如何提高微生物质量

‘壹’ 如何进行微生物检验分析中的质量控制

如何进行微生物检验分析中的质量控制

质量控制对检验结果的保证非常重要，而质量控制也贯穿检验工作的整个过程。中国合格评定国家认可委员会(CNAS)于2012年9月13日发布的CNAS-CL42在2014年4月21日进行了第1次修订，并于2014年11月1日实施。其中明确了微生物检验在分析过程中质量控制需要满足如下要求。下面是我为大家带来的如何进行微生物检验分析中的质量控制的知识，欢迎阅读。

一、诊断性抗血清试剂，实验当日至少应做多价血清阴性和阳性质控：

定性试验试剂每次检测时应至少包括阳性和阴性质控菌株。不含内质控的直接抗原检测试剂，实验当日应检测阳性和阴性质控。使用的染色剂(革兰染色、特殊染色和荧光染色)，至少每周(若检测频率小于每周1此，则实验当日)用已知阳性和阴性(适用时)的质控菌株检测。凝固酶、过氧化氢酶、氧化酶、β-内酰胺酶，实验当日应做阴性和阳性质控，商业头孢菌素试剂的β-内酰胺酶试验可遵循制造商的建议。

二、实验室采用的抗菌药物敏感性试验方法的质控：

应以质控标准菌株连续检测20—30天，每一组药物/细菌超出参考范围(抑菌圈直径或MIC)的频率应不超过(≤)1/20或1/30;也可采用替代质控方案，即连续5天，每天对每一组药物/细菌重复测定3次，每次单独制备接种物，15个数据超出参考范围(抑菌圈直径或MIC)的结果应不超过(≤)1个，若失控结果为2-3个，则如前述，再进行5天，每天3次重复试验，30个数据失控结果应不超过(≤)3个。此后，应每周使用标准菌株进行质控。若检测频率小于每周1次，则每个检测日应进行质控。采用自动或者半自动仪器检测MIC值时，应按照制造商的要求进行质控。

三、厌氧菌培养：

还需要使用有效的方法检测厌氧培养环境(如以亚甲兰试条、厌氧菌或其它适当方法)。分枝杆菌检测：抗酸染色应在实验当日用适当的`阴性和阳性质控验证;荧光染色应每次实验以阴性和阳性质控验证。真菌检测：直接染色(如：抗酸染色，PAS，吉姆萨染色，墨汁染色)检查患者样品时，应在实验当日做阴性和阳性质控(某些染色如吉姆萨染色，玻片本身作为阴性质控。KOH制备的玻片不需要质控)。病毒：连续细胞传代时应定期监测支原体污染(宜监测阴性未传代的质控株，而不是培养支原体);应监测用于细胞生长培养液的动物血清的细胞毒性;应具备相应的细胞株用于病毒培养。

‘贰’ 试举例说明可以采取哪些方法提高分离目标微生物效率

一般有以下五种方法：

1、倾注平板法 首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。

2、涂布平板法 首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。

3、平板划线法 最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。

4、富集培养法 富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。所创造的条件包括选择最适的碳源、能源、温度、光、pH、渗透压和氢受体等。在相同的培养基和培养条件下，经过多次重复移种，最后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。

5、厌氧法 在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水0浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。

‘叁’ 食品微生物控制方法

一般食品中的微生物污染主要由原料自带、环境污染、生产过程不卫生、从业人员不注意个人卫生、储运条件不达标等，应该针对各种情况进行控制。

1.首先要注意原材料的选择与处理，减少微生物的来源。

2.食品工厂应建在远离重工业区，周围不应有农药厂、化肥工厂、垃圾场、粪场、污水坑及大医院等。以免受到废水、废气、废渣和病原微生物及其它污染物的污染，对食品加工厂本身的污染物也必须进行无害化处理。

3.食品生产的场所，应符合卫生要求，易于清洗消毒，空间可采用空气过滤器，造成洁净的生产环境;保持生产车间四周墙壁、天花板和地面等六面清洁，生产设备应该经常清洗消毒，以减少微生物孳生的场所;严格执行各项生产卫生制度。生产中应注意简化工艺，缩短生产流程，做到生产自动化、密闭化和连续化，尽量减少食品在空间暴露的时间，做到不接触或少接触人手和其他未经消毒的物品，这是降低微生物污染食品，提高食品质量的有效措施;加强用水的管理和处理。

4.食品从业人员必须身体健康，并经常对从业人员进行有针对性的体检，以便及时排除患者及病原菌携带者对消费者健康的威胁。从业人员应勤理发、剪指甲、洗手、洗澡，保持个人卫生;工作衣帽、口罩等要经常清洗，保持清洁，特别是操作前双手的清洗和消毒更为重要。

5.应该严格按照相关标准储运食物，防止霉变。

‘肆’ 如何提高工业微生物菌种的生产性能

工业微生物都是上大罐生产，为了获得最好的效益，一般通过三步来提高生产菌株的性能：
1，出发菌株的诱变育种：上罐发酵是一个逐级放大的过程，如果在实验室能够诱变获得一株遗传稳定性好、发酵效价高的菌株，经过发酵放大，最终的效果是惊人的，目前主要都是紫外诱变、基因组重排、推理育种等方法结合。
2，发酵培养基的优化：实验室常用培养基效果虽好但是用在大规模生产上成本偏高，采用价格低廉的玉米粉、豆饼粉、棉籽粉这些碳氮源不仅能够显着降低成本，经过优化后其发酵效价也能达到要求。
3，发酵条件在线优化：大罐发酵时，培养温度，通风量，搅拌速度，罐压，接种量，这些条件的最优化结果能够显着提高菌株的产能。

‘伍’ 增加土壤微生物的土方法 增加土壤微生物的土方法是什么

1、合理使用化学肥料，合理：什么叫合理，怎样做才算合理，到底用多少化肥是最合理的，我想这个问题没人能够100%肯定。

2、施用化肥时要注意根据土壤、作物的缺肥情况来定，缺什么补什么，缺多少补多少，不能为了产量过度施肥。最好是能够做到测土施肥，这样能做到氮磷钾比较精准的投入。

3、增加有机肥料的投入。土壤的肥力好不好要看土壤中有机质的含量有多少，施入有机肥可以补充土壤有机质。有机肥料含有大量的有机质，是各种微生物生长繁育的地方。据研究深耕配合施用有机肥，土壤固氮菌比对照增加近一倍，纤维分解菌增加近2倍，其它微生物群落也有明显增加，所以施有机肥能大大促进新开垦土地的熟化进程。有机肥料有较强的阳离子代换能力，可以吸收更多的钾、铵、镁、锌等营养元素悉蠢李，防止淋湿，提高土壤保肥能力。此外，有机肥还具有很强的缓冲能力，可防止因长期施用化肥而引起土壤的酸度变化和土壤板结，可提高土壤自身的抗逆性，保证土壤良好的生态环境。

4、向土壤施入有益生睁迟物菌肥料，通过微生物的生命活动，可以增加土壤团粒结构的离子交换频率，减少土壤的相对质量，从而增加农作物与土壤有机物质的接触率，改善了土壤的结构。其次，微生物可以通过生命活动，形成代谢，从而有效的吸收土壤中原有的有害物质，并形成新的微生物系统；这样可以改善土壤环境，减少土壤病菌。

5、增加土壤调理剂施用。土壤调理剂对于土壤的主要有疏松土壤、改善土壤团粒结构，调节土壤酸碱度的特殊作用，土壤调理剂虽然对土壤有改良和调理作用，但选用的时候一定要了解是针对哪类土壤的，有些是针对碱性土壤，档哗有些是针对酸性土壤，而且用量要合理把握，使用过量会出现另外的副作用。

6、夏至虽然跟芒种相差不了多久，但气温已经明显的提高，很多地区夏至之后，气温会骤然的高升，节气一过真正就步入了炎热的夏季，也被称之为上蒸下煮。

7、这期间蒸腾作用非常的大，栽植红薯的成活率会降低好多，而且这期间种植的红薯，为了生存，更多的是要发展根系，从而会降低红薯的产出，也被俗称夏至栽薯光长根，但夏至之后也并非绝对不能种植红薯，也要根据实际情况而定的。

‘陆’ 如何提升食品微生物检测质量

目前，随着食品检验事业的飞速发展，各级食品实验室也得到了很大的改观，人员素质提高，实验室设备更新换代，提高了检验结果的准确性和精密性，满足了食品检验的需要，食品实验室成为食品检验监督不可缺少的依赖。各实验室为了提高本实验室的检验质量，竞相开展了质量控制工作，也确实收到了良好的效果，但在质量控制工作的实施过程中，并非尽如人意，还存在着许多问题。 一是仪器设备的性能与运行状态。进行期间核查，重点是对那些不太稳定、使用频率高、使用条件恶劣、容易产生漂移、因出现过载可能造成损坏的、能力验证结果有问题、对检测数据有疑问、单纯校准不能保证在有效期内正确可靠的仪器设备、计量参考物质或标准物质，核查其可信度和可靠性。方法：（1）用参考标准进行核查；（2）参加能力验证或其他实验室之间的比对；（3）使用有证标准物质；（4）相同仪器比对；（5）同一样品不同仪器检测结果的比对；（6）对保留样品的再检测；（7）协议标准和方法。

‘柒’ 怎样做好微生物检验质量控制

怎样做好微生物检验质量控制
微生物学检验室内质量控制包括：①对细菌检验人员的要求；②操作手册；③仪器设备的功能监测；④培养基的质量控制；⑤试剂、染色液及抗血清的质量控制；⑥标本检验的质量控制；⑦标准菌株的来源和保存及室内质量的全面控制七个方面。
质量控制：满足质量要求的操作技术和活动。
质量保证：为了满足实验室质量要求
，制定相应的计划，实施证明（记录）所进行的一系列的系统活动。
外部质量控制：通过互相校准和/或检验对实验室的操作和结果所进行的控制。
内部质量控制：实验室内部采取的以对比分析、跟踪以及相关方法，对实验室工作的连续性控制计划。

‘捌’ 举例说明可以采取哪些方法提高分离目标微生物效率

要想提高分离目标微生物效率，我们都会选择一种筛选的方法，这个方法我们通常形象的称为“筛子”。
方法有很多，但是一般不是单独使用的，而是会结合在一起使用。
1、最基础的方法：选择一个较优的“筛子”。这个筛子是很难界定的，不同的目的有不同的筛子。如透明圈法、生长圈法、抑制圈法、纸片培养显色法。
2、针对已知微生物的优化分离：诱变。诱变后可以通过菌落形体的变化来大致定性。
3、高通量筛选。
想要提高分离目标微生物效率，上述三个方法目前是缺一不可的。

‘玖’ 如何利用代谢调控提高微生物产物的产量

一般改变微生物代谢调节的方法有如下几种:

第一种 是采用物理化学诱变，获得营养缺陷型

第二种方法是应用抗反馈调节突变法。

第三种就是控制发酵条件，改变细胞的渗透性。

一、应用营养缺陷型菌株以解除正常的反馈调节

这是氨基酸生产菌育种的最有效的办法。营养缺陷型是指某菌种失去合成某种物质的能力，即合成途径中某一步发生突变，使合成反应不能完成，最终产物不能积累到引起反馈调节的浓度，从而有利于中间产物的积累。例如，用高丝氨酸缺陷型生产菌进行赖氨酸发酵。一般在形成赖氨酸的过程中有3种产物生成，只有赖氨酸和苏氨酸都达到一定浓度时，才能形成反馈抑制，从高丝氨酸切断这两个分支后，不能形成苏氨酸，也就不能形成反馈抑制。最后使赖氨酸的大量积累，这是打破代谢调节的第一种方法。

在直线式的合成途径中，营养缺陷型突变株只能累积中间代谢物而不能累积最终代谢物。

在分支代谢途径中，通过解除某种反馈调节，就可以使某一分支途径的末端产物得到累积。

二、应用抗反馈调节的突变株解除反馈调节

抗反馈调节突变菌株，指对反馈抑制不敏感或对阻遏有抗性的组成型菌株，或兼而有之的菌株。在这类菌株中，因其反馈抑制或阻遏已解除，或是反馈抑制和阻遏已同时解除，所以能分泌大量的末端代谢产物。

例如，当把（钝齿棒杆菌）培养在含苏氨酸和异

亮氨酸的结构类似物AHV（α-氨基-β-羟基戊酸）的培养基上时，由于AHV可干扰该菌高丝氨酸脱氢酶、苏氨酸脱氢酶以及二羧酸脱水酶，所以抑制了该菌的正常生长。如果采用诱变（如用亚硝基胍作为诱变剂）后所获得的抗AHV突变株进行发酵，就能分泌较多的苏氨酸和异亮氨酸。这是因为，该突变株的高丝氨酸脱氢酶或苏氨酸脱氢酶和二羧酸脱水酶的结构基因发生了突变，故不再受苏氨酸或异亮氨酸的反馈抑制，于是有大量的苏氨酸和异亮氨酸的累积。如进一步再选育出甲硫氨酸缺陷型菌株，则其苏氨酸产量还可进一步提高，原因是甲硫氨酸合成途径上的两个反馈阻遏也被解除了。

三、控制细胞膜的渗透性

微生物的细胞膜对于细胞内外物质的运输具有高度选择性。 细胞内的代谢产物高浓度累积着，并自然地通过反馈阻遏限制了它们的进一步合成。采取生理学或遗传学方法，改变细胞膜的透性，使细胞内的代谢产物迅速渗漏到细胞外。这种解除末端产物反馈抑制作用的菌株，可以提高发酵产物的产量。

1．通过生理学手段控制细胞膜的渗透性在谷氨酸发酵生产中，生物素的浓度对谷氨酸的累积有着明显的影响，只有把生物素的浓度控制在亚适量情况下，才能分泌出大量的谷氨酸。

生物素影响细胞膜渗透性的原因，是由于它是脂肪酸生物合成中乙酰CoA羧化酶的辅基此酶可催化乙酰CoA的羧化并生成丙二酸单酰辅酶A，进而合成细胞膜磷脂的主要成分——脂肪酸。因此，控制生物素的含量就可以改变细胞膜的成分，进而改变膜的透性和影响谷氨酸的分泌。当培养液内生物素含量很高时，只要添加适量的青霉素也有提高谷氨酸产量的效果。其原因是青霉素可抑制细菌细胞壁肽聚糖合成中转肽酶的活性，结果引起其结构中肽桥间无法进行交联，造成细胞壁的缺损。这种细胞的细胞膜在细胞膨压的作用下，利于代谢产物的外渗，并因此降低了谷氨酸的反馈抑制和提高了产量。

2．通过细胞膜缺损突变而控制其渗透性应用谷氨酸产生菌的油酸缺陷型菌株，在限量添加油酸的培养基中，也能因细胞膜发生渗漏而提高谷氨酸的产量。这是因为油酸是一种含有一个双键的不饱和脂肪酸（十八碳烯酸），它是细菌细胞膜磷脂中的重要脂肪酸。油酸缺陷型突变株因其不能合成油酸而使细胞膜缺损。另一种可以利用石油发酵产生谷氨酸的（解烃棒杆菌）的甘油缺陷型突变株，由于缺乏a-磷酸甘油脱氢酶，故无法合成甘油和磷脂。其细胞内的磷脂含量不到亲株含量的一半，但当供应适量甘油（200μg/ml）时，菌体即能合成大量谷氨酸（72g/L），且不受高浓度生物素或油酸的干扰。

‘拾’ 食品微生物检验如何进行质量控制

食品微生物检验如何进行质量控制

在食品微生物检验工作中，检验流程包括检验思路的确定、标准检验方法的使用、培养基的配制、样品前处理、检验结果的判断、原始记录、报告等许多环节，其中手工操作也较多，影响结果准确性的因素也较多，实验室必须通过行之有效的质量控制措施，持续地加以监督和控制，并结合必要的室间质量控制手段，才能确保检验结果的准确性。下面是我为大家带来的关于食品微生物检验如何进行质量控制的知识，欢迎阅读。

主要可从下几方面进行质量控制：

1检验人员方面：实验室的检验水平与检验人员素质密切相关，业务技术水平和工作责任心是检验人员素质的核心所在。这就要求检验人员必须具备扎实的理论基础知识和熟练的操作技能，要求检验人员具备高度的工作责任心和工作热情。实验室可通过培训和继续教育、实验室间的交流，必要时进行考核等手段，来不断提高检验人员的业务水平，在实验室质量体系文件中强调检验人员工作责任心的`重要性，通过制定的奖惩制度来规范检验人员的工作行为。

2仪器设备方面：实验室所有仪器均应在检定有效期内使用，必要时还要进行期间核查。在此基础上可通过一些监控手段来确保仪器设备保持最佳性能，如高压蒸汽灭菌器，可用生物指示剂嗜热脂肪杆菌ATCC7953(2)或化学指示剂如变色胶带监视灭菌效果;需要控制温度的仪器，应在工作前和工作后做好温度的记录，不符合应及时调整;生物安全柜要定期由专业人员更换滤网，对紫外线消毒设备必须三个月检查一次其消毒性能等等。

3检验耗材方面：如培养基：目前大多数实验室都是使用市售干粉培养基，这些来自着名公司的培养基，质量比较稳定，但在购买和使用前首先要对外观色泽和均一性、pH值、水分含量、批次或批号、琼脂凝胶的硬度、选择性等进行初次评估。用质控菌株进行预测，确保培养基、试剂达到预期效果。

在使用市售培养基时应注意以下几方面：

(1)选用国内外知名品牌和信誉度好的产品;

(2)要根据培养基储存条件储存，尽量少包装;

(3)要根据日常工作需要作为计划，控制在有效期内用完;

(4)购回试剂应对品名、生产日期、保质期做好记录，检查密封性、标签牢固性;(5)在配置时应仔细检查原料，如发现结块、变色严禁使用;

(6)所有培养基要有配制称量时要有记录，把剩余培养基密闭好;

(7)严禁使用过期的、污染的、失了水的培养基。

标准菌株：必须做好明确的作业指导书，实施标准菌株的规范管理，做好菌株的传代验证，这样才能确保标准菌株在实验中应起的作用等等。

4样品采集方面：因样品采集并非实验人员进行，样本采集是否合格规范要求，是实验成败的又一关键因素。因此，从事食品微生物检验的工作人员，要注意加强与采样人员的沟通，向样品采集者讲解采集样本的方法、要求，指导他们规范采集样本，如无菌要求、随机方法、种类、数量、采集部分、冷藏或保温、运送方式、安全要求等。实验室收到样本后，应仔细核对检验内容与送检单，对不符合检验要求的样本，注明原因退回。

最后，要求每个食品微生物检验工作者都应提高对微生物检验质量控制工作的认识，在日常工作中要特别重视实验室质量控制工作，以确保检验结果的准确性和权威性。要求检验人员应加强对《质量手册》和《程序文件》学习，发现问题，及时记录，作为管理体系文件的修订、补充、完善的依据。要求检验人员对实验的整个过程应在工作当时予以记录，不允许事后补记或追记。同时，管理者应防止片面重视专业理论知识和操作技能培训，轻视思想道德教育和法制观念教育，要努力打造一支思想过硬、品德高尚、专业扎实、技术精湛的食品微生物检验队伍。