‘壹’ 怎么用显微镜检测细菌有效菌数
一般来说观察细菌都是昌亮有规定的,要求耐滚宽在多大的面积内,观测出细菌个数。你可以先通过显微镜专用的分化尺与目镜刻度尺配合使用来测量每单位面积内的细菌个数。具体的设备要有的,否则很难评判的。专业一点价格大概在3000左右,普通一点的备敏600-1500不等
‘贰’ 测定微生物数量的方法
现在用的多的就是这几种,楼主挑着看吧
细菌计数1.计数器测定法:
即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内,用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3),因而根据计数器刻度内的细菌数,可计算样品中的含菌数。本法简便易行,可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数,也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:
电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化,小孔仅能通过一个细胞,当一个细胞通过这个小孔时,电阻明显增加,形成一个脉冲,自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确,但它只识别颗粒大小,而不能区分是否为细菌。因此,要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法
常用的有平板菌落计数法,是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液,作一系列的倍比稀释,然后将定量的稀释液进行平板培养,根据培养出的菌落数,可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高,是一种检测污染活菌数的方法,也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意:①一般选取菌落数在30~300之间的平板进行计数,过多或过少均不准确;②为了防止菌落蔓延,影响计数,可在培养基中加入O.001%2,3,5一氯化三苯基四氮唑(TTC);③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验,是最常用的活菌计数法。
4、比浊法
比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比,与光密度成正比,所以,可用光电比色计测定菌液,用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷,但只能检测含有大量细菌的悬浮液,得出相对的细菌数目,对颜色太深的样品,不能用此法测定。
5、测定细胞重量法
此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重;干重法系单位体积培养物经离心后,以清水洗净放人干燥器加热烘干,使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品,是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
6、测定细胞总氮量或总碳量
氮、碳是细胞的主要成分,含量较稳定,测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。此法适于细胞浓度较高的样品。
7、颜色改变单位法(colour change unit,简称CCU)
这种方法通常用于很小,用一般的比浊法无法计数的微生物,比如支原体等,因为支原体的液体培养物是完全透明的,呈现为清亮透明红色,因此无法用比浊法来计数,由于支原体固体培养很困难,用cfu法也不容易计数,因此需要用特殊的计数方法,即CCU法。它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标,来计数微生物的相对含量的,下面以解脲脲原体为例单介绍其操作:,简
(1)取12只无菌试管,每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。
(2)在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液,充分混匀,从中吸取0.2ml加入第二管,依次类推,10倍梯度稀释,一直到最末一管
(3)于37度培养,以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU,也就是支原体的最大代谢活力,比如第六管出现颜色改变,他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.
一般来说,比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数,但是对支原体这样比较特殊的微生物,用CCU法比较合适。
‘叁’ 如何检测菌落总数
菌落总数检测一般步骤为:
采样 — 样品制备与稀释 — 倒平板 — 涂布平板 — 倒置培养 — 菌落计数 — 计算菌落总数
样品制备,需要对样品进行均质,根据客户需要检测的样品不同。WIGGENS提供不同的均质设备,如均质机,拍打式均质器等;
样品的稀释,国标中采用1:10的十倍稀释方法,SOCOREX提供各种手动精密移液器,瓶口分液器,移液管控制器为液体操作提供了保证。
倒平板,扒敬使用的培养基为含有琼脂的固体培养基。培养基在配备的过程中需要经过煮沸和保温的步骤。WIGGENS红外加热磁力搅拌器,直接使用红外辐射方式进行加热,1L培养基只需要10分钟即春运慎可煮沸,极大节约了客户培养基制备时间。在倒平板之前,需要恒温培养基46±1 ℃, WIGGENS恒温水浴锅,可以为用户提供的温度控制和恒温条件;
涂布平板,培养基在培养皿中冷却成固态之后,将稀释后的样品用移液器取悄顷1mL,滴到培养基表面,用涂布棒涂匀。WIGGENS有专用的培养皿转盘,可以有效的将样品液均匀的涂布在培养基表面。
倒置培养,将涂布完毕的平板,放入恒温培养箱中进行培养,一般培养时间约为48h。WIGGENS恒温培养箱内容积50-140L各种规格的台式及落地式培养箱,先进的设计及数据接口,可以直接通过电脑编程控制及信息处理,非常适合规范化培养要求。
菌落数计算,经过48小时的培养之后,在培养基表面会长出菌斑,每个菌斑代表一个微生物。一般在培养皿中菌落数为30-300个之间,为有效菌落数。低于30个,会因为样本量不足,随机性大;超过300个,会因为菌落数太多,过于密集产生菌斑重叠等现象,不利于准确计数。WIGGENS菌落计数器,是带有非闪烁式环形光源,放大镜,压力传感器,计数笔等,可以让使用者轻松计数。
计算菌落总数,培养皿中的菌落数需要通过公式换算。 WIGGENS菌落计数器,配套软件可以直接通过压力传感器进行培养皿中菌落计数,通过软件内嵌程序直接计算出被检测样品中菌落总数。
‘肆’ 如何测量微生物的菌数
关于细菌数量的统计,广义的细菌是指所有的微生物,包括细菌(bacteria)、霉菌(filamentous fungi)和酵母(yeast),细菌是原核微生物,霉菌和酵母是真核微生物,为什么要区分开,后面会提到;狭义的细菌就是指的上面的bacteria。传统的对微生物数量统计的方法通常是使用涂布平板法,这个方法统计的微生物数量跟实际微生物数量还是有差别的,因为微生物分为可培养微生物与不可培养微生物,据文献报道,不可培养微生物占到自然界90%以上,因此稀释涂平板法的统计结果,我们自己心里有数就好。
‘伍’ 细菌总数怎么检测
细菌总数检测目前国标规定的方法为平板计数法,其检验方法是:
在玻璃平皿内,接种一毫升水样或祥搭稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中,冷却凝固后在37°C培养24小时,培养基上胡宴旦的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数。
有的国家把培养温度定为35°C或其他温度,也有把培养时间定为48小时的。这裤扰种方法精度高,但耗时长,难以满足实际工作需要。
为了简化检测程序、缩短检测时间,国内外学者进行了大量的快速检测方法的研究,提出了阻抗检测法、Simplate TM全平器计数法、微菌落技术、纸片法等检测方法,取得了一定的成果,但检测时间仍在4 h以上。
本研究在分析了已有研究成果的基础上,提出了在滤膜上染色后,直接计数的细菌总数检测方法,具体步骤为:
用集菌仪进行细菌收集→在膜上进行染色→在油镜下计数→按公式计算出菌液浓度。实验结果表明,该方法与传统的平板培养法无显着性差异,检测时间约1 h,是一种快速的细菌总数检测方法。
(5)微生物检查如何查看个数扩展阅读:
水中通常存在的细菌大致可分为三类:
1、天然水中存在的细菌。普通的是荧光假单孢杆菌、绿脓杆菌,一般认为这类细菌对健康人体是非致病的。
2、土壤细菌。当洪水时期或大雨后地表水中较多。它们在水中生存的时间不长,在水处理过程中容易被去除。腐蚀水管的铁细菌和硫细菌也属此类。
3、肠道细菌。它们生存在温血动物的肠道中,故粪便中大量存在。水体中发现这类细菌,可以认为已受到粪便的污染。致病性肠道细菌有沙门氏杆菌(伤寒和副伤寒菌)、B型炭疽菌、痢疾志贺氏菌和霍乱弧菌等。
‘陆’ 细菌总数是怎么检验的
细菌总数是水质参数之一,指单位体积水中的细菌总量。其检验方法是:在玻璃平皿内,接种一毫升水样或稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中,冷却凝固后在37°C培养24小时,培养基上的菌落数或岁或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数。有的国家把培养温度定为35°C或其他温度,也有把培养时间定为48小时的。
水中通常存在的细菌大致可分为三类:
(1)天然水中存在的细菌。普通的是荧光假单孢杆菌、绿脓杆菌,一般认为这类细菌对健康人体是非致病的。乎并伍
(2)土壤细菌。当洪水时期或大雨后地表水中较多。它们在水中生存的时间不长,在水处理过程中容易被去除。腐蚀水管的铁细菌和硫细菌也属此类。
(3)肠道细菌。它们生存在温血动物的蔽物肠道中,故粪便中大量存在。水体中发现这类细菌,可以认为已受到粪便的污染。致病性肠道细菌有沙门氏杆菌(伤寒和副伤寒菌)、志贺氏菌(痢疾菌)和霍乱弧菌等。
‘柒’ 微生物检验取样数量如何确定
问题不够清楚哦,你要测定什么,微生物限度,还是已知菌的检测?我只能举例说明哦,是关于药品的。不明白的你可以Hi我,或追问。我根据你的问题按步骤来回答。一、取样1、供试品应随机抽样。一般抽样量(2个以上最小包装单位)为检验量的3倍量。2、对异常的供试品应针对性的抽样。抽样时,凡发现有异常或可疑的样品,应选取有疑问的样品,但机械损伤、明显破裂的包装不得作为样品。凡能从药品、瓶口(外盖内侧及瓶口周围)、外观看出长螨、发霉、虫蛀及变质的药品,可直接判为不合格,无需在抽样检验。不能以外观有上述情况而检查内容物合格,来判断该药品合格。3、供试品收检后应及时检验,若有困难,应存放在该品种规定的储存条件下(一般为阴凉干燥处),勿冷藏或冷冻,以防供试品内污染菌因保存条件不妥引起致死、损伤或繁殖。4、供试品在检验之前,应保持原包装状态,严禁开启,包装已开启的样品不得作为供试品。5、供试品的取样必须在净化条件下无菌操作,严防再污染。(原料药、装量大的药)6、有剂型检验量均需取自2个以上包装单位(中药蜜丸、膜剂,除需取自2个以上包装外,还应取4丸、片以上样品)。7、固体及半固体(粘稠性供试品)制剂检验量为10克。8、液体制剂检验量为10毫升。9、膜剂除另有规定外,中药膜剂检验量为30~50cm2 ,化学膜剂及生化药膜剂检验量为 100cm2 。10、贵重的或微量包装的供试品检验量可以酌减,除另有规定外,口服固体制剂不低于3克,液体制剂采用原液者不得少于6毫升,采用供试液者不得少于3毫升,外用药品不得少于5克。二、培养基的制定1、一般如果是微生物限度的话,有两种培养基:检测细菌用营养琼脂培养基,检测霉菌及酵母菌用玫瑰红钠琼脂培养基。2、另外,如果还有致病菌要求的话,通常革兰氏阴性肠道菌用伊红美蓝琼脂培养基(EMB琼脂),沙门氏菌用沙门氏志贺氏菌属琼脂(SS 琼脂),霍乱弧菌用硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基(TCBS琼脂),等等……3、最后的观察:通常是计数,如楼上所说的数个数。然后就是菌落形态的观察,主要有大小、颜色、厚度、边缘状态等等。不过看到你对楼上的追问,我在想,你是不是想问对未知微生物的鉴定,譬如泥土里的微生物种类、空气中的微生物种类等?那是微生物的分离和鉴定,不叫检测吧。那样的话一般是用营养琼脂培养基和马丁氏琼脂培养基。