① 什么是微量高通量微生物筛选法其创新点在什么地方
近年来,一种称作微量高通量微生物筛选法已在欧洲等实验室采用。其基本方法是以96孔塑料培养板作大量培养的容器,每孔可先加入2ml培养液,再用多点(12点)接种器快速接种纯菌株,每小时约可接40000个不同变异株,每天可筛选2万~3万株,经适当培养后,可快速对每孔中的代谢产物进行自动检测,工效极高。
② 如何筛选微生物药物
市面上有很多微生物制剂的菌种,多种多样,造成在选择上产生很大困惑,下边是选择菌种的方法:
1、微生物菌种选择
动物消化道微生物具有多样性和特异性,不同动物种类对菌种的要求不同,同一菌株用于不同动物,产生的效果差异也较大。使用时一定要掌握菌种的特性和功效,选择不当起不到应有效果,反而会破坏原有菌群,甚至引发疾病
2、微生物菌种应用时间
微生物制剂应用要从子畜开始使用,以保证有益菌优先定植。因为制剂进入体内后要有一段时间进行微生物菌群调整才能定植下来。
一般认为,乳酸菌类在各种动物的各阶段添加均较好,芽孢杆菌类在生长期添加较好,在幼龄期可以添加;曲霉菌类在幼龄期,水产动物全期不必添加;酵母菌类在生长期不必添加;在水产动物养殖中,以改善水质为目的时,可将微生物制剂或光合细菌直接洒于水中。
3、微生物菌种添加方式
一般粉状饲料添加微生物制剂效果较好,颗粒饲料和膨化饲料在加工过程中的高温可造成10%~30%的芽孢杆菌,90%以上的肠球菌以及99%以上的酵母失活,而乳酸杆菌几乎全部被杀灭。因此,在颗粒饲料中要使用耐热,耐挤压的芽孢杆菌制剂。乳酸菌不耐高温,应采用冻干后包被或采用喷雾干燥的方式制成的乳酸菌制剂。使用时最好采用饮水方式,以利于乳酸菌优先粘附于肠壁。
4、微生物菌种剂量与浓度
微生物制剂中必须含有相当数量的活菌才能达到效果。当进入动物肠道食糜中外源菌数大于1000万个每克时,都会对肠道内原有菌群产生较大的影响。因此,微生物制剂在产品中活菌数含量为10亿~20亿每克时效果最佳。
我国正式批准生产的微生物制剂中规定每克芽孢杆菌含量要多于5亿个。以酵母菌产品为例,目前市场上销售的产品活菌数从每克几亿到200亿不等,在选择是要认真鉴别。
5、微生物菌种抗生素的影响
细菌类的微生物制剂对抗生素敏感,不宜与抗生素同时使用,使用微生物制剂的前后二天应停止使用抗生素。最好先用抗菌药物清理肠道,为益生菌的定植和繁殖扫除障碍,然后再饲喂微生物制剂,可提高使用效果。酵母菌类属于真核生物,生物学活性与细菌完全不同,对抗生素、磺胺类药物和一些抗菌剂有天然抗性,可与抗生素同时使用。
6、微生物菌种保存条件和期限
微生物制剂均为活菌制剂,由于大多数菌种在饲料加工、运输中容易失活,应用中要注意保存期限。通常微生物制剂应密封保存于阴凉避光处,储存时间不宜过长,有效期一般为一年左右,随着保存时间的延长,活菌数量不断减少。厌氧菌类暴露在空气中容易死亡,有的产品对其进行了包被或真空包装处理,应在打开包装后规定的时间内用完。酵母类属于兼性厌氧菌,可以保存较长时间。芽孢杆菌类有效期比其他类型长,可达2年左右。
③ 微生物的传统检测方法有哪些
传统检测有三种方法
1、直接显微镜观察,正常情况,在一定的培养条件下(相同的培养基、温度以及培养时间),同种微生物表现出稳定的菌落特征。可以通过显微镜观察菌落特征对微生物种类进行判断。
2、选择培养基培养微生物或人为提供有利于目的菌株生长的条件,选择培养基,其作用是允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养一般是通过观察微生物的同化作用类型或某一特征进行间接判断,得到的微生物往往并不只有一种,但是能够大致确定这些微生物存在的共有特征从而对其分类。
3、鉴别培养基,根据微生物的代谢特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品。与选择培养相比,鉴别培养基的鉴别所得结果的范围比较小,一般可直接测定某微生物的种类。
④ 微生物问题:营养缺陷性的筛选方法有什么举例说明。。
营养缺陷型微生 物是 指经过诱变处理,使某一菌株丧失合成某些 必需 的营养物质(氨基酸、维生素和碱基等)的能力,从而必须在培养 基中加人相应 的营养成 分才能 正常生 长 的变异菌株。
分离:
1、青霉素浓缩法。
青霉素 能抑 制细菌 细胞壁 的合 成,因此,用青霉素只能杀死生 长繁殖 中的细 菌,而 不能杀死停 止分裂 的细菌。在 只能使野生 型生长而不 能使 突变型 生长 的选 择性液体 培养 基中加人青霉 素,野生型被 青霉 素杀死,突变 型 则不被 杀死 而得 以 浓缩。
2、菌丝过滤法。
先用 诱变 剂处理 真菌 (如脉 胞菌 ) 的分生抱子,然 后接 种到液体培养基 中,不 断给营养液通 气
,刺激分生抱子生长,并 防止它们相互结合在一起。大约 经过l d 的培养,分生抱子萌发,长 出菌丝。然 后用棉 花把 萌发 了的分生抱子过 滤掉,未萌发的分 生抱 子 (死亡 的、需要 较 长 时间萌 发 的和突变为营养缺 陷型 的分 生抱 子 ) 则仍 留在 培养 液 中,以后 每隔一段时间进行过滤
,连续若 干次后,所剩下 的就都是 缺陷 型的或死亡 的分生抱子。通过补充各种成分 鉴定缺陷型
检出:
影印接种法。采用一种 特制的工具—“印章” ,将 在完全培养基上长 出的菌 落的平 皿上“印”一 下,然 后分 别在 完全培养基和基本培 养基 的相 应位 置上 各 印一下,若 在 完全 培养基上生长,而在基本培养基上 不生 长,即认为是营养缺 陷型
⑤ 微生物学的检查方法是有哪些
微生物学检查法
标本
因鼠疫传染性极强,采集标本时必须严格无菌操作。根据病型采取淋巴结穿刺液、肿胀部位组织液、脓汁,血液和痰等。人和动物尸体可取肝、脾、肺、病变淋巴结以及心血等。陈旧尸体取骨髓。将采集标本送至有严密防护措施的专门实验室进行检查,禁止在一般实验室进行操作。
直接涂片镜检
除血液标本外,一般均需涂片或印片,干燥后用甲醇固定,革兰染色或吕氏美兰染色,镜检。在不同材料中,菌体大小、形态有很大差异,除典型形态外,往往可见菌体呈多形态性,需加以注意。
分离培养与鉴定
血液标本需先置肉汤中进行增菌培养。分离培养一般选用血琼脂平板,28摄氏度24小时后,可见较小的露滴状菌落,继续培养则菌落增大至1~2毫米,中央厚而致密,周边逐渐变薄。取可疑菌落进行涂片染色镜检,噬菌体裂解试验,血清凝集试验,特异荧光抗体染色等作出鉴订。
血清学试验
可用于检查鼠疫耶尔森菌抗原或特异性抗体。敏感而特异的试验方法有ELISA、固相放射免疫分析,SPA协同凝集试验等。
检测核酸
用DNA探针杂交方法或PCR技术检测鼠疫耶尔森菌核酸,有助于鼠疫的诊断。PCR敏感性极高,蚤体内有10个鼠疫耶尔森菌感染即可用PCR技术检出。
诊断检查
诊断:取决于病人有接触史及肺部受累表现,病因诊断取决于痰、血或淋巴结吸出物革兰染色、培养,有条件的单位可作直接荧光素标记抗体染色,可提供快速的病因诊断。
⑥ 对于不同种类的微生物,其筛选方法上有何异同
假单孢用PCIT,真菌用pda,蔡氏,木霉用TSM,放线菌用高氏,ATCC172,SCA,选择性培养基对应都需要加入不同的抗生素,比较复杂。如果有需要请说得具体些,需要筛选那种微生物。
⑦ 微生物的快速检测方法有哪些
目前主要普通培养(简称标)般报告要用仪器、核酸检测(PCR)、目前快速检测(主要包括:免疫磁珠、酶联免疫试剂盒、金标检测卡等根据自需求选择
⑧ 微生物筛选原理
用选择培养基,调节培养基的某些条件,使你想要的微生物能正常存活,而不想要的微生物不能存活。或者是特定的菌落染色,进而分离。
例:在进行纤维素分解菌的筛选时,可以在培养基里加入刚果红(一种染料,可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二塘和葡萄糖发生这种反应。)当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时,刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物,而无法和被分解菌分解的纤维素形成刚果红——纤维素复合物,培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,这样我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌了。
⑨ 海洋微生物的筛选方法有哪些
海洋微生物的筛选方法有哪些
海洋中有自养和异养、光能和化能、好氧和厌氧、寄生和腐生以及浮游和附着等类型的细菌.几乎所有已知生理类群的细菌,都可在海洋环境中找到.最常见的有:假单胞菌属 (Pseudomonas)、 弧菌属(Vibrio)、无色杆菌属 (Achromobacter)、黄杆菌属(Flavobacterium)、螺菌属 (Spirillum)、微球菌属(Micrococcus)、八叠球菌属(Sarcina)、芽孢杆菌属(Bacillus)、棒杆菌属 (Corynebacterium)、枝动菌属(Mycoplana)、诺卡氏菌属 (Nocardia)和链霉菌属(Streptomyces)等十多个属.在海水中,革兰氏阴性杆菌占优势;在远洋沉积物中,则革兰氏阳性细菌居多;在大陆架沉积物中,芽孢杆菌属最为常见.
⑩ 微生物菌种的筛选
1.(1)从亚硝酸盐含量较高的环境中采集土样;(2)配置培养基,制备平板,一种仅以亚硝酸盐作为唯一氮源(A),另一种不含任何氮源作为对照(B);(3)将样品适当稀释(十倍稀释法),涂布A平板;(4)将平板至于适当温度条件下培养,观察是否有菌落产生;(5)将A平板上的菌落编号并分别转接至B平板,至于相同温度条件下培养;(6)挑去在A平板上生长而不在B平板上生长的菌落,在一个新的A平板上划线、培养,获得单菌落,初步确定为可利用亚硝酸盐作为唯一氮源的微生物除培养
2.A将他们混合培养,在培养基上长出的菌落为重组菌株。B如果在混合培养期间加入DNAase,在培养基上无重组菌落出现这说明上述重组是因细胞间的接触转化所致;如果仍有重组菌落长生,说明可能是由于接合和转导所致。C利用只能持留细菌的滤板相隔的U型管进行试验,如果在基本培养基上不产生重组菌落,则判断为接合作用,如果产生重组菌落,则又有两种可能,即转化或转导。D利用能持留细菌和细菌病毒而不能持留DNA的滤板相隔的U型管进行试验,如果不产生重组菌落则为转导,如果仍产生重组菌落则为转化