常见的生物消毒方法有哪些

‘壹’ 实验室常用的消毒和灭菌方法有哪些呢

常用的消毒灭菌方法多采用物理方法和化学方法两大类。
1.干热灭菌法是利用恒温干燥箱内120℃-150℃的高热，并保持90-120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。

主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一，在进行动物细胞体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。

2.湿热灭菌法压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。

它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。

3.射线灭菌法利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。

紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多种微生物。紫外线的作用机制是通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。

4.过滤除菌法是将液体或气体通过有微孔的滤膜过滤，使大于滤膜孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌的方法。过滤除菌法大多用于遇热易发生分解、变性而失效的试剂、酶液、血清、培养液等。目前，常用微孔滤膜金属滤器或塑料滤器正压过滤除菌，或用玻璃细菌滤器、滤球负压过滤除菌。

5.化学消毒剂消毒法用于那些不能利用物理方法进行灭菌的物品、空气、工作面、操作者皮肤、某些实验器皿等。在使用时应注意安全，特别是用在皮肤或实验材料上的消毒剂，须选用合适的药剂种类、浓度和处理时间，才能达到安全和灭菌的目的。

抗生素抑菌法主要用于培养液，是培养过程中预防微生物污染的重要手段以及作为微生物污染不严重时的“急救”措施。常用的抗生素有青霉素、链霉素和新霉素等。

‘贰’ 常见的五种消毒方法

1、机械消毒法：用去除或隔离的方法将染毒物品的表面去除或隔离，防止毒剂损伤人员。如被毒剂污染的粮食、食品等，可先将表层部分去除，然后通风日晒和彻底冲洗。2、焚烧：是一返唯慧种简单、迅速、彻底的消毒方法，因对物品的破坏性大，故漏答只限于处理患传染病病鸭尸体、污染的垫料、垃圾等。焚烧应在专用的焚烧炉内进行。

1、机械消毒法：用去除或隔离的方法将染毒物品的表面去除或隔离，防止毒剂损伤人员。如被毒剂污染的粮食、食品等，可先将表层部分去除，然后通风日晒和彻底冲洗。

2、焚烧：是一种简单、迅速、彻底的消毒方法，因对物品的破坏性大，故只限于处理患传染病病鸭尸体、污染的垫料、垃圾等。焚烧应在专用的焚烧炉内进行。

3、煮沸消毒法：即利用煮沸100℃经5min可杀死一切细菌的繁殖体。一般消毒以煮沸10min为宜。用于一般外科器械、胶管和注射器、饮水和食具的消毒。

4、干热空气灭菌法：干热空气灭菌法属于干热灭山春菌法，是其中的一种。干热空气灭菌是指使待灭菌物品在干燥空气中被加热，用达到足以杀死细菌的温度的方法来灭菌。

5、高压蒸汽灭菌法：可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌效果最好、应用最广的灭菌方法。方法是将需灭菌的物品放在高压锅里，加热时蒸汽不外溢，高压锅内温度随着蒸汽压的增加而升高。

‘叁’ 常用的消毒和灭菌方法包括

常用的消毒和灭菌方法包括：热力消毒、化学消毒和紫外线消毒。

热力消毒原理：高温能使微生物的蛋白质和酶变性或凝固，丧失其功能，使新陈代谢受到障碍而死亡，从而达到消毒与灭菌的目的。在热力消毒分为湿热（如高压灭菌）与干热（包括燃烧或焚烧）两大类。

化学消毒原理：一是使蛋白质变性，酚类、醇类、醛类和重金属等，能使蛋白质凝固或变性，使病毒的生长繁殖受抑制而死亡。二是干扰酶系统，重金属盐能与微生物的巯基（－SH)酶结合，使其活性降低或消失，从而影响病原菌的代谢。

氧化剂、卤素类也能氧化微生物体内的某些酶系统。三是使细胞浆膜通透性增加，清洁剂能降低病原菌细胞膜表面张力，使细胞培卖碧膜通透性增加，菌体配唯内物质外漏，引起死亡。

紫外线消毒原理：通过紫外线的照射，破坏及改变微生物的DNA结构，使细菌当即死亡或不能繁殖后代，达到杀菌的目的。紫外线辐照能量低，穿透力弱，仅能杀灭直接照射到的微生物。

消毒和灭菌的区别

消毒与灭菌的目的不同，消毒是将配举大部分病原微生物杀死，仅有小部分病原微生物存活，以达到无法使人体发病的目的，灭菌是将所有病原微生物杀死，已达到完全无菌的状态，并且灭菌的难度比消毒的难度大。

其次两者使用的场所和处理的物品也不相同，消毒大多数使用在公共场所，灭菌主要用于医疗物品。平时要注意个人卫生，吃饭之前要洗手，避免细菌进入体内。

‘肆’ 常用的消毒灭菌法有哪些

（1）加热灭菌法

利用高温来杀死微生物（超过最高生长温度）的方法。加热灭菌的原理：当高温作用于微生物时，首先引起细胞内生理生化反应速率加快，机体内对温度敏感的物质如蛋白质、核酸等，随着温度的增高而遭受不可逆的破坏，尽而导致细胞内原生质体的变化、酶结构的破坏，从而使细胞失去了生活机能上的协调，停止了生长发育。随着高察前和温的继续作用，细胞内原生质便发生凝固，酶结构完全破坏，活动消失，生化反应停止，渗透交换等新陈代谢活动消失，细胞死亡。加热灭菌可分干热灭菌和湿热灭菌两大类。

1）干热灭菌 利用灼烧或干热空气灭菌而没有饱和水蒸气参加的灭菌法称为干热灭菌法。由于干热灭菌使用方便，方法简单，故在生产上广泛应用。如火焰灭菌法：直接利用火焰把微生物烧死，故又称焚烧灭菌法。采用此法灭菌既彻底又迅速，但只适用于金属制的接种工具、试管口及污染物品等的处理。热空气灭菌法：即在电热恒温干燥箱中利用干热空气来灭菌。

2）湿热灭菌 即利用蒸汽进行灭菌的方法。湿热灭菌又分为高压、常压、间歇灭菌和巴氏灭菌4种。

①高压蒸汽灭菌 由于高压蒸汽具有较强的穿透败盯力和较常压高的温度，能大大缩短灭菌时间，提高工作效率，加之蛋白质在湿热条件下容易变性，在热蒸汽条件下，细菌的芽孢在120℃，经20～30分钟可全部被杀死。如灭菌材料体积较大，不易被穿透时，可将压力增加到0.152兆帕，延长至1～2小时。在高压蒸汽灭菌中，灭菌温度随蒸汽压力的增加而升高（图2-6）。

图2-7 简易常压灭菌法

③常压间歇蒸汽灭菌法 这是利用常压蒸汽反复几次灭菌的方法。具体做法是将待灭菌物品放在锅内，100℃处理1小时左右，杀死微生物的营养细胞，让其冷却至30℃左右，此时芽胞会萌发，再以同样方法加热处理，反复3次，可达到灭菌目的。该方法可用于不耐高温的药品、营养物、特殊培养基的灭菌。

④低温巴氏灭菌法 即在60～70℃下，经一定时间，杀死有害微生物的方法。适应于不耐高温的物品消毒。有些培养基，在高温下遭到破坏，用此法既可杀死致病微生物的营养体，又能使培养基的成分不致受到严重破坏。食用菌生产中培养料堆积发酵工艺，就是利用这个原理杀死其中的病虫、杂菌。

（2）过滤除菌法

又分液体过滤和空气过滤两种，就是采用机械的方法，设计一种滤孔比细菌还小的筛子，做成各种过滤器，通过机械过滤，只让液体培养基或空气从筛孔流出，各种微生物菌体则留在筛子上，从而达到除菌的目的。这种方法适用于对热不稳定的体积小的液体培养基（如动物血清、蛋白质、酶、维生素等）及气体的灭菌。超净工作台的工作原理就是将带菌空气通过过滤灭菌形成无菌空气，从风洞中吹出，来造成工作台范围的无菌状态。过滤灭菌的最大优点是不破坏培养基中各种物质的化学成分。常用的过滤器有用硅藻土制的、石棉制的、陶瓷土制的，也有用火棉胶、硝化纤维素滤膜制成的。

（3）辐射灭菌法

利用辐射产生的能量进行杀菌的方法称辐射灭菌。辐射可分电离辐射和非电离辐射两种，α-射线、β-射线、γ-射线、X-射线、中子和质子、微波等属电离辐射，紫外线、臭氧、日光为非电离辐射。

1）紫外线灭菌 紫外线杀菌的原理是利用紫外线的辐射作用。用灯管直接照射细菌使其发生光化学反应，将细菌细胞质诱导形成胸腺嘧啶双聚体，从而抑制DNA的复制而发生变性、致死。另一方面，空气在紫外线照射下产生的臭氧（O₃），也具有一定的杀菌作用。紫外线的有效作用距离为1.2～2.0米。紫外灯一般悬吊在接种室或培养室的上方，个数依房间大小而定，容1～2个人操作的接种室，安装一个30瓦的紫外灯就可以了。在每次接种前，应将所需的器具一起放入接种室（箱）内，然后打开紫外灯照射。如果接种室体积较大，开灯照射2小时才能达到灭菌效果；如果较小，只需开灯半小时左右既可达到灭菌效果。由于紫外线穿透力弱，即使是普通玻璃也不能滤过，因此，只适于空气或物体表面的灭菌。紫外线对人体皮肤，尤其是眼睛有杀伤作用，应避免直视，工作时应将紫外灯关闭。紫外线消毒时工作场所如果处在稍暗无光的情况下，能提高杀菌效果。细菌接受致死量紫外线照射后，随即给予可见光照射，部分细菌有复活的可能。干细胞比湿细胞对紫外线的抗性强，孢子比其营养细胞对紫外线更具抗性。

2）微波灭菌 由于微生物的细胞中都含有70%～90%的水分，水分子在微波电场中被极化，并随着电场方向的改变而转动，在转动过程中分子之间高速度摩擦产生热能，这种热能不同于外部加热，可在短时间里使细胞爆破而物体本身的温度却只有极微增加，从而达到灭菌效果。用YM7601型微波炉只需60秒钟就能杀死食品中192万个大肠杆菌。

3）臭氧发生器消毒 臭氧（O₃）具有强烈的氧化作用，能破坏微生物的细胞膜与核酸。O₃也是一种暂态物质，常温下能自然分解，还原成氧。其灭菌原理实际上和紫外线消毒极相似。

‘伍’ 常用的消毒方法有哪几种

常用的消毒方法有三种，即物理消毒法、化学消毒法、生物消毒法。

（1）物理消毒法

指用物理因素杀灭病原微生物及其他有害微生物的方法。包括自然净化、机械除菌、高热灭菌和太阳光照射等。

（2）化学消毒法

指用化学药品进行的消毒方法。

（3）生物消毒法

指用微生物发酵所产之热达到消灭病原微生物的方法。

‘陆’ 常用的消毒方法有哪些

通常所说的消毒是指经过高压或常压灭菌后，菌种瓶冷却至室温，为了将纯菌种接入菌种瓶内，就必须创造局部相对无菌的接种渗源空间，为此就得采用物理或化学方法对局部空间进行消毒，使飘浮的大部分微生物致死。换句话说，就是净化接种的空间。此外，栽培前为了改善菌种培养及菌棒栽培环境，尤其是老菇棚、菌种场的空间及卫生条件等，统称为消毒。消毒的方式主要有以下几种：

（1）巴氏消毒

在60～66℃的温度下，可以把大部分营养菌杀死，如双孢菇培养料的后发酵过程，能杀死有害于蘑菇的杂菌和害虫。

（2）沸水消毒

主要用于金属器具、针筒等的消毒。在沸水中烧煮20～30分钟，可杀死微生物的营养体，细胞芽孢则需1～2小时才能杀死。若在水中加入2%～5%的碳酸溶液少许，可大大缩短消毒时间；加入1%碳酸氢钠可提高水的沸点，加速芽孢死亡，并能防止金属器械因烧煮而生锈。

（3）干燥消毒

利用物质干燥使微生物失水，以达到杀菌或抑菌的目的。微生物细胞含有70%～90%的水分，微生物失水后就会趋向死亡。人们常利用这一特性来对食品（如干香菇、木耳）、药品等作较长期的保存。

（4）渗透压消毒

利用高渗透压或低渗透压杀菌或抑菌的方法称渗透压消毒。通常用的盐溶液浓度为20%左右，糖溶液浓度为50%～70%。

（5）化学药剂消毒

这是利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法。下面介绍几类主要消毒药剂：

石灰：有生石灰与熟石灰之分。其机理是能水解蛋白质和核酸，使酶系统受破坏，并能分解菌体中的糖类。1%～3%的石灰水可起到很强的杀菌作用。在菇房及其周围环境，须用生石灰进行消毒，因为熟石灰长时间暴露在空气中，可吸收空气中的二氧化碳，形成没有杀菌作用的碳酸钙。

石硫合剂：与石灰配制的波尔多液，常用作菇房及床架的消毒。波尔多液是以硫酸铜石灰等量式100～200倍的配合式，即硫酸铜1千克，石灰1千克，水100～200升。配制时先将硫酸铜、石灰分别在水中溶化，同时倒入另一只木桶或大缸内，边倒边搅拌，即成天蓝色的波尔多液。配制要用木桶或陶瓷的盛器，随配随用，不宜久贮。使用时用喷雾器喷洒。

煤酚皂液（C₆H₄CH₃OH）：是一种表面活性物质消盯喊孙毒剂，又称来苏尔，为含50%煤酚的肥皂溶液。它的杀菌机制与石炭酸相同，杀菌效力比苯酚大4倍，且对皮肤的刺激比碳酸小，常用浓度2%～4%，用于皮肤、接种室（箱）、培养室台面、地面、工具等的消毒，常安排在熏蒸后、接种前使用。煤酚皂液除本身具有较强的杀菌作用外，还具有沉降尘埃、菌体和中和甲醛气体作用，使空间更洁净、舒适。

乙醇（C₂H₅OH）：又称酒精。是良好的脱水剂、蛋白质变性剂及脂溶剂，70%～75%乙醇杀菌效果最好。无水酒精及95%酒精杀菌力很低，其原因是高浓度的酒精具有很强的脱水作用，与杂菌菌体接触后，会立即引起菌体表层蛋白质的凝固，形成一层保护膜，使酒精分子无法进一步渗入菌体细胞内。

甲醛（CH₂O）：有辛辣臭味，易溶于水，对人眼、鼻有强烈刺激作用。甲醛溶液又称福尔马林，含甲醛37%～40%，有较强的腐蚀性与刺激性，是一种强还原剂。它的杀菌机理是：与微生物蛋白质的氨基结合，使其蛋白质凝固变性达到杀菌的目的。0.1%～0.25%的甲醛溶液，在6～12小时内能杀灭细菌、芽孢及病毒。对使用时间较长、污染较重的接种室（箱）或培养室，可采用甲醛与高锰酸钾混合熏蒸的方法进行彻底灭菌。常用方法有两种，一种是按每立方米空间用6～10毫升甲醛溶液与半量至等量的高锰酸钾混合进行氧化反应，放出热量，使甲醛沸腾挥发。接种室一般熏蒸12小时，接种箱熏蒸0.5小时。另一种方法是将甲醛溶液直接置小电炉或火盆上加热蒸发。此法需人看管，但效果好。因为甲醛挥发过程中水分也因加热而蒸发，提高了空间湿度，增强了消毒灭菌效果。消毒后的接种室应在12小时后，加热蒸发等量氨水或喷入3%煤酚皂液进行中和，再待6～10小时才能进入操作。

5%甲醛溶液还常用于防腐及作物种子表面消毒；用于器械消毒，浸泡1～2小时。

高锰酸钾：紫色针状结晶，是一种常用的强氧化剂。稀释1000倍到1250倍的高锰酸钾溶液都具有杀菌作用，0.5%～1%的高锰酸钾水溶液在5分钟内可杀死大多数细菌；5%的水溶液1小时内可杀死细菌芽孢，但对霉菌的杀伤力较弱；0.1%的高锰酸钾水凯链溶液常用于皮肤、玻璃器皿的消毒，但要随用随配。因高锰酸钾可以和培养料内的有机物发生化学反应被还原成无杀菌作用的二氧化锰，故不能直接用于拌料灭菌。

新洁尔灭：是阳离子型表面活性强力杀菌剂，具有芳香气味，极苦，易溶于水。对无芽孢病原菌、霉菌等具有较强的杀菌作用，效果为碳酸的10倍。消毒特点：快速、彻底、高效。原液浓度5%，常用浓度为0.1%，用作皮肤、金属器械的消毒。注意应现配现用。对人体无刺激性，对器械也无腐蚀性，是一种高效无毒的杀菌消毒抑制剂。

硫磺：常用于培养室及菇房等空间的熏蒸消毒，还可用于杀虫、杀螨。使用剂量是15～20克/米³。由于熏蒸产生的SO₂的密度比空气大，容易下沉，熏蒸时，应注意将装有硫磺的容器放在空间较高的位置。为了提高杀菌效果，熏蒸前向墙壁和空间喷少量水，促使产生更多的亚硫酸，提高灭菌效果。

多菌灵：多菌灵为广谱高效内吸氨甲基酸酯类杀真菌剂，具有广谱、高效、有效期长等特点，对人、畜低毒，残效期10天左右，是食用菌生产中的一种常用的理想杀菌剂。但在使用中，由于菇农缺乏农药常识，操作不当，导致效果下降。现就多菌灵的使用方法和注意事项简述如下：

①市售的多菌灵多为50%可湿性粉剂和40%胶悬剂，前者使用更为普遍。无论选用哪一种剂型，都应购买质量可靠、信誉好的正规产品，且出厂后一年内使用为佳。超过一年且仍在有效期内的，可酌情加大剂量。

②拌料时，要严格控制药液浓度，50%可湿性粉剂的一般用量是占干料重量的0.1%，如果用量过大，不仅增加成本，还会影响菌丝生长。

③溶解粉剂时，应注意水量充足、搅拌均匀、溶解完全；拌料时料、药搅拌均匀。

④多菌灵在碱性环境中易分解失效，因此拌料时避免同时使用石灰，更不能把多菌灵、石灰制成混合液使用。

⑤多菌灵耐高温，在发酵、高压灭菌过程中，不受影响。

⑥多菌灵易使杂菌产生抗药性，故应与其他杀菌剂交替使用，增强杀菌效果。

⑦多菌灵对毛霉、根霉的防治效果较差，在使用时应适当提高培养料pH，抑制毛霉、根霉的生长。

⑧银耳、木耳、猴头菇对多菌灵特别敏感，栽培中应避免使用。

近年来，随着各地食用菌产业的迅速发展，在消毒剂的研制与生产方面也像雨后春笋一样不断出现，大有替代这些传统的消毒药剂之势，如克霉王、必洁士、净霉灵等，在此不再一一介绍。

‘柒’ 常用的灭菌方法有哪些

常用的灭菌方法有哪些?
微生物学实验常用的灭菌方法有哪些一般分为溼热灭菌法和干热灭菌法两种。
一、溼热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，所以该法的灭菌效率比干热灭菌法高，是最常用的灭菌方法。溼热灭菌法可分为：煮沸灭菌法、巴氏消毒法、高压蒸汽灭菌法、流通蒸汽灭菌法、和间歇蒸汽灭菌法。
（1）煮沸灭菌法：将水煮沸至100摄氏度，保持5-10分钟可杀死细菌繁殖体，保持1-3小时可杀死芽胞。在水中加入百分之一至百分之二的碳酸氢钠时沸点可达105摄氏度，能增强杀菌作用，还可去污防锈。此法适用于食具、刀箭、载玻片及注射器等。
（2）巴氏消毒法：一种低温消毒法，因巴斯德首创而得名。有两种具体方法，一是低温维持法：62摄氏度维持30分钟；二是高温瞬时法：75摄氏度作用15-30秒。该法适用于食品的消毒。
（3）流通蒸气灭菌法：利用常压下的流通蒸汽进行灭菌。
（4）间歇蒸汽灭菌法
（5）高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3摄氏度，维持15-20分钟。
二、干热灭菌法是指在干燥环境（如火焰或干热空气）进行灭菌的技术。一般有火焰灭菌法和干热空气灭菌法。
（1）火焰灭菌法：是指用火焰直接烧灼的灭菌方法。该方法灭菌迅速、可靠、简便，适合于耐火焰材料（如金属、玻璃及瓷器等）物品与用具的灭菌，不适合药品的灭菌。
（2）干热空气灭菌法：是指用高温干热空气灭菌的方法。该法适用于耐高温的玻璃和金属制品以及不允许溼热气体穿透的油脂（如油性软膏机制、注射用油等）和耐高温的粉末化学药品的灭菌，不适合橡胶、塑料及大部分药品的灭菌。
临床上常用的灭菌的方法有哪些？一、物理方法
1、温度
利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方法。高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活，从而起灭菌作用，低温通常起抑菌作用。
1）干热灭菌法:
a.灼烧灭菌法：利用火焰直接把微生物烧死。此法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，所以使用范围有限，只适合于接种针、环、试管口及不能用的污染物品或实验动物的尸体等的灭菌。
b.干热空气灭菌法：这是实验室中常用的一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至160°C，恒温1小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。
2）溼热灭菌法:
在同样的温度下，溼热灭菌的效果比干热灭菌好，这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性。另一方面高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡。
a.巴氏消毒法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在62°C，30分钟既可达到消毒目的。此法为法国微生物学家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。
b.煮沸消毒法：直接将要消毒的物品放入清水中，煮沸15分钟，即可杀死细菌的全部营养和部分芽孢。若在清水中加入1%碳酸钠或2%的石炭酸，则效果更好。此法适用于注射器、毛巾及解剖用具的消毒。
c.间歇灭菌法：上述两种方法在常压下，只能起到消毒作用，而很难做恭完全无菌。若采用间歇灭菌的方法，就能杀灭物品中所有的微生物。具体做法是：将待灭菌的物品加热至100°C，15~30分钟，杀死其中的营养体。然后冷却，放入37°C恒温箱中过夜，让残留的芽孢萌发成营养体。第2天再重复上述步骤，三次左右，就可达到灭菌的目的。此法不需加压灭菌锅，适于推广，但操作麻烦，所需时间长。
d.加压蒸汽灭菌法：这是发酵工业、医疗保健、食品检测和微生物学实验室中最常用的一种灭菌方法。它适用于各种耐热、体积大的培养基的灭菌，也适用于玻璃器皿、工作服等物品的灭菌。
加压蒸汽灭菌是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的，以大量蒸汽使其中压力升高。由于蒸汽压的上升，水的沸点也随之提高。在蒸汽压达到1.055公斤/厘米2时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到121°C。在这种情况下，微生物（包括芽孢）在15~20分钟便会被杀死，而达到灭菌目的。如灭菌的对象是砂土、石蜡油等面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭菌时间。
在加压蒸汽灭菌中，要引起注意的一个问题是，在恒压之前，一定要排尽灭菌锅中的冷空气，否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系，这样会大大降低灭菌效果。
3）影响灭菌的因素
a.不同的微生物或同种微生物的不同菌龄对高温的敏感性不同。多数微生物的营养体和病毒在50~65°C，10分钟就会被杀死；但各种孢子、特别是芽孢最能抗热，其中抗热性最强的是嗜热脂肪芽孢杆菌，要在121°C，12分钟才被杀死。对同种微生物来讲，幼龄菌比老龄菌对热更敏感。
b.微生物的数量多少显然会影响灭菌的效果，数量越多，热死时间越长。
c.培养基的成分与组成也会影响灭菌效果。一般地讲，蛋白质、糖或脂肪存在，则提高抗热性，pH在7附近，抗热性最强，偏向两极，则抗热能力下降，而不同的盐类可能对灭菌产生不同的影响；固体培养基要比液体培养基灭菌时间长。
4）灭菌对培养基成分的影响
a.pH值普遍下降。
b.产生混浊或沉淀，这主要是由于一些离子发生化学反应而产生混浊或......
什么叫灭菌？灭菌方法有哪几种灭菌的定义：
灭菌是指用物理或化学的方法杀灭全部微生物，包括致病和非致病微生物以及芽孢，使之达到无菌保障水平。经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。
微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。
将培养基、发酵设备或其他目标物中所有微生物的营养细胞及其芽胞（或孢子）杀灭或去除，从而达到无菌的过程。
常用的灭菌方法：
热灭菌法
热灭菌法利用高温使微生物细胞内的一切蛋白质变性，酶活性消失，致使细胞死亡。通常有干热、溼热和间歇加热灭菌等法。
干热灭菌
火焰灼烧法或烘箱内热空气灭菌法称为干热灭菌法把金属器械或洗净的玻璃器皿放入电热烘箱内，在150～170℃下维持1～2小时后，可达到彻底灭菌（包括细菌的芽孢）的目的。灼烧（incineration或bustion）是一种最彻底的干热灭菌法，应用范围仅限于接种环、接种针的灭菌或带病原菌的材料、动物尸体的烧毁等。
溼热灭菌以沸水、蒸气和蒸气加压灭菌。
巴氏消毒法：因最早由法国微生物学家巴斯德用于果酒消毒，故名。这是一种专用于牛奶、啤酒、果酒或酱油等不宜进行高温灭菌的液态风味食品或调料的低温消毒方法。
巴氏灭菌法就是溼热灭菌，此法有两种方式[1]，①经典的低温维持法（lowtemperatureholdingmethod，LTH）：在61.7～62.8℃下处理30分钟；②较现代的高温瞬时法（hightemperatureshorttime或flushpoint，HTST）：在71.6℃或略高温度下处理15分钟。在上述诸法中，以蒸气加压灭菌效果最好，可用常压蒸气灭菌，也可在高压蒸气锅中（一般使用1千克/厘米2）灭菌,其蒸气温度可达121℃,能将耐热的芽孢在30分钟内全部杀死。但对某些易被高压破坏的物质，如某些糖或有机含氮化合物，宜在0.6千克/厘米2压力下(110℃)灭菌15～30分钟。
煮沸消毒法：采用在100℃下煮沸数分钟的方法，一般用于饮用水的消毒。
间歇灭菌
间歇灭菌连续3天,每天进行一次蒸气灭菌的方法。此法适用于不能耐100℃以上温度的物质和一些糖类或蛋白质类物质。一般是在正常大气压下用蒸气灭菌1小时。灭菌温度不超过100℃,不致造成糖类等物质的破坏，而可将间歇培养期间萌发的孢子杀死，从而达到彻底灭菌的目的。
辐射灭菌
辐射灭菌在一定条件下利用射线进行灭菌的方法。较常用的有紫外线，其他还有电离辐射（射线加快中子等）。波长在25000～80000纳米之间的激光也有强烈的杀菌能力,以波长26500纳米最有效。辐射灭菌法仅限于某一定材料，因所需设备复杂，难于广泛使用。
渗透压灭菌
渗透压灭菌利用高渗透压溶液进行灭菌的方法。在高浓度的食盐或糖溶液中细胞因脱水而发生质壁分离，不能进行正常的新陈代谢，结果导致微生物的死亡。
化学试剂灭菌
大多数化学药剂在低浓度下起抑菌作用,高浓度下起杀菌作用。常用5%石炭酸、70%乙醇和乙二醇等。化学灭菌剂必须有挥发性，以便清除灭菌后材料上残余的药物。
化学灭菌常用的试剂有表面消毒剂、抗代谢药物（磺胺类等）、抗生素、生物药物素抗生素是一类有微生物或其他生物生命活动过程中的合成的次生代谢产物或人工衍生物，他们在很低浓度时就能抑制或感染它种生物（包括病原菌，病毒，癌细胞等）的生命活动，因而可用作优良的化学治疗剂。...
医疗器械常用的灭菌方式有哪些？医疗器械灭菌工艺的验证方法就是与菌过程的相适应性，一般的灭菌方式包括以下：
1、溼热灭菌：
溼热灭菌是将产品放在压力锅内，利用饱和蒸汽在最小温度为1210C的压力下，热力和溼气被迅速传递给灭菌产品，灭菌时间至少15min。蒸汽潜热大，可迅速提高物体的温度，水分子穿透力强，容易使蛋白质凝固变性，所以溼热灭菌是热力灭菌中最常用、效果较可靠的一种灭菌方法。适用于溼热灭菌的医疗器械有：衣服、被单、聚四氟乙烯、外科手术器械、硅橡胶、聚丙烯、环氧树脂等。但对一些不耐高温的聚合物如聚氨酯等，承受不了这样的高温，只能采用其他的灭菌方法。；
2、干热灭菌：
热灭菌是将产品放于热空气箱中、利用干热空气的氧化作用，杀灭一切活的微生物或消除热原的方法。干热灭菌通常使用的温度较高，范围在160～2500℃，依据其使用的温度，暴露的时间可达2h。干热灭菌条件一般为160x120min以上、180。Cx60min以上或250。C×45min以上，也可采用其它温度和时间参数。实际应用中，干热灭菌的适用范围十分有限，一般应用于耐高温的玻璃器具和金属外科器械，另有些产品不仅要求达到必要的无菌水平，还要消除细菌内毒素(热原物质)，应用其他的灭菌方法很难消除细菌内毒素，而干热灭菌的温度时间参数设置在250℃x45min，可以除去玻璃器具的热原物质。
3、环氧乙烷灭菌：
包装系统的材料中最起码有一种具备一定的透气性，环氧乙烷灭菌是医疗器械领域比较常用的灭菌方法，环氧乙烷灭菌原理是通过其与蛋白质分子上的巯基(一SH)、氨基(一NH：)、羟基(一OH)和羧基(一COOH)以及核酸分子上的亚氨基(一NH一)发生烷基化反应，造成蛋白质失去反应基团，阻碍了蛋白质的正常生化反应和新陈代谢，导致微生物死亡，从而达到灭菌效果。环氧乙烷灭菌时，灭菌柜内的温度、溼度、灭菌气体浓度、灭菌时间都是影响灭菌效果的重要参数。一般采用的灭菌条件：温度(55±10)oC、相对溼度(60±10)％、灭菌压力8xl05Pa灭菌时间120min。环氧乙烷是一种烷化剂，穿透力强，能够使用各种包装材料，在常温下能杀灭各种微生物(包括细菌、芽孢、病毒、真菌孢子等)H。适用于生物医用高分子材料，比如天然橡胶、聚乙烯、聚丙烯及聚氯乙烯等。
4、辐射灭菌：
要求构成包装系统的所有包装材料都能够耐抗辐照射线的处理而不至于老化脆裂；
辐射灭菌是将灭菌产品放于适宜放射源辐射的1射线或适宜的电子加速器发生的电子束中进行电离辐射产生自由基通过控制辐射条件而达到杀灭微生物的方法。灭菌用的1射线通常以钴Co一60或铯Cs一137作为放射源，发生衰变时发射出1．33MeV和1．17MeV两个能级的射线，使微生物DNA受到不可恢复的损失，达到人们所需要的目标131。辐射灭菌通常用于外科器具、人工假体、注射器和缝合线等。
5、低温等离子体灭菌：
低温等离子体灭菌是最近几年才发展起来的新的低温灭菌技术。等离子体是气体或蒸汽受电场或磁场影响，使大部分分子发生离子化而形成的。等离子体灭菌器是由电源、激发原、气原、传输系统和灭菌腔室组成，抽真空后通过水蒸汽，蒸汽在电场作用下转变为等离子体。等离子体灭菌优点是杀菌效果可靠、作用温度低、灭菌后的器械不需要放置空气中去除残留气体，无腐蚀性同。目前，许多国家已开始应用这种技术，主要用于不耐热的医疗器械。
总结语：
灭菌工艺的验证是无菌保证的必要条件，灭菌产品的无菌保证取决于灭菌材料的选择，生产过程中适宜的的灭菌工艺、规范的GMP管理质量管理体系，同时灭菌工艺的确定应综合考虑生......
生物中灭菌方法有哪些灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物,包括芽孢和孢子.
实验室里常用的灭菌方法有：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸气灭菌.
（灭菌与消毒是不同的,用紫外线处理属于消毒.）
微生物实验室常用的灭菌方法有哪些常用的灭菌方法主要包括以下三种：干热灭菌；溼热灭菌；紫外灭菌
1.干热灭菌法
1.1灼烧与火焰灭菌：灼烧主要用于接种工具灭菌,在火焰上灼烧即可达灭菌目的,火焰灭菌通常用于无菌操作中试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等实验物品的灭菌,防止管口污染。
1.2干烤灭菌：利用热辐射及干热空气进行灭菌.将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后,在烤箱内加热至160℃,保温2h可完全灭菌.但不宜超过170℃.此外降温过速,骤冷易引起玻璃器皿炸裂.干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密,应有空隙,利于热空气流动,过密,致使温度不均,部分物品灭菌不彻底.
2.溼热灭菌法
通过加压提高蒸汽温度,用高压蒸汽灭菌,温度高,灭菌效果最好.
注意事项：1.完全排除高压灭菌器内的冷空气.有冷空气存在时,在同一表压下所达到的温度值要低,而冷空气排出越少,温度就低得越多.在高压蒸汽灭菌时,为保证达到规定的温度,必须将冷空气完全排除.否则,虽然压力达到,而温度达不到规定的要求,灭菌就不彻底.
3.紫外线
杀菌谱广,但穿透力弱,影响因素多,杀菌效能受到一定限制.
紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与溼度等因素有关.紫外灯杀菌的温度以20~40℃,相对溼度40%~60%为宜.
常用的消毒灭菌方法有哪些(1)天然消毒法：利用日光等天然条件杀灭致病微生物，达到消毒目的，称为天然消毒法。
①日光曝晒法：日光由于其热、干燥和紫外线的作用，而具有一定的杀菌力。日光杀菌作用的大小受地区、季节、时间等因素影响，日光越强，照射时间越长，杀菌效果越好。日光中的紫外线由于通过大气层时，因散热和吸收而减弱，而且不能全部透过玻璃，因此，必须直接在阳光下曝晒，才能取得杀菌效力。日光曝晒法常用于书籍、床垫、被褥、毛毯及衣服等的消毒。曝晒时应经常将被晒物翻动，使物品各面都能与日光直接接触，一般在日光曝晒下4～6小时可达到消毒目的。
②通风：通风虽然不能杀灭微生物，但可在短时间内使室内外空气交换，减少室内致病微生物。通风的方法有多种，如用门、窗或气窗换气，也可用换气扇通风。居室内应定时通风换气，通风时间一般每次不少于30分钟。
(2)物理灭菌法：利用热力等物理作用，使微生物的蛋白质及酶变性凝固，以达到消毒、灭菌目的，称为物理灭菌法。
①燃烧法：是一种简单易行、迅速彻底有效的灭菌方法，但对物品的破坏性大，多用于耐高热，或已带致病菌而又无保留价值的物品，如被某些细菌或病毒污染的纸张、敷料，搪瓷类物品如坐浴盆，也可以用火焰燃烧消毒灭菌，应先将盆洗净擦干，再倒人少许90％酒精，点燃后慢慢转动浴盆，使其内面完全被火焰烧到。应用此法时，要注意安全，须远离易燃或易爆物品，以免引起火灾。
②煮沸法：是一种经济方便的灭菌法，一般等水开后计时，煮沸10—15分钟可杀死无芽胞的细菌。可用于食具、毛巾、手绢等不怕溼而耐高温的物品的消毒灭菌。
③高压蒸汽灭菌法：利用高压锅内的高压和高热释放的潜能进行灭菌，此法杀菌力强，是最有效的物理灭菌法。待高压锅上汽后，加阀再蒸15分钟，适合消毒棉花、敷料等物品。
(3)化学消毒灭菌法：化学消毒灭菌法是利用化学药物渗透细菌体内，破坏其生理功能，抑制细菌代谢生长，从而起到消毒的作用。家庭常用化学消毒灭菌方法有以下三种。
①擦拭法：用化学药液擦拭被污染的物体表面，常用于地面、家俱、陈列物品的消毒。如用0．5％-3％漂白粉澄清液、84消毒液等含氯消毒剂(现市场都出售，要看好有效期及使用方法)，擦拭墙壁、床、桌椅地面及厕所。
②浸泡法：将被消毒物品浸泡在消毒液中，常用于不能或不便蒸煮的生活用具。浸泡时间的长短因物品及溶液的性质而有不同。如用1％-3％漂白粉澄清液浸泡餐具、便器需1小时，用0.5％“84”消毒液浸泡需15分钟，而用0.02％高效消毒片浸泡只需5分钟，就可以达到目的。若浸泡呕吐物及排泄物，不但消毒液浓度要加倍，而且浸泡时间也要加倍。
③熏蒸法：是利用消毒药品所产生的气体进行消毒。常用于传染病人居住过的房间空气及室内表面消毒。
福尔马林(甲醛)+高锰酸钾：每立方米加入福尔马林25—40毫升，高锰酸钾15—30克，两种药放置在一起即产生气体，可达到消毒目的。消毒时，必须将门窗紧闭12-24／小时，消毒后再打开门窗进行通风，此法对各种细菌、病毒引起的传染病均有效。
食醋：每立方米用3-10毫升食醋，加水2～3倍加热熏蒸，用于室内空气消毒，对于预防流感等呼吸道传染病有效。