❶ 微生物学的研究方法和技术有哪些
微生物学的研究方法和技术有:
显微技术,纯种培养技术,无菌技术,纯种分离纯化技术和微生物保藏技术。
显微技术(micros):显微技术是利用光学系统或电子光学系统设备,观察肉眼所不能分辨的微小物体形态结构及其特性的技术。包括:①各种显微镜的基本原理、操作和应用的技术;②显微镜样品的制备技术;③观察结果的记录、分析和处理的技术。
纯培养:纯培养最重要的是在于微生物的生理研究,方法是依靠灭菌和分离,是由巴斯德(L.Pasteur)和柯赫(R.Koch)建立起来的。在自然界中,有的培养条件很困难,特别是具有密切共生关系的生物及进行寄生性营养的生物;也有一些在理论上不可能进行纯粹培养的生物。纯培养(pure culture)——微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代,称纯培养。
无菌技术:无菌技术是在医疗护理操作过程中,保持无菌物品、无菌区域不被污染、防止病原微生物 侵入人体的一系列操作技术。无菌技术(aseptic technique) 是指在执行医疗、护理技术过程中,防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。
纯化:纯化是将多糖混合物分离为单一多糖的过程。在进行菌种鉴定时,所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化。
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❷ 微生物细胞生长的测定方法
微生物生长的测定方法有多种,根据研究对象或目的选择。(一)微生物细胞数目的检测方法1.总细胞计数法 显微镜直接记数法和比浊法(1)血球计数板法 血球汁数板中央有一个体积一定的计数室( 0.1mm3)。将菌悬液或孢子悬液在显微镜下计数,然后再按一定公式计算出细菌总数。 (2)涂片计数法 将一定体积(0.1ml)的样品,均匀地涂在载片的一定面积内(1cm2)。在显微镜下计算细胞数量,推算1cm2所含细胞数目。(3)比浊法:菌体细胞培养液混浊,在一定范围内,菌体数量与浑浊成正比,故可通过分光光度计或比色计求出浑浊度,通过与标准曲线对比,求出样品中菌液浓度,算出个体数。特点:所得结果包括死菌和活菌。2. 活菌计数法(平板菌落记数法):是通过测定样品在培养基上形成的菌落数来间接确定其活菌数的方法.故又称平板计数法。特点:计算的结果是活菌落。注意:样品稀释度。一个活细胞形成一个菌落。(1)涂布平板法 用灭菌的涂布器将一定体积(不大于0.1ml)的适当稀释度的菌液涂布在琼脂培养基的表面,然后保温培养有到菌落出现,记录菌落的数目并换算成每毫升试样中的活细胞数量。(2)倒平板法 将样品稀释到一定浓度,取一定体积(0.1—1ml)倒入冷却至45℃的固体培养基混合,制成平板,培养后,出现菌落,由菌落数推算出的菌总数。3 滤膜过滤法:样品同过微孔滤膜后,细菌收集在滤膜上,然后将滤膜放在培养基中培养,通过菌落计数求出样品活菌落。 (二)微生物生长量和生理指标的测定方法测定微生物生长量及相关的生理指标,常用以下方法:1.湿重法:将单位体积微生物培养液离心,收集沉淀物,然后再称重。2.干重法:将离心得到的细胞沉淀物,置于100---105℃的烘箱中干燥过夜除去水分,然后再称重。特点:适合与菌体浓度高的样品。表示菌体生长量。3、测定细胞内菌种化学成分:方法难,操做困难,但较准确。细胞内菌种化学成分多少(∝),反映群体中菌体数量的多少。(1) 测定含氮量:N在细胞内稳定,测定总N量,粗蛋白=N*6.25g。(2) 测定DNA:微生物细胞DNA含量稳定,采用荧光指示剂或染色剂与菌体DNA作用荧光比色或分光光度法测得DNA的含量。(3) 其他生理指标:如测定碳、磷、RNA、ATP、DAP(二氨基庚二酸)的含量等。 (二)丝状微生物菌丝长度的测定方法 对于丝状微生物。特别是丝状真菌,通常是通过测定菌丝的长度变化来反映它们的生长速率。方法有: 1.培养基表面菌体生长速率测定法 主要测定一定时间内在琼脂培养基表面的菌落直径的增加值。 2.培养料中菌体速率测定法主要测定一定时间内在固体培养料中菌丝体向前延伸的距离。如:栽培食用菌的培养料。 3.单个菌丝顶端生长速率测定法 在显微镜下借助目镜测微尺测定在一定时间内单个菌丝的伸长长度。
❸ 微生物培养的方法有哪些
微生物培养法是在人为条件下繁殖微生物的方法。根据微生物的种类以及对养料、温度、氧气、水分、酸碱度等环境条件的要求不同,并联系生产和实验上的具体要求,可有不同的培养方法。可分好气培养法和厌气培养法两类。中海生物技术的培养基一是好气微生物培养法,常用:
①摇床培养法,即将微生物接种于盛有液体培养基的三角瓶后,放在恒温培养室中的摇床上作有节奏的振荡,使空气不断进入培养液中,促其良好生长;
②浅盘培养法,又称表面培养法,在盘内放一浅层培养基,使微生物能够充分接触空气,而有利于生长繁殖,但此法所需空间大,并且容易污染杂菌;
③深层培养法,适用于好气微生物的大规模发酵培养,在大容积的液体培养基中,通入无菌空气,并不断搅拌,可使微生物充分接触空气,迅速繁殖并积累代谢产物。二是厌气微生物培养法,实验室常用化学还原剂或抽气机吸除培养基中的分子氧,也有用静止状态的深层培养法。在生产中常用密封式发酵罐或不通风的固体发酵法。
❹ 微生物研究方法
主要为如下:
一、显微技术研究
二、无菌操作技术研究
三、纯种培养技术
更为详细的讲解过程请参考:http://wenku..com/view/59e9691ca76e58fafab00311.html
❺ 研究微生物生长的两个先决条件是
研究微生物生长的两个先决条件是纯培养和同步生长。
微生物指的是低等植物的一大类,其不开花,没有茎和叶子,不含叶绿素,不能自己制造养料,靠寄生生活,种类很多如细菌、真菌等。
“纯培养”和“同步生长”分词解释:
纯培养:
微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代,称纯培养。
纯培养最重要的是在于微生物的生理研究,方法是依靠灭菌和分离,是由巴斯德(L.Pasteur)和柯赫(R.Koch)建立起来的。
在自然界中,有的培养条件很困难,特别是具有密切共生关系禅桥的生物及进行寄生性营养的生物;也有一些在理论上不可能进行纯粹培养的生物。
同步生长:
培养物中的所有细胞都处于同一生轮颤长阶段,能同时分裂的生长形式。
获得同步生长的方法有两种,一种是选择法,将处于不同生长阶段的细胞通过差异离心法或过滤法将它们分开;另一种是诱导法,控制环境条件如温度、营养物等,使细胞继续生长,但抑制细胞分裂,然后将环境条件恢复到最适,大多数细胞就同时出现分裂。
以上内容参考贺桐猛网络 - 菌 (微生物)网络 - 纯培养网络 - 同步生长
❻ 微生物培养方法
微生物培养法是在人为条件下繁殖微生物的方法。根据微生物的种类以及对养料、温度、氧气、水分、酸碱度等环境条件的要求不同,并联系生产和实验上的具体要求,可有不同的培养方法。可分好气培养法和厌气培养法两类。中海生物技术的培养基一是好气微生物培养法,常用:①摇床培养法,即将微生物接种于盛有液体培养基的三角瓶后,放在恒温培养室中的摇床上作有节奏的振荡,使空气不断进入培养液中,促其良好生长;②浅盘培养法,又称表面培养法,在盘内放一浅层培养基,使微生物能够充分接触空气,而有利于生长繁殖,但此法所需空间大,并且容易污染杂菌;③深层培养法,适用于好气微生物的大规模发酵培养,在大容积的液体培养基中,通入无菌空气,并不断搅拌,可使微生物充分接触空气,迅速繁殖并积累代谢产物。二是厌气微生物培养法,实验室常用化学还原剂或抽气机吸除培养基中的分子氧,也有用静止状态的深层培养法。在生产中常用密封式发酵罐或不通风的固体发酵法。