① 微生物限度检查对实验室有什么级别要求吗
微生物限度检查实验室用途用于检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染的程度。
② 检验科的微生物检查
1. 普通细菌培养+药敏
2. 真菌培养+药敏
3. 厌氧菌培养+药敏
4. 结核杆菌培养
5. L型细菌培养+药敏
6. 淋球菌培养+药敏
7. 支原体培养+药敏
8. O2培养(霍乱弧菌培养)
9. 衣原体抗原检查
10. 轮状病毒抗原检查
11. 钩端螺旋体抗体检查
12. 肺炎支原体抗体测定
13. 幽门螺杆菌检查:C14-呼气试验
③ 微生物的限度检查项目有哪些
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。
微生物检测项目有:菌落总数、大肠菌群、沙门氏菌、志贺氏菌 、金黄色葡萄菌、溶血性链球菌、霉菌和酵母等
④ 微生物限度
1、一般情况下,固体溶于液体的时候是不占多少体积的,所以在一般实验的时候是不考虑这方面问题,也就是按你说的稀释10倍就取1g溶解稀释,如果是片剂的话,就先看说明,对要药物量上会有注释,每片或每100g药物某种成分的含量值,根据所需要的成分来计算片剂重量。例如:某维生素c每片(0.2g)含vc1000mg,想稀释vc为10mg/ml共10ml,就取0.02g片剂溶于10ml稀释液中就得到了(不懂的话在联系)
2、关于微生物限度计算操作参考下
http://wenku..com/view/627047ea19e8b8f67c1cb9fd.html
原则是在做菌落计数的时候,必须平行做两块平板,并且要做到足够的稀释倍数。
问题一:每毫升约有10000;问题二:每毫升约1500以上;问题三:每毫升约5000
至于如何计算,多了解下操作步骤就能一步步了解
⑤ 微生物限度检查主要有哪些
不知道你要查的是什么产品?要检查的微生物种类和限度也不同。
通常查以下几项:
细菌总数;大肠菌群;致病菌(一般包括沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌等);
依食品类别不同,规定要检验的致病菌的具体种类有不同。有些还规定要检查酵母菌和霉菌。
⑥ 在微生物限度检查中有哪些原因会引起偏差的
1.1 无菌观念淡薄
一些操作者认为,微生物限度范围定得宽,多几个、少几个菌对结果影响不大,因此操作马虎、随意,这样容易造成供试品的再次污染以及已污染菌的繁殖及死亡,从而不能真实的反映供试品的染菌情况。因此每一个检验者应明确的了解,在检验过程中的每一个环节,每个空间,每个操作,每个工具及材料,没灭菌者都是带菌者,都会对检验结果产生不确定影响,因而应牢固的建立无菌观念。
1.2 操作技能中误差 一些操作者在操作不熟练,及实验条件控制不严格,细节不够注意,每次操作前的消毒处理必须彻底,不得留有死角,对实验所用器具根据材料的性质进行相应的灭菌;开启供试品包装的工具,如剪刀、砂轮等也应消毒,实验用的器具如吸管应清洗干净,灭菌,放液时不得接触液面,每ml样品必须放尽,否则影响细菌记数的准确性;
2 操作环境不符合要求带来的误差
按无菌要求,无菌室应由无菌操作间和两个缓冲间组成,操作间与缓冲间之间应有样品传递箱,操作间和缓冲间的门不应直对;操作间内不应安装下水道,无菌室的照明灯应嵌装在天花板内,室内六壁应光滑平整,能耐受清洗消毒;无菌室的温湿度和洁净级别应准确无误,并有相应的检测设备,由于条件限制,一些单位的无菌室在设计上不符合要求,缺少传递箱或缓冲设备不健全,在操作中传递物品不方便,人员的频繁走动增加了染菌机会。
无菌操作台或净化工作台要定期检测其洁净度,确保达到100级。洁净级别及检查方法通常采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法,净化工作台中的高效及中效过滤器应根据检测情况,必要时及时换处理。这项工作在各单位检验工作中应得到足够重视,确保操作台达到规定的技术指标。
⑦ 请教:关于USP微生物限度检查的问题
其实,注意一下在USP31中有2个61和一个62,其中一个61较为全面,包括了控制菌内容。这样的话,我认为全面的61其实就是31版,而另外一个61和62为修订版,也就是32版,因为在32版中我们知道药典将31版的61拆分为61和62两章,所以可以按照新版执行
应该没问题
,也就是按照62来检验
⑧ 微生物限度检查法的检验量
检验量即一次试验所用的供试品量(g、ml 或c㎡)。
除另有规定外,一般供试品的检验量为10g 或10ml;膜剂为100c㎡;贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品,其检验量应增加20g 或20ml(其中10g或者10ml 用于阳性对照试验)。
检验时,应从2 个以上最小包装单位中抽取供试品,大蜜丸还不得少于4丸,膜剂还不得少于4 片。
一般应随机抽取不少于检验用量(两个以上最小包装单位)的3 倍量供试品。 供试液的制备根据供试品的理化特性与生物学特性,采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时,应均匀加热,且温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基,不得超过1 小时。
除另有规定外,常用的供试液制备方法如下。 取供试品10g,加pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,用匀浆仪或其他适宜的方法,混匀,作为1∶10 的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80,并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
3.需用特殊供试液制备方法的供试品
(1)非水溶性供试品
方法1 取供试品5g(或5ml),加至含溶化的(温度不超过45℃)5g 司盘80、3g 单硬脂酸甘油酯、10g 聚山梨酯80 无菌混合物的烧杯中,用无菌玻棒搅拌成团后,慢慢加入45℃的pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,边加边搅拌,使供试品充分乳化,作为1∶20 的供试液。
方法2 取供试品10g,加至含20ml 无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的适宜容器中,必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量,充分振摇,使供试品溶解。然后加入45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,振摇5~10 分钟,萃取,静置使油水明显分层,取其水层作为1∶10 的供试液。
(2)膜剂供试品
取供试品100c㎡,剪碎,加100ml 的pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(必要时可增加稀释液),浸泡,振摇,作为1∶10 的供试液。
(3)肠溶及结肠溶制剂供试品
取供试品10g,加pH6.8 无菌磷酸盐缓冲液(用于肠溶制剂)或pH7.6 无菌磷酸盐缓冲液(用于结肠溶制剂)至100ml,置45℃水浴中,振摇,使溶解,作为1∶10 的供试液。
(4)气雾剂、喷雾剂供试品
取规定量供试品,置冰冻室冷冻约1 小时,取出,迅速消毒供试品开启部位,用无菌钢锥在该部位钻一小孔,放至室温,并轻轻转动容器,使抛射剂缓缓全部释出。用无菌注射器吸出全部药液,加至适量的pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(若含非水溶性成分,加适量的无菌聚山梨酯80)中,混匀,取相当于10g或10ml 的供试品,再稀释成1∶10 的供试液。
(5)贴膏剂供试品
取规定量供试品,去掉贴膏剂的保护层,放置在无菌玻璃或塑料片上,粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料(如无菌纱布)覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起。然后将其置于适宜体积并含有表面活性剂(如聚山梨酯80 或卵磷脂)的稀释剂中,用力振荡至少30 分钟,制成供试液。贴膏剂也可以其他适宜的方法制备成供试液。
(6)具抑菌活性的供试品
当供试品有抑菌活性时,采用下列方法进行处理,以消除供试液的抑菌活性后,再依法检查。常用的方法如下。
①培养基稀释法 取规定量的供试液,至较大量的培养基中,使单位体积内的供试品含量减少,至不含抑菌作用。测定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时,取同稀释级的供试液2ml,每1ml 供试液可等量分注多个平皿,倾注琼脂培养基,混匀,凝固,培养,计数。每1ml 供试液所注的平皿中生长的菌数之和即为1ml的菌落数,计算每1ml 供试液的平均菌落数,按平皿法计数规则报告菌数;控制菌检查时,可加大增菌培养基的用量。
② 离心沉淀法 取一定量的供试液, 500 转/分离心3 分钟,取全部上清液混合,用于细菌检查。
③薄膜过滤法 见细菌、霉菌及酵母菌计数项下的“薄膜过滤法”。
④中和法 凡含汞、砷或防腐剂等具有抑菌作用的供试品,可用适宜的中和剂或灭活剂消除其抑菌成分。中和剂或灭活剂可加在所用的稀释液或培养基中。
⑨ 微生物达到多少 才开始会有显着作用
在特定的条件下,微生物细胞才会产生大量的活性酶,即微生物酶.在生成过程中,控制环境条件是很重要的,以使决大部分活性酶能完整保存下来.当微生物细胞生成活性酶后,它们会钝化,并和酶一起保留下来,以不同的方式,分几个阶段使酶净化.目前,还没有科学的名称来对用于制造酶的微生物体命名.但那些含酶物质中酶活性是能够保证的.为了最佳利用酶的催化功能,我们必须熟悉一些影响酶活性和稳定性的基本原则.因为酶是一种生物化合物,且由大量蛋白质组成,所以要受到外界环境的影响.以下原则对用于化学方面的大多数生物酶来说,都是适合的.环境的 PH 值对酶的活性和稳定性有显着的影响.最佳活性会因不同酶的 PH 值的变化而变化.在 PH 值变化时,不同酶的活性有差异.另一个主要因素是温度.因为酶是生物催化剂,至少部分地由蛋白质组成的,所以它们对温度的变化十分敏感.环境温度升高会使酶的活性成倍增强.当达到最佳温度时,温度在高就会引起酶的迅速退化,活性也就会降低.然而,不同种类的酶对温度的抵抗力和敏感程度有很大的差异.例如:从枯草菌素中提取的细菌酶对热的敏感度就比从米谷蛋白中提取的真菌酶低.一些由某类细菌发酵而来的淀粉酶甚至能在沸水中短暂保持稳定性,并在 70-80 摄氏度之间达到最佳活性.我们的实验室已经发现大约 85% 从地衣类物质和淀粉酶中提取的酶能在高温中保持活性,但米谷蛋白酶在此高温中就要失去大于 90% 的活性.当经发酵的、含酶的微生物体保持干燥时,这种物质就比湿的更能抵御外界环境温度的变化.事实上,大多数酶在标准状况下不大会出现稳定性问题.采用生物酶技术处理有机废物时,如何利用酶特性是十分重要的,包括它们怎样起作用,在什么条件下起作用,以及如何保持它们的活性等等.
⑩ 实验室微生物检验需要注意哪些问题
微生物检验无菌操作的注意事项有很多细节,日常的微生物检验过程中要注意无菌操作,除了要在洁净台和操作器皿上的消毒,还需要注意人员卫生和环境的卫生。
【操作技巧】
进行培养时,动作要准确敏捷,但又不必太快,以防空气流动,增加污染机会。不能用手触及已消毒器皿,如已接触,要用火焰烧灼消毒或取备品更换。为拿取方便,工作台面上的用品要有合理的布局,原则上应是右手使用的东西放置在右侧,左手用品在左侧,酒精灯置于中央。工作由始至终要保持一定顺序性,组织或细胞在未做处理之前,勿过早暴露在空气中。同样,培养液在未用前,不要过早开瓶;用过之后如不再重复使用,应立即封闭瓶口直立可增加落菌机会。吸取营养液、PBS、细胞悬液及其它各种用液时,均应分别使用吸管,不能混用,以防扩大污染或导致细胞交叉污染。工作中不能面向操作野讲话或咳嗽,以免唾沫把细菌或支原体带入工作台面发生污染。操作前用酒精擦拭超净台面及双手。手或相对较脏的物品不能经过开放的瓶口上方,瓶口最易污染,加液时如吸管尖碰到瓶口,则应将吸管丢掉。
【培养前准备】
在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实验要求,准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内,然后开始消毒。这可以避免开始实验后.囚物品不全往返拿取而增加污染机会。
【火焰消毒】
在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时,首先要点燃酒精灯或煤气灯。以后一切操作,如按装吸管帽、打开或封闭瓶口等,都需在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意:金属器械不能在为焰中烧的时间过长,以防退火,烧过的金属镊要待冷却后才能挟取组织,以免造成组织损伤。吸取过营养液后的吸管不能再用火焰烧灼,因残留在吸管头中营养液能烧焦形成炭膜,再用时会把有害物带入营养液中。开启、关闭长有细胞的培养瓶时,火焰灭菌时间要短。防止因温度过高烧死细胞。另外胶塞过火焰时也不能时间长,以免烧焦产生有毒气体,危害培养细胞。
【洗手和着装】
原则上和外科手术相同。平时仅做观察不做培养操作时,可穿装细胞培养室内紫外线照射30min的清洁工作服。在利用超净台工作时,因整个前臂要伸入箱内,应着长袖的清洁工作服,并于开始操作前要用75%酒精消毒手。如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手。进入原代培养室需彻底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。
【操作台消毒】
体外培养细胞缺乏抗感染能力,所以防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。即便使用设备完善的实验室。若实验者粗心大意,技术操作不规范,也会导致污染。因而.为在一切操作中为最大可能的保证无菌.每一项工作都必须做到有条不紊和完全靠。无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次(拖布要专用).紫外线照射消毒30-50min,超净工作台台面每次实验前要用75%酒精擦洗。然后紫外线淌毒30min。在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线,消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置.否则会遮挡射线降低消毒效果。—些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。
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