㈠ 聚氯乙烯固体药用硬片怎么做微生物
参照药包材国家标准检测检验方法,生物相溶性检验标准即可了.
㈡ 冻干粉怎么做微生物检测
得看是水针剂使用的还是口服的,或者外用的。
如果水针剂需要进行无菌检查,把样品溶解后过滤,然后加入液体培养基,如果长菌即是不合格。
口服的溶剂后加入固体TSA和SDA分别培养。33℃细菌25℃霉菌。控制菌做大肠杆菌和沙门。
如果外用,同微生物限度测试。
㈢ 如何培养微生物
液体接种
从中海生物技术固体培养基中将菌洗下,倒入液体培养基中,或者从液体培养物中,用移液管将菌液接至液体培养基中,或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中,都可称为液体接种
穿刺接种
在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时,用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是:用接种针蘸取少量的菌种,沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺,如某细菌具有鞭毛而能运动,则在穿刺线周围能够生长
活体接种
活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法,因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物;也可以是某个离体活组织,例如猴肾等;也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射,也可以是拌料喂养
浇混接种
该法是将待接的微生物先放入中海生物的培养皿中,然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基,迅速轻轻摇匀,这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后,置合适温度下培养,就可长出单个的微生物菌落
划线接种
这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动,就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环,接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法
涂布接种
与浇混接种略有不同,就是先倒好平板,让其凝固,然后再将菌液倒入平板上面,迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布,让菌液均匀分布,就可长出单个的微生物的菌落
㈣ 固体分离法适应于任何微生物
最常用的两种方法:
1.平板划线分离法
把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落,通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种
优点:可以观察菌落特雀友征,对混合菌进行分离。
缺点:不能计数,一般用于从菌种的分离纯化。
例如:筛选大肠杆菌菌种。
2.稀释涂布平板法
将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落。
优点:槐饥可以计数,可以观察菌落特征。
缺点:吸收量较少,较麻烦,平板不干燥效果不好,容易蔓延。顷明槐一般用于平板培养基的回收率计数。
例如:测定纯净水中大肠杆菌的含量
㈤ 在做微生物检测实验的时候,固体试样该如何处理
我只做过土壤样品,一般是用取一点放在生理盐水中,vortex 5分钟,然后做梯度稀释涂布。
㈥ 进行微生物富集培养为什么要用液体培养基固体培养基不行吗
你好!
用于一般培养可以用固体培养基,但是时间比较长,我们做微生物实验用固体培养基一般都要隔几天才能有效果。
如果是富集培养,需要培养时间短,容易收集的,所以用液体培养基比较快,也容易分离。
如有疑问,请追问。
㈦ 请教:固体培养基是如何分离和计数微生物的拜托了各位 谢谢
方法步骤: ①菌悬液的制备:如果用于分离的样品是水样液体则不需此冲毕过程,即可直接作为菌悬液。固体样品如土壤、泥等,则需制备菌悬液。具体做法是:称取样品1g,放入盛有99ml无菌水的三角瓶中,震荡5分钟充分摇均,使细菌分散。这样将样品稀释成为10-2菌悬液。 ②稀释:接10倍稀释法把制备好的10-2菌悬液稀释到10-8(液体样品稀释到10-6)。 取6支装有9ml无菌水的试管,编好号从10-3~10-8(液体样品从10-1~10-6)。用无菌移液管从10-2菌悬液中吸取1ml,放入编号10-3的试管中(无菌操作),用手轻压移液管上的橡皮头吸吹三次(吸入时一次比一次液面高),目的是将移液管中的菌悬液全部洗下并混匀,制成10-3菌液。用同一支移液管吸1ml10-3的菌液,放入编号10-4试管中混匀,重复以上操作制成10-4菌液。依此类推,直到第六管即编号10-8的试管,制成不同稀释度的菌液。 ③接种:难备好经灭菌的、温度为45~50℃的牛肉膏蛋白胨培养基140ml;经灭菌的培养皿(直径9cm)九套,分别标上10-6,10-7,10-8(每个稀释度三套),即做三个重复。 用经灭菌的移液管吸取1ml菌液,倒入相应编号的培养皿中,然后即可倒入培养基15ml(温度不能太高或太低,太高易把菌烫死,太低则易凝固)。倒入后立即轻轻摇动培养皿,使培养基与菌液充分混匀,立即静止,水平放置待其冷却。凝固后即制成平板。注意在培养基冷却过程中不能摇动培养皿,否则培养基表面会凹凸不平。上述过程都进行无菌操作。 ④培养观察:将制作的平板放入30~37℃的恒温箱中培养1~2天。通过培养,即可见平板上长出各种不同的菌落。选择所需要的单个菌落,接种到斜面培养基上进一步培养后,进行镜检,如无杂菌,即成为纯种;如有杂菌,可再稀释分离,直到纯种。 稀释分离方法总结。 (2)平板画线法:分离纯化菌种最常用的方法。主要依据是,通过用接种环连续画线的移动过程中,使混杂的细菌分散开,经过培养,分散的单个细菌繁殖成单个菌落。 制作平板方法同稀释法,但是必须提前倒好,充分冷却后方可使用;并且表面必需光滑,厚薄均匀;培养基用量要比稀释法厚一些,每皿约20ml左右。接种使用接种环沾取待分离的混杂菌液(或固体培养基上的菌体少许),然后在平板表面一侧作第一次平行画线(无菌操作),画线占培养皿总面积的1/3即可。第一次画线完成后,左手把平板转动70°角。第二次画线是用接种环划过第一次画线部分,即是把第一次划在平板上的菌液作为菌源,画线方法与面积同第一次。然后再转动70°角,灼烧接种环后做第三次画线。画线时注意不要把培养基划破,最后一次平行画线不要与第一次画线相接,否则达不到分离的目的。 几种常用画线方式: 画线完毕后,将平板倒置于恒温箱中培养,待长出菌落后进行观察,方法同稀释法。 2.细菌的计数:除了对细菌进行观察外,有时还要调查各种样品中的细菌数量。如对水污染程度的调查、水质标准的调查及食品卫生的检查等。细菌的计数方法一般有显微计数法和菌落平板计数法。 (1)显微计数法:利用血球计数器在显微镜下直接计数,是常用的计数方法。血球计数器是一块特制的载玻片,载玻片上有四条槽而构裂判皮成三个平台。中间的平台较宽,而且被一短横槽隔成两半,两个半边上各刻有一个方格网。每个方格网分成9个大格,中央的大格是计数室。 计数室的刻度有两种:一种是由25大格组成,每个大格又分成16个小格,25×16=400小格;另一种是由16大格组成,每个大格又分成25个小格,16×25=400小格。两种的总体积均为0.1mm3。计数器的构造如图4-5和图4-6所示。 计数方法:25×16的计数器,显微镜下数左上、右上、左下、右下和中央共五个大格,即5×16=80小方格的细菌数。若80小肆差格的细菌数为A,则每毫升菌液的含菌量=A×400/80×10×1000=50000A;16×25的计数器,显微镜下数左上、右上、左下、右下共四个大格,即4×25=100个小格的细菌数。若100小格的总菌数为A,则每毫升菌液的含菌量=A×400/100×10×1000=40000A。 (2)平板菌落计数法:因为每个活的细菌在平板上繁殖都能形成一个菌落,即平板上的菌落数等于接入平板的活菌数。如果待测的样品细菌稀少(如自来水),则可以直接接种到培养基,制成平板。但许多样品细菌的密度都很大,为使计数准确,首先应将待测样品稀释成不同稀释度的菌液。再取一定稀释度、一定量的菌液,接种到培养皿中,制成平板。经培养后,统计菌落数目,即可计算出样品中的含菌数。具体操作同稀释分离方法。 计数时,按下列公式计算: 每毫升菌液的活菌数=同一稀释度3次重复的菌落平均数×稀释倍数×5。
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㈧ 固定固体培养基方法是什么
在野体培养基中加入一定量凝固剂,使其成为固体状态即为固体兄芦培养基。理想的凝固剂应具备以下条件:①不被所春敬培养的微生物分解利用;②在微生物生长的温度范围内保持固体状态,在培养嗜热细菌时,由于高温容易引起培养基液化,通常在培养基中适当增加凝固剂来解决这一问题;③凝固剂凝固点温度不能太低,否则扒尘慎将不利于微生物的生长;④凝固剂对所培养的微生物无毒害作用;⑤凝固剂在灭菌过程中不会被破坏;⑥透明度好,粘着力强;⑦配制方便且价格低廉。常用的凝固剂有琼脂(agar)、明胶(gdatin)和砖胶(silica gel)。
1.取一个1000ml的烧杯,放入500ml的蒸馏水,并将上述药品(除了琼脂)全部溶解在水中。
2.调节PH值。用10%的氢氧化钠溶液将PH值调到7.2左右,并定容到1000ml。
3.将这些液体分装在10个锥形瓶中,每瓶装100ml
4.其中在五个锥形瓶中放入剪碎的琼脂,每个锥形瓶2.4g,并将十个锥形瓶都加上棉塞,包上报纸。
5.将包扎好的锥形瓶放入灭菌锅中灭菌十分钟。
6.到时间后,将锥形瓶取出,待其冷却后得到的即为固体培养基。
㈨ 利用固体培养基获得纯培养的方法
利用固体培养基,让微生物在培养基的表面生长,就可以获得微生物的纯培养,但是这需要进行一个操作,就是划线空键分离。通过使用接种环划线分离,划线过程中,接种环上洞亏兆的细菌不断减少,逐渐就可以分离出单个菌落,当然这是需要一个经验和技巧的,经验越丰富的人,通过划线分离,获得单纳租个菌落的效果就越好。
㈩ 检查固体食物中的微生物含量
这个要分好几种情况的呢。因为固体食品还分溶于水、不溶于水等等呢。另外,你所说的固体还包括包装吗?
我暂且罗列一下吧。
一、固体、半固体或黏稠性供试品:取供试品10g,加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,用匀浆仪或其他适宜的方法,混匀,作为1:10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80,并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
二、非水溶性供试品
方法1 取供试品5g(5ml),加入含溶化的(温度不超过45℃)5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中,用无菌玻棒搅拌成团后,慢慢加入45℃左右的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,边加边搅拌,使供试品充分乳化,作为1:20的供试液。
方法2 取供试品10g,加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯(制法见附录XIII B无菌检查法中供试品的无菌检查项下)和无菌玻璃珠的适宜容器中 ,必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量,充分振摇,使供试品溶解。然后加入45℃的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,振摇5~10分钟,萃取,静置使油水明显分层,取其水层作为1:10的供试液。