1. 如何安全使用生物安全柜
在实验室中使用生物安全柜
1. 位置 空气通过前面开口进入生物安全柜的速度大约为0.45m/s。这样速度的定向气 流是极易受到干扰的，包括人员走近生物安全柜所形成的气流，打开窗户，送 风系统调整以及开关门等都可能造成影响。
因此，最为理想的是，生物安全柜应位于人员活动，物品流动以及可能会扰乱 气流的地方。在安全柜的后方以及每一个侧面要尽可能留有30cm的空间，以利 用对安全柜的维护。在安全柜的上面应留有30-35cm的空间，以便准确测量空 气通过排风过滤器的速度，并便于排风过滤器的更换。
2. 操作人员 生物安全柜如果使用不当，其防护作用就可能大大地受到影响。操作人员在移 动双臂进出安全柜时，需要小心维持前面开口处气流的完整性，双臂应该垂直 地缓慢进出前面的开口。
手和双臂伸入到生物安全柜中等待大约一分钟，以便安全柜调整完毕并且让里 面的空气“扫过”手和双臂的表面以后，才可以开始对物品进行处理。要在开 始实验之前将所有必须的物品置于安全柜内，以尽可能减少双臂进出前面开口 的次数。
BSC
BSC Biological Safety Cabinet
Return Air Grille
Personnel Traffic
Barrier Airflow
BSC BSC
Air Inlet
BSC
BSC
Fig 8. 典型II级生物安全柜的安装
A typical Class II Cabinet Installation
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生物安全和生物安全柜指南
3.物品放置 二级生物安全柜前面的进气格栅不能被纸，仪器设备或其他物品阻挡。放入安 全柜内的物品应采用70%酒精来消除表面污染。可以在消毒剂浸湿的毛巾上进 行实验，以吸收可能溅出的液滴。
所有物品应尽可能地放在工作台后部靠近工作台边缘的位置，并使其在操作中 不会阻挡候补格栅。可产生气溶胶的设备(例如混匀器，离心机等)应靠近安全 柜的后部放置。像有生物危害性的废弃物袋，盛放废弃吸管的盘子以及吸滤瓶 等体积较大的物品，应该放在安全柜内的某一侧。在工作台面上的实验操作应 该按照从清洁区到污染区的方向进行。
耐高压灭菌的生物危害性废弃物袋以及吸管盛放盘不应放在安全柜的外面，否 则在使用这些物品时双臂就必须频繁进出安全柜，这样会干扰安全柜空气屏障 的完整性，从而影响对人员和物品的防护。
4.操作和维护 大多数生物安全柜的设计允许全天24小时工作。研究人员还发现，连续工作有 助于控制实验室中灰尘和颗粒的水平。向房间中排风或通过套管接口与专门的 排风管相连接的一级A1和A2型生物安全柜，在不使用时是可以关闭的。其他如 二级B1和二级B2型生物安全柜，是通过硬管安装的，就必须始终保持空气流动 以维持房间空气的平衡。
在开始工作以前以及完成工作以后，应至少让安全柜工作5分钟来完成“净 化”的过程，应即应留在将污染的空气派出安全柜的时间。
生物安全柜的所有维修工作应该由有资质的专业人员来进行。在生物安全柜操 作中出现的任何故障都应该报告，并应在再次使用之前进行维修。
5.紫外灯 生物安全柜中不需要紫外灯。如果使用紫外灯的话，应该每周进行清洁，以除 去可能影响其杀菌效果的灰尘和污垢。在安全柜重新认证时，要检查紫外线的 强度，以确保有适当的光发射量。房间中有人时一定要关闭紫外灯，以保护眼 睛和皮肤，避免因不慎暴露而造成伤害。
6.明火 在生物安全柜内所形成的几乎没有微生物的环境中，应避免使用明火。使用明 火会对气流产生影响，并且在处理挥发性物品和易燃物品时，也易造成危险。 在对接种环进行灭菌时，可以使用微型燃烧器或电炉，而不应使用明火。
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7. 溢出 实验室中要张贴如何处理溢出物的实验室操作规则，每一位使用实验室的成员 都要阅读并理解这些规程。一旦在生物安全柜中发生由生物学危害的物品溢 出时，应在安全柜出于工作状态下立即进行清理。要使用有效的消毒剂，并在 处理过程中尽可能减少气溶胶的生成。所有接触溢出物品的材料都要进行消 毒/或高压灭菌。
8. 认证 在安装是一季每隔一定时间以后，应由有资质的专业人员按照生产商的说明对 每一台生物安全柜的运行性能以及完整性进行认证，以检查其是否符合国家及 国际的性能标准。安全柜防护效果的评估应该包括对安全柜的完整性，HEPA过 滤器的泄漏，向下气流的速度，正面气流的速度，负压/换气次数，气流的烟 雾模式以及警报和互锁系统进行测试。
还可以选择进行漏电，光照度，紫外线强度，噪声水平以及震动性的测试。在 进行这些测试时，检测人员要经过专门的培训，采用专门的技术和仪器设备。 强烈建议由有资质的专业人员来进行测试。
9. 清洁和消毒 由于剩余的培养基可能会使微生物生长繁殖，因此在实验结束时，包括仪器设 备在内的生物安全柜里的所有物品都应清楚表面污染，并移出安全柜。
在每次使用前后，要清除生物安全柜内表面的污染。工作台面和内壁要用消毒 剂进行擦拭，所用的消毒剂要能够杀死安全柜里可能发现的任何微生物。在每 天试验结束时，应擦拭生物安全柜的工作台面，四周以及玻璃的内外侧等部位 来清除表面的污染。在对目标生物体有效时，可以采用漂白剂溶液或70%酒精 来消毒。在使用如漂白剂等腐蚀性消毒剂后，还必须用无菌水再次进行擦拭。
推荐将安全柜一直维持运行状态。如果要关闭的话，则应在关机前运行5分钟 以净化内部的气体。
10. 清除污染 生物安全柜在移动以及更换过滤器之前，必须清除污染。最常用的方法是采用 甲醛蒸汽熏蒸。应该由有资质的专业人员来清除生物安全柜的污染。
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11.个体防护装备 在使用生物安全柜时应穿着个体防护服。在进行一级和二级生物安全水平的操 作时，可穿着普通试验服。前面加固处理的反背式试验隔离衣具有更好的防护 效果，应在进行三级和四级生物安全水平（防护服型实验室除外）的操作时使 用。手套应套在隔离衣的外面，可以戴加有松紧带的套袖来保护研究人员的手 腕。有些操作可能还需要戴口罩和安全眼镜。
12.警报器 可以在两种警报器中选择一种来装备生物安全柜。窗式警报器只能装在带有滑 动窗的安全柜上。发出警报时表明操作者将滑动窗移到了不当的位置。处理这 种警报时，只要将滑动窗移到适宜的位置就可以了。气流警报器报警时，表明 安全柜的正常气流模式受到了干扰，操作者或物品当即处于危险状态。当气流 警报响起时，应立刻停止工作，并通知实验室主管。生产商的说明手册中将提 供更详细的资料，在生物安全柜的使用培训中也应包括这一方面的内容。
13.补充资料 选择正确类型的生物安全柜，进行安装并正确使用，同时每年进行认证，这是 一个复杂的程序。强烈推荐在经过良好培训并具有丰富生物安全操作经验的专 家监督下来进行上述工作。该专家应非常熟悉“参考文献”部分中所列出的相 关文献，并且经过了有关生物安全柜各方面的培训。操作者应接受生物安全柜 操作和使用的正规培训。
2. 如何正确的使用生物安全柜
1、操作前应将本次操作所需的全部物品移入安全柜，避免双臂频繁穿过气幕破坏气流；并且在移入前用70%酒精擦拭表面消毒，以去除污染。
2、打开风机5～10分钟，待柜内空气净化并气流稳定后再进行实验操作。将双臂缓缓伸入安全柜内，至少静止1分钟，使柜内气流稳定后再进行操作。
3、生物安全柜内不放与本次实验无关的物品。柜内物品摆放应做到清洁区、半污染区与污染区基本分开，操作过程中物品取用方便，且三区之间无交叉。物品应尽量靠后放置，但不得挡住气道口，以免干扰气流正常流动。
4、操作时应按照从清洁区到污染区进行，以避免交叉污染。为防可能溅出的液滴，可在台面上铺一用消毒剂浸泡过的毛巾或纱布，但不能覆盖住安全柜格栅。
5、柜内操作期间，严禁使用酒精灯等明火，以避免产生的热量产生气流，干扰柜内气流稳定；且明火可能损坏HEPA滤器。
6、工作时尽量减少背后人员走动以及快速开关房门，以防止安全柜内气流不稳定。
7、在实验操作时，不可打开玻璃视窗，应保证操作者脸部在工作窗口之上。在柜内操作时动作应轻柔、舒缓，防止影响柜内气流。
8、安全柜应定期进行检测与保养，以保证其正常工作。工作中一旦发现安全柜工作异常，应立即停止工作，采取相应处理措施，并通知相关人员。
9、工作完全后，关闭玻璃窗，保持风机继续运转10～15分钟，同时打开紫外灯，照射30分钟。
10、安全柜应定期进行清洁消毒，柜内台面污染物可在工作完成且紫外灯消毒后用2%的84消毒液擦拭。柜体外表面则应每天用1%的84消毒液擦拭。
11、柜内使用的物品应在消毒后再取出，以防止将病原微生物带出而污染环境。