所有的后
代均为2n细胞来源。这种多倍体胚胎嵌合体在研究性染色
体及剂量补偿作用、多倍染色体对个体发育的影响方面具有
重要价值,是研究染色体功能、基因平衡、基因定位的良好模
型。单性生殖胚胎(Parthenogenetic Embryo)是将受精卵中
的雄原核或雌原核挑去,在用细胞松弛素B使其染色体加
倍,从而得到正常胚胎数目的染色体。由于XY型为致死
型,因而这种加倍后的胚胎皆为XX型。这种雌核发育胚胎
在附植后很快死亡。Stevens(1978)〔18〕将1枚正常受精的小
鼠胚胎与2枚孤雌发育的桑葚胚,去除透明带后在Whitten
氏液中聚合培养,形成3胚聚合的胚胎;将55枚3胚聚合胚
移植至6只假孕雌鼠,产出两窝共7只仔鼠,经检测其中1
雌性和1雄性仔鼠为嵌合体。证明源于孤雌胚的细胞能存
活并参与形成正常的器官。雌核发育胚胎能广泛形成嵌合
体各种组织。但成活个体在体型上均小于正常小鼠。与多
倍体胚胎不同,雌核发育胚胎能参与嵌合体生殖系形成,并
产生有功能的卵子。Market等( 1978 )〔21〕和Petters
1980)〔22〕还得到了由3个或4个胚胎聚合而成的6个双亲
和8个双亲的小鼠嵌合体及其后代,不过这种6个以上双亲
的嵌合小鼠,选择遗传标记更加困难。这类嵌合体对研究
巨型”胚胎的生长和调节等具有一定的价值。
上述研究结果表明,虽然迄今还没有完全由孤雌胚发育
而成的后代,但因孤雌胚细胞可参与形成各种组织包括生殖
细胞,故可能通过缺少父源遗传结构的生殖系仅将母源的遗
传信息传给后代。换句话说,通过嵌合体技术可能产生孤雌
发育的个体。因此,有必要深入研究。
2.2 其它哺乳动物嵌合体的研究进展
由于家畜胚胎的发育特点,体外培养条件与小鼠相比差
异较大,有关家畜嵌合体方面的报道比较少。
.2.1 羊:Pighills曾首先尝试用桑葚胚聚合法制作嵌合体
绵羊。最初用ICM注入法制作嵌合体的成功率不及3%。
utler(1985)发现ICM注入法同样得到较高比例的嵌合体绵
羊。且在制作聚合胚时发现,当细胞数量比正常胚胎多时则
易形成嵌合体,而细胞数量少于正常胚胎时则产生嵌合体的
比例明显下降,其原因可能是细胞数量多时,参与ICM的机
会增加。1998年有人成功地报道了把从山羊胎儿采取的原
始生殖细胞在STO细胞上继代培养,这些细胞从形态特征,
对AKP阳性的反应及在体外分化成各种细胞的全能性来
看,确定是山羊EG细胞。但是,关于嵌合体形成没有得到
验证。嵌合体显示对两个细胞系的免疫耐受性,这同样适用
于种间嵌合体,因而种间嵌合体成为母体与胎儿免疫识别机
制及研究妊娠失败的良好模型。Fehilly(1984)分别用聚合法
和注射法制作绵山羊嵌合胚,然后移植到与受体胚泡同种的
假孕受体,结果绵羊和山羊能分别产下正常的种间嵌合体。
尽管雌性绵山羊等嵌合体能生产正常绵羊胎儿,但却不能怀
孕山羊和杂交种胎儿。其失败的原因可能是一种母体的细
胞毒性抗体对种特异性抗原的反应引起的。
2.2.2 牛:牛嵌合体的报道也有几例。最初用ICM注入法
制作种间嵌合体(Bos indicus←→Bos taurus),尽管没有产生
外观可见的嵌合牛,但生化检测表明内脏器官存在嵌合
性〔23〕。Brem(1984)〔24〕获得一头嵌合牛,此牛是由4个半胚
组成的聚合胚发育而成的,与绵羊嵌合体的发现相同,可能
聚合胚中细胞数量越多时,不同细胞系参与形成ICM的机
率相应提高。Picard(1990)〔25〕将8 d ICM与5.5 d桑葚胚聚
合后得到5头嵌合牛,说明8 d ICM仍能参入嵌合牛中ICM
的形成,同时发现10 d的ICM与5.5 d胚胎能形成聚合胚,
但不能参与成体发育。Cibelli〔26〕利用转基因技术得到了生
殖系嵌合牛,在1998年,用显微注射法把将囊胚建立的细胞
系导入基因后的基因转移细胞系注入受体胚,制作了转基因
嵌合体牛。另外,基因导入后的胎儿成纤维细胞,注入去核
的卵母细胞,所形成的囊胚建立起的转基因细胞系,同样具
有形成嵌合体的能力。结果表明,判定这些细胞株为牛ES
细胞。但是,牛生殖系制作嵌合体未见报道。
2.2.3 猪:在1990~1991年猪ES细胞的建立有许多报道,
但是,所有形式的判定标准,形态特征,未能测出在体外的分
化能力,胚体形成或者细胞标记物腊丁18(细胞分化标记
物),没做获得的细胞嵌合体形成能力的实验。在1992年,
Kashiwazeki采用ICM注入法将白化品系ICM注入褐色被
毛受体囊胚中,产生了2头嵌合猪。Mueller等(1999)自30
个25~28 dpc WAPhGH转基因猪胎儿生殖嵴分离PGCs,将
其注射到209枚6日龄猪囊胚,重组胚移入11头受体猪,用
转基因标志作PCR试验,分析49个胎儿和8头仔猪PGCs
是否参与嵌合,检测结果32个胎儿呈现5/12种组织嵌合,8
头仔猪为皮肤基因转染,其中4头表现皮色嵌合。
3 嵌合体的制作方法
迄今为止,制作嵌合体的方法有两种,即聚合法和囊胚
注射法,可根据实验目的而选用。
3.1 聚合法〔27~34〕
聚合法是用胚梁将除去透明带的两枚8细胞至桑葚期
胚胎或来自两个胚胎的分裂球与ES细胞聚合在一起,称为
聚合法。聚合法适用于同种,发育阶段处于同步或者差距不
大的胚胎。其方法是在2个8细胞胚胎中间夹几个ES细
胞;1993年,Wood等〔27〕人报告了一种简单、有效的产生嵌合
鼠(包括种系嵌合鼠)的方法,该方法仅需要将ES细胞同8
细胞时期的胚胎进行简单的共培养即可完成。1997年,何维
等〔28〕以MC15为供体ES细胞,用KMW品系小鼠8细胞期
的胚胎为受体胚胎,采用聚合法共植入8细胞期胚胎35个,
产仔18只,产仔率51.4%,获得嵌合鼠2只。用聚合法制作
嵌合体,操作简便,不需要特殊的仪器设备,是制作嵌合胚和
嵌合体动物的有效方法。
3.2 囊胚注射法〔25~44〕
囊胚注射法技术难度较大,但适用范围较广,可用于种
·3·《上海畜牧兽医通讯》 2008年第3期
或种间,供体和受体的发育阶段可同步,也可以是不同步
,它还适用于不能去透明带的动物,如兔等。该法是将几
个ES细胞(一般5~15个左右)注入囊胚腔中。但囊胚注射
法需要购买昂贵的仪器,而且技术难度较大,需要一定的时
间才能掌握。
4 嵌合体鉴定〔45〕
嵌合体鉴定也称嵌合体标记(Markers of chimera)或嵌合
体分析(Analysis of chimea),通过鉴定所选择的不同细胞系
的遗传标志在嵌合体中的出现,即可判定是否不同培养细胞
参与了嵌合胚的发育。迄今所用的嵌合体鉴定方法可分为
人工标记和遗传标记两种方法。
4.1 人工标记
此种方法多用于蛙类嵌合体的鉴别,哺乳动物中较少应
用。其最典型的标记物为活体染色色素和油滴。此外使用
的标记物还有0.1~0.2μM的珠状物,放射性物质、荧光胶
质金、黑色素颗粒、山葵过氧化物等。
4.2 遗传标记
它是根据嵌合体在嵌合前两个胚胎本身所具有的特性
作为标记来进行鉴定,如由遗传所决定的黑色素以及通过生
物化学、染色体、细胞学、组织学、组织化学、免疫组织化学等
方法能够鉴别的物质等。为了检测ES细胞的嵌合程度,目
前通常是采用两个遗传标记。
.2.1 色素分析法:这是最简单且直观的分析方法,一般选
择皮肤颜色、毛色差异的动物胚胎来制作嵌合体。由于供体
ES细胞与受体胚胎来源品系有明显的毛色区别,故可根据
移植后代是否具有ES细胞来源的毛色明确判定嵌合体。嵌
合体的毛色嵌合程度按ES细胞来源毛皮所占大致比例估
算,结果以百分率表示,外观无受体品系毛色掺杂的嵌合体
毛色嵌合程度计为100%。在嵌合体构建实验中,通常以嵌
合体的毛色嵌合程度推测内脏(尤其是种系)的嵌合程度。
在毛色嵌合程度较高的嵌合体中,种系嵌合的发生及种系嵌
合程度似乎是随机的,与毛色嵌合程度无明显的相关性,这
说明毛色嵌合程度与脏器嵌合程度并不完全平行。因此,有
必要对毛色嵌合程度较低的嵌合体也进行测交分析。
.2.2 生物化学法:主要通过测定嵌合体血液或组织中的
特定酶(同工酶),如磷酸葡萄糖异构酶(GPI)、磷酸葡萄糖变
位酶(PGM-1)、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(6-PGDi)等,也可
以根据细胞抗原、血清运铁蛋白和白蛋白类型来确定是否有
亲缘关系,以鉴定是否是嵌合体。GPI同工酶分析方法相当
灵敏,其灵敏度约为2%〔46〕,用很微量的样品就可以达到分
析目的。虽然目前已有了一些更为灵敏的方法,如使用PCR
法〔47〕或利用小卫星DNA〔48〕的方法。但由于GPI方法的快
速、简便和价格适中的优点,仍是目前广泛使用的方法。GPI
广泛存在于动物体内的所有组织细胞内,非常稳定,主要催
化六磷酸葡萄糖和六磷酸果糖的互变反应。在小鼠中,GPI
-1基因位于第7染色体上,绝大多数近交系小鼠的基因型
为纯合的GPI-1a或GPI-1b,a和b为两个共显性的等位
基因。在进行电泳时,根据等位基因a和b的不同,可以得
到A型和B型的条带〔49〕。通常在构建嵌合体鼠的实验中,
选择带有与供体细胞不同的等位基因的胚胎作为受体,有利
于对嵌合鼠体内组织器官中的嵌合情况进行分析。
5 嵌合体的应用前景
对哺乳动物基因组进行人工改造,最终是为了获得带有
人们所期望的目的性状的转基因动物,这是哺乳动物遗传工
程研究的一项重大课题。哺乳动物发育的基因调控在过去
由于种种原因(如哺乳动物突变种很少,生命周期长,胚胎是
在母体子宫中发育,数量少等)难以有很大进展。随着ES细
胞的建立,可以在培养瓶中进行突变和筛选,并且筛选出来
的突变细胞株可以经受反复的冻存和复苏,还可以进行嵌合
体分析和分子遗传学分析。或运用体细胞遗传操作技术,在
细胞水平上对带有遗传修饰的转化ES细胞进行有效的筛
选,最终使目的基因整合到生殖细胞中,并传入后代成为种
系嵌合体。由于嵌合体动物在胚胎发育过程中的特殊性,它
不仅是遗传工程的重要组成部分,而且可以作为发育生物
学、细胞生物学、胚胎学、免疫学、医学、畜牧学等方面均具有
广泛应用价值。它既为这些研究提供特殊的动物模型,也可
用于人工创造特殊的动物。
5.1 研究染色体畸变
在对许多遗传病的研究中,发现许多体细胞核的染色体
是非整倍体(Aneuploid),其中单体和三体(Trisome,Ts)最常
见。非整倍体←→2n嵌合体是研究染色体功能、基因平衡、
基因定位的良好模型。在哺乳动物含有非整倍体的个体往
往伴有严重的遗传障碍,一般不能存活。目前人们借助EC
细胞或生化手段已经构建出含有单体或三体染色体的小鼠
嵌合体。
5.2 研究基因突变
在20世纪80年代获得小鼠ES细胞以来,ES细胞在基
因工程领域受到普遍重视,将ES细胞注入受体囊胚是其完
成个体发育的唯一途径。通过基因的同源重组技术可将突
变基因导入ES细胞,当携带突变基因的ES细胞参与嵌合体
生殖系组成后,即可在繁殖后代中研究突变基因的作用。
Goldstein等(1979)证明EC细胞具有高度亲合低密度脂蛋白
的受体,并进一步准备诱发低密度脂蛋白受体缺损株,把这
种细胞注射到囊胚中,从而有望获得与人类高胆固醇血管症
相同的动物模型。1987年Hooper等〔50〕人(英国爱丁堡大
学)以及同年Kuehn(英国剑桥大学)分别从ES细胞中通过
自发突变或诱发突变得到了HPRT-的ES细胞,并通过嵌
合体和嵌合体的繁育得到了HPRT缺陷型的小鼠模型,为研
究人类遗传病Lesch-Nyhan综合征(是由于不能合成雌黄
嘌呤转磷酸核糖激酶而引起)提供了良好的遗传研究模型。
5.3 转基因动物生产方面的应用
从20世纪60年代开始,经过体细胞遗传学家和病毒学
家的长期努力,已经建立起许多成熟的技术可以将外源基因
导入体外培养的细胞并得到稳定表达的转化细胞系。但是,
由已经分化的在体外培养的体细胞无法产生哺乳动物,而哺
乳动物的受精卵或早期胚胎细胞又受到数量和可培育时间
与条件的限制也无法使用这些成功的方法。ES细胞系的建
立将体细胞转化技术和嵌合体技术结合起来,建立了转基因
动物的新途径。Gosseler(1986)、Tokunaga等(1992)利用磷
酸钙方法将neo基因导入ES细胞,并获得了能稳定传递neo
基因的转基因小鼠,显示用ES细胞作为转基因工具与DNA
原核注入法、逆转录酶病毒感染方法相比具有一定的优越
性。主要是可以在细胞水平获得明确的转入基因是否整合
或表达,再由这种明确的细胞发育成个体,避免了对子代小
鼠既要进行DNA水平检测筛选,又要进行RNA或蛋白水平
检测筛选,从中才能获得转基因小鼠的过程,直接就可以获
得整合或表达目的基因的嵌合体小鼠,尔后通过培育获得转
基因小鼠,这为将来进一步探讨该技术的广泛应用奠定了基础。
5.4 嵌合体在胚胎种间移植方面的应用前景
胚胎种间移植,对保存濒临灭亡的动物、克服杂交不育
等方面具有重要意义,但是由于种特异性抗原的相互作用关
系使胚胎种间移植受到极大限制。迄今有关胚胎种间移植
获得成功的报道有:家牛与水牛的交互移植、马与驴的交互
移植、欧洲盘羊移植到家绵羊、野牛胚胎移植到Holstein母
牛、斑马胚胎移植到马等。杂交胚胎细胞能参与正常胚胎发
育,其原因可能是因为胚胎滋胚层与假孕母体属于同一种
类,从而屏蔽母体的种特异性抗原对异种胚胎的ICM的免
疫识别,使异种胚胎能够存活。在制作的绵山羊嵌合体中,
绵羊和山羊能分别产下山羊和绵羊羔,如果这种方法在濒危
动物种类上有可行性的话,有可能为“挽救”濒危动物开辟了一
·4·《上海畜牧兽医通讯》 2008年第3期
全新的途径,可望在实际应用中不断扩大珍稀动物数量。
5.5 嵌合体在繁育纯系动物中的发展前景
在哺乳动物纯系繁育过程中,培育良种的时间是重要的
因素。例如,培育纯系小鼠需要进行20代近交繁殖(约5年
时间),并且最多产生98%的纯合体,此外由于近交衰退导致
生命力和繁殖力降低,因而大多数动物近交繁殖均告失败。
arkert等(1977)报道用显微外科方法制作雌核发育胚胎以
来,为繁育纯系动物提供了最简捷的方法。Stevens、
ndregg、Paldi分别获得了含有雌核发育胚胎的嵌合小鼠,并
得到了含生殖细胞嵌合的个体。这种个体的卵巢有雌核发
育胚胎来源的完全一致的卵子,从而大大缩短了培育纯系小
鼠的时间(约3个星期)。
6 目前研究存在的问题
如上所述,嵌合体在发生学、医学、产业的各个领域有着
无限广阔的利用前景。但目前需研究和解决的问题有:
高效培育嵌合体的方法,特别是通过种间或各种细胞的
组合获得嵌合体;培育各组织、器官的特异性部分嵌合体个
体;消除种间的胚胎着床后发育与受体间的免疫排斥性;研
究更适合的标记。
㈥ 转基因技术和基因敲除技术的主要区别有哪些
转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性悄悔状的可遗传的修饰，这一技术称神运做之为转基因技术（Transgenic
technology）。人们常说的"遗传工程"、"基因工程"、"遗传转化"均为转基因的同义词。经转基因技术修饰的生物体在媒体上常被称为"遗传修饰过的生物体"（Genetically
modified organism，简称GMO）。
Genetically
Modified--转基因，简称GM。是指运用科学手段从某种生物中提取所需要的基因，将其转入另一种生物中，使与另一种生物的基因进行重组，从而产生特定的具有变异遗传性状的物质。利用转基因技术可以改变动植物性状，培育新品种。也可以利用其它生物体培育出期望的生物制品，用于医药、食品等方面。
基因敲除技术是20世纪80年代发展起来的，是建立在基因同源重组技术基础以及胚胎干细胞技术基础上的一种新分子生物学技术。所谓胚胎干细胞(EmbryonicStem
cell，ES)是从着床前胚胎(孕3-5天)分离出的内细胞团(Inner
cellmass，ICM)细胞，它具有向各种组织细胞分化的多分化潜能，能在体外培养并保留发育的全能性。在体外进行遗传操作后，将它重新植回小鼠胚胎，它能发育成胚胎的各种组织。而基因同源重组是指当外源DNA片段大且与宿主基因片段同源性强者并互补结合时，游衡结合区的任何部分都有与宿主的相应片段发生交换(即重组)的可能，这种重组称为同源重组。
基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。这项技术的诞生可以说是分子生物学技术上继转基因技术后的又一革命。尤其是条件性、诱导性基因打靶系统的建立，使得对基因靶位时间和空间上的操作更加明确、效果更加精确、可靠，它的发展将为发育生物学、分子遗传学、免疫学及医学等学科提供了一个全新的、强有力的研究、治疗手段，具有广泛的应用前景和商业价值。现在基因敲除技术主要应用于动物模型的建立，而最成熟的实验动物是小鼠，对于大型哺乳动物的基因敲除模型还处于探索阶段。
㈦ 干细胞培养的几个概念
金仁桃 章孝荣（ 安徽农业大学畜牧水产学院 合肥230036 ） �� 自Evans和Kaufman(1981)从延迟着床的胚胎中分离出小鼠胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞）以来，ES细胞一直备受人们的关注��〔1〕�。1998年，由基隆公司资助的汤姆森研究小组在《科学》杂志上发表了关于人的ES细胞建立等一系列工作之后，基隆公司的股票更是狂升了6倍；1999年、2000年，干细胞研究两度被美国《科学》杂志推销弯举为21世纪最重要的研究领域；1999年，美国《科学》杂志还将干细胞研究评为当年世界十大科学成就之首。由此足以显示干细胞的魅力，而干细胞之所以如此吸引人们的注意，主要是因为干细胞是一种全能性的细胞，可以自发分化形成多细胞结构，即胚胎小体（embryonic body，EB）。EB含外胚层、内胚层、中胚层三个胚层，胚胎小体继续分化可以形成多种细胞类型，包括血细胞、内皮细胞、肌细胞及神经元等。另外ES细胞在动物克隆生产、转基因动物生产、疾病研究模型及药物生产等诸多方面有着诱人的前景。本文主要就ES细胞在克隆动物生产的应用加以阐述。 �1 ES细胞克隆的理论依据 � ES细胞是从早期胚胎内细胞团（inner cell mass, ICM）和附植后原始生殖细胞（Primordial germ cells, PGCs）分离出来的一种细胞，它具有全能性(totipotenty)或多能性(pluripotency)，可以发育为任何一种组织或器官的前体细胞，再由该前体细胞发育成功能细胞。正常的ES细胞可分化为两个子代干细胞，也可以分化一个子代干细胞和一个功能细胞。 这种分化是由干细胞内源性调控（主要是受干细胞内结构蛋白和多肽因子调控）和外源性调控（主要是由周围组织细胞及细胞外基质等调控）所影响。而最近Amato Giaccia 发现氧含量操纵干细胞的分化，为人们进一步利用干细胞提供了有益的提示。另一个重要发现就是Andrew E. Wurmser等发现成熟组织的干细胞仅仅是通过与现存细胞融合而形成其他组织，而非制造新细胞，那么对成熟组织的干细胞利用，将趋于更加谨慎��〔2〕�。这也更加提升了ES细胞的作用。 �ES细胞另外一个特点是它像正常的体细胞一样可以在体外进行增殖、克隆、冷冻、保存而保持不分化。这样就可以为人们提供大量的可利用的ES细胞。如每只实验动物一次可提供5000～6500个PGCs，然后在体外可培养成类ES细胞。现在人们可将ES细胞体外培养传至40～60代而不分化，而这样大量的细胞就为我们利用它奠定了基础。 �ES细胞具有可操作性。在体外人们可以对其进行遗传操作选择，如转基因、基因打靶、配合基因诱捕等一系列技术，再结合核移植技术，生产出人们所希望的动物。 �2 ES细胞克隆的可行性 � 克隆技术的原理是将供体细胞核移入去核的卵母细胞中，通过激活使其重新编程发育，从而产生新个体。目前体细胞克隆相对于ES细胞来说，存在有两个问题：一是体细胞在体外培养易变异。为避免这一缺点，目前较多使用新分离或传代较少的细胞。二是关于选用何部位的细胞。目前人们已使用了乳腺细胞、卵丘细胞、输卵管细胞、皮肤成纤维细胞、子宫上皮细胞、肌肉细胞、支持细胞、肝脏细胞、耳成纤维细胞、初乳中乳腺上皮细胞等。但到目前为止，还没有发现何种体细胞是最适合于核移植的，所用作核移植的细胞有的来自于胎儿，一般是成纤维细胞，也有来源于成体动物的。这主要是因为虽然从理论上讲，机体中的每一个细胞都是从受精卵分裂分化而来，而在机体内通过半保留复制方式，DNA信息被完整的传递下来，但从一个受精卵到机体的亿万个细胞，有些细胞的个别基因可能发生不可逆的丢失或重排，使用这样的细胞作核供体，就无法保证信息的完整性，这也可能是目前细胞克隆中普遍存在的克隆效率低，出生后的死亡或异常的原因之一。ES细胞的核移植虽然也同样需要在去核的卵细胞内重新编程，但是相对于体细胞克隆效率低、妊娠期间易流产来说，ES细胞的克隆效率要高得多，而且ES细胞的重新编程要容易得多。这也正如人们所假设的目前存活的克隆颂世个体所用的供体核大多是源于动物组织的成体干细胞的核而非最终分化的细胞的核〔3〕�。 �随着对ES细胞研究的深入，人们已经在多种动物得到了ES细胞核移植的后代。Teruhiko Wakayama等采用长期传代亏樱闷（30代以上）的小鼠ES细胞克隆出了31只小鼠，其中14只存活〔4〕�； Campbell （1996、1995）分别将绵羊、山羊的类ES注射入去核卵母细胞，获重构胚，经核移植有活羊出生��〔5〕�。Michelle Sims和N．L First（1993）将培养6～101d牛的ICM细胞核移植到去核卵母细胞，卵裂率为70%，囊胚率为24%，经胚胎移植有13头妊娠，出生了4头牛犊��〔6〕�； Stice（1996）将牛的类ES细胞进行核移植，得到重构胚并移入受体牛子宫，发育至45天��〔7〕�；Cibelli利用转基因技术得到生殖系嵌合的牛；Shim（1997）和Piedrahita（1998），利用猪的PGCs建立多能干细胞系，并得到嵌合体猪。 �3 ES细胞克隆的意义 � ES细胞的核移植最基本的意义就在于，如果通过核移植能够产生完整的后代，而且具有和亲代一样的遗传特性，那么它就恰恰证实了ES细胞是具有全能性的一种细胞。ES细胞克隆和体细胞克隆一样，通过得到的大量具有亲代一样遗传特性的供体细胞，再利用核移植技术，可以提高优秀个体的繁殖效率，迅速扩充优秀个体的种群，为畜牧生产作出极大的贡献。 对于珍稀品种或濒临灭绝的物种来说，该项技术提供了一种可以挽救珍稀或濒危物种的机会。利用ES细胞水平上的基因操作相对于受精卵水平上的转基因更加容易，可以得出人们所需求的转基因动物，然后再运用核移植技术，即可得到大量的具有此基因表达的个体，同时这也是创造新物种的绝好机会。由于ES细胞具有自发融合的性质，由此可在细胞水平上操作， 完成新物种的创造，而这种新物种可能是自然交配无法得到的。人们曾将牛、绵羊及人的GH基因先后导入小鼠基因组，得到的转基因小鼠在快速生长期生长速度为对照组的4倍。另外，利用ES细胞核移植还可以一次得到大量同质的后代，为生物学研究提供了很好的模型。 4 目前存在的问题 � 由于ES细胞的发现至今也只有20多年的历史，因此人们对它的了解有限，限制了对它的利用，目前就干细胞的核移植来说，主要存在以下问题： �4.1 核移植技术本身还有许多理论有待完善，目前核移植的效率还很低，而对于像重构胚的发育与着床，核质互作与协调等理论还需要人们作进一步的深入研究。 �4.2 ES细胞建系的技术还不成熟。目前广泛使用的饲养层是小鼠成纤维细胞无限系（STO）或小鼠胚胎成纤维细胞（Primary Mouse Embryo Firbroblasts, PMEF）制备而成，主要是利用其细胞分泌的生长因子FGF和抑制细胞分化的因子LIF共同作用，保持干细胞在体外克隆而不分化，然后加入一些其它的物质。即便如此，目前其建系的效率仍不是很高，特别在国内，能够得到大家畜的类ES的都不是很多，而且得到传代次数较少。人们目前尝试了使用其它的培养基，如大鼠成纤维细胞条件培养基、山羊输卵管上皮培养基、绵羊输卵管上皮培养基、绵羊子宫上皮培养基、山羊子宫上皮培养基、牛的颗粒细胞培养基、牛子宫成纤维细胞培养基、胎牛的睾丸、肾、肝成纤维细胞培养基。Meinecke Tillmann(1996)发现胎牛的成纤维细胞对绵羊的ICM和ES细胞增殖有利。而Piedrahitat等采用猪胎儿成纤维细胞和上皮细胞作为饲养层，结果失败。Strojek等（1990）认为，初步培养囊胚时，使用猪子宫成纤维细胞饲养层可以促进囊胚的贴壁和ICM克隆的形成。此时若用STO作饲养层，尽管猪囊胚可以附着在STO上，但ICM不增殖，但以后的传代只需要STO进行。可见对于饲养层的选择，目前仍有待人们的进一步发现。对于ES细胞的建系，人们还发现，ES细胞必须保持一定的浓度，这是因为ES细胞能够从培养基中摄取营养的同时，也要向培养基中排出自己的分泌和代谢产物和其它一些物质，这些分泌物中，有促进细胞生长的物质，有人就称之为促克隆生长物质。 �ES细胞应用范围是很广的，对于核移植的应用仅是其一部分。例如，利用ES细胞的全能性，进行定向诱导分化，再在细胞水平上进行药物的测试，可以极大提高药物的检测进度；利用ES细胞可建立人类遗传病研究的动物模型等。可以说，对于干细胞的研究方兴未艾。 � 参考文献 �〔1〕Evans M J, Kaufman M H. Establishment in Culture of Pluripotential Cells from mouse embryos〔J〕. Nature, 1981, 292(9): 154～156 �〔2〕Andrew E. Wurmser, Fred H.Gage. Cell fusion causes confusion〔J〕. Nature, 2002，416,485～491 �〔3〕Konrad Hochedlinger, Rudolf Jaenisch. Monoclonal mice generated by nuclear transfer from mature B and T doner cells〔J〕. Nature, 2002,415,1035～1038 �〔4〕Wakayama T, Rodriguez I, Perry AC, et al. Mice cloned from embryonic stem cells〔J〕. Proc Natl Acad Sci USA, 1990，96(26):14984～14989 �〔5〕Campbell.K.H.S, Mc whiir,J, Riechie.W.A, et al. Sheep cloned by nuclear transfer from a cuctured cell line〔J〕. Natrue,1996,38(7):64～66 �〔6〕Sims M.M, FirsA NI. Proction of fetuses from totipotent cultured bovine inner cell mass cells〔J〕. Theriogenology, 1993,39:313 �〔7〕Stice SL, strolchonko NS.Pluriopotent bovine embryonic cell lines directed embryonic development following nuclear transfer biology of Reproction〔J〕. Theriogenology, 1996,54:100～110