微生物实验步骤怎么写

‘壹’ 培养微生物的方法步骤介绍

微生物培养所培养的微生物通常是病菌、细菌、放线菌、真菌等，属于生物培养的一种。

微生物培养步骤：

1.配置不同浓度的营养液稀释液:取营养液1ml溶于9ml无菌水中,振荡 5min配成10%的溶液.

2.将容器口靠近(注意不是对着)酒精灯灯焰用吸管从此溶液中吸取1ml加入到装有9ml无菌水的试管中.以此类推制成1%,0.1%,0.01%等不同浓度的稀释液.

3.将试管口靠近(注意不是对着)酒精灯灯焰,左手拿试管,右手托培养皿(仅露一条小缝,且靠近灯焰).将溶液倒入培养皿中,在各培养皿上标上浓度.

4.将有细菌生长的样品容器口靠近(注意不是对着)酒精灯灯焰,用接种环挑取菌落上的少量菌体加入10%的营养液中.把接种环放在酒精灯上灼烧灭菌,再次取样加入盛1%的营养液的培养皿(仅露一条小缝,且靠近灯焰)中.重复这个操作,将各浓度的营养液接上种.

5.轻轻摇匀接上种的培养皿,置于恒温箱内37摄氏度保存,3天后就有菌落出现.

微生物培养的基本条件：

1、影响微生物生长的因素

微生物的生长，除了受本身的遗传特性决定外，还受到外界许多因素的影响。影响微生物生长的因素很多，简要介绍如下。

1） 营养物浓度

细菌的生长率与营养物的浓度有关:μ=μmax*C/(K+C) ，营养物浓度与生长率的关系曲线是典型的双曲线。

K值是细菌生长的很基本的特性常数。它的数值很小，表明细菌所需要的营养浓度非常之低，所以在自然界中，它们到处生长。然而营养太低时，细菌生长就会遇到困难，甚至还会死亡。这是因为除了生长需要能量以外，细菌还需要能量来维持它的生存。这种能量称为维持能。另一方面，随着营养物浓度的增加，生长率愈接近最大值。

2）温度

在一定的温度范围内，每种微生物都有自已的生长温度三基点：最低生长温度、最适生长温度和最高生长温度。在生长温度三基点内，微生物都能生长，但生长速率不一样。微生物只有处于最适生长温度时，生长速度才最快，代时最短。超过最低生长温度，微生物不会生长，温度太低，甚至会死亡。超过最高生长温度，微生物也要停止生长，温度过高。也会死亡。一般情况下，每种微生物的生长温度三基点是恒定的。但也常受其它环境条件的影响而发生变化。

根据微生物最适生长温度的不同，可将它们分为三个类型：

a.嗜冷微生物：其是适生长温度多数在-10℃－20℃之间

b.中温微生物：其最适生长温度一般在20℃－45℃之间

c.嗜热微生物：生长温度在45℃以上。

3）水分

水分是微生物进行生长的必要条件。芽孢、孢子萌发，首先需要水分。微生物是不能脱离水而生存的。但是微生物只能在水溶液中生长，而不能生活在纯水中。各种微生物在不能生长发育的水分活性范围内，均具有狭小的适当的水分活性区域。

4）氧气

按照微生物对氧气的需要情况，可将它们分为以下五个类型。

a.需氧微生物：这类微生物需要氧气供呼吸之用。没有氧气，便不能生长，但是高浓度的氧气对需氧微生物也是有毒的。很多需氧微生物不能在氧气浓度大于大气中氧气浓度的条件下生长。绝大多数微生物都属于这个类型。

‘贰’ 微生物检验样品采集步骤

微生物检验样品采集步骤

样品的采集是微生物检验的重要组成部分，用于检验的样品数量和状况具有重要意义。这对取样人员和制样人员提出了很高的专业要求，既要保证样品的代表性和一致性，又要保证整个微生物检验过程在无菌操作的条件下进行。微生物检验样品的采集大致分为取样、包装密封、标识、样品的运输、接收、保存几个环节。下面是我为大家带来的微生物检验样品的采集步骤的知识，欢迎阅读。

样品的取样

取样是指在一定质量或数量的产品中，取一个或多个代表性样品，用于感官、微生物和理化检验的全过程。

首先在取样之前应确认货、证是否相符。其次取样工具要达到无菌的要求，对取样具和一些试剂材料应提前准备、灭菌。如果使用不合适的采集工具，可能会破坏样品的完整性，甚至使样品采集毫无意义。

应根据不同的样品特征和取样环境，对取样物品和试剂进行事先准备和灭菌等操作。另外要保证样品能够代表整批产品，其检测结果应具有统计学有效性，样品到达实验室时的状况应能反映出取样时产品的真实情况。

取样时应根据不同的产品类型、产品状态等选择不同的取样方法和标准。

① 包装食品：对于直接食用的小包装食品，尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。对于桶装或大容器包装的液体食品，取样前应摇动或用灭菌棒搅拌液体，尽量使其达到均质;取样时应先将取样用具浸入液体内略加漂洗，然后再取所需量的样品，装入灭菌容器的量不应超过其容量的3/4，以便于检验前将样品摇匀;取完样品后，应用消毒的温度计插入液体内测量食品的温度，并作记录。尽可能不用水银温度计测量，以防温度计破碎后水银污染食品;如为非冷藏易腐食品，应迅速将所取样品冷却至0～4℃。对于大块的桶装或大容器包装的冷冻食品，应从几个不同部位用灭菌工具取样，使样品具有充分的代表性;在将样品送达实验室前，要始终保持样品处于冷冻状态样品一旦融化，不可使其再冻，保持冷却即可。

②并梁 生产过程中的取样：划分检验批次，应注意同批产品质量的均一性;如用固定在贮液桶或流水作业线上的取样龙头取样时，应事先将龙头消毒;当用自动取样器取不需要冷却的粉状或固体食品时，必须履行相应的管理办法，保证产品的代表性不被人为地破坏。

③ 液体产品：通常情况下，则蔽旁液态产品较容易获得代表性样品。液态产品一般盛放在大罐中，取样时，可连续或间歇搅拌，对于较小的容器，可在取样前将液体上下颠倒，使其完全混匀。较大的样品(100～500ml)要放在已灭菌的容器中送往实验室，实验室在取样检测之前应将液体再彻底混匀一次。

④ 固体样品：固态样品常用的取样工具有灭菌的解剖刀、勺子、软木钻、锯子和钳子等。面粉或奶粉等易于混匀的食品，其成品质量均匀、稳定，可以抽取小样品检测(如100 g)。但散装样品就必须从多个点取样，且每个样品都要单独处理，在检测前彻底混匀，并从中取一份样品进行检测。肉类、鱼类的食品既要在表皮取样叉要在深层取样。深层取样时要小心不要被表面污染。有些食品，如鲜肉或熟肉可用灭菌的解剖刀或钳子取样;冷冻食品可在未解冻的状态下可用锯子、木钻或电钻(一般斜角钻人)等获取深层取样样品;全蛋粉等粉末状样品取样时，可用灭菌的取样器斜角插入箱底，样品填满取样器后提出箱外，再用灭菌小勺从上、中、下部位取样。

⑤ 表面取样：通过惰性载体可以将表面样品上的微生物转移到合适的培养基中进行微生物检验，这种惰性载体既不能引起微生物死亡，也不应使其增殖。这样的载体包括清水、拭子、胶带等。取样后，要使微生物长期保存在载体上，既不死亡又不增殖十分困难，所以应尽早地将微生物转接到适当的培养基中。转移前耽误的时间越长，品质评价的可靠性就越差。表面取样技术只能直接转移菌体，不能做系列稀释，只有在菌体数量较多时才适用。其最大优点是检测时不破坏样品。

⑥ 空气样品的采取：空气的取样方法有直接沉孙橡降法和过滤法。在检验空气中细菌含量的各种沉降法中，平皿法是最早的方法之一，到目前为止，这种方法在判断空气中浮游微生物分次自沉现象方面仍具有一定的意义。过滤法是使定量的空气通过吸收剂，然后将吸收剂培养，计算出菌落数。

样品的包装密封

为保证样品的完整性，装有样品的包装物应进行封口，以证实其可靠性，即从取样地点至实验室这段时间不发生任何变化。可采用自粘胶、特制的纸黏着剂或者石蜡等封口，封口处应留有填写日期、检验人员和货主签字的地方，然后盖上专用的印章。

样品的标识

取样过程中应对所取样品进行及时、准确的标记。取样结束后，应由取样人写出完整的取样报告。样品应尽可能在原有状态下迅速运送或发送到实验室。

保存的样品应进行必要的清晰的标记，内容包括：样品名称，样品描述，样品批号，企业名称，地址，取样人，取样时间，取样地点，取样温度(必要时)，测试目的等。标记应牢固并具防水性，确保字迹不会被擦掉或脱色。所有盛样容器必须有和样品一致的标记。在标记上应记明产品标志与号码和样品顺序号以及其他需要说明的`情况。标记应牢固并具防水性，确保字迹不会被擦掉或脱色。当样品需要托运或由非专职取样人员运送时，必须封死样品容器。

样品的运输

取样结束后应尽快将样品送往实验室检验。如不能及时运送，冷冻样品应存放在-15℃以下的冰箱或冷库内;冷藏和易腐食品存放在0～4℃ 冰箱或冷藏库内;其他食品可放在常温暗处。微生物检验样品应在取样后6 h以内送达实验室进行检验。

样品的运输过程必须有适当的保护措施(如密封、冷藏等)，以保证样品的微生物指标不发生变化。运送冷冻和易腐样品应在包装容器内加适量的冷却剂或冷冻剂，但样品不可与冷却剂或冷冻剂直接接触，保证途中样品不升温或不融化，必要时可于途中补加冷却剂或冷冻剂。运送水样时应避免玻璃瓶摇动，水样溢出后又回流瓶内，从而增加污染。如不能由专人携带送样时，也可托运。托运前必须将样品包装好，应能防破损，防冻结或防易腐和冷冻样品升温或融化。在包装上应注明“防碎”、“易腐”、“冷藏”等字样。同时做好样品运送记录，写明运送条件、日期、到达地点及其他需要说明的情况，并由运送人签字。

样品的接收

在接收样品时，实验室应与送样人共同相互确认样品与委托单上的内容是否一致。确认内容一般包括：品名;检验目的;检验项目;形状和包装状况(同体、粉状、冷冻、冷藏、零售、批发、无菌包装等都不同);抽样数量(个数和质量);抽样日期及送达日期;抽样地点;随货样附带的许可申请单编号;生产国或者生产厂家名称(进口商品);抽样者的单位、姓名及有无封印;其他搬运、储存、检验时的注意事项。

样品的保存

实验室接到样品后应在36 h内进行检测(贝类样品通常要在6 h内检测)，对不能立即进行检测的样品，要采取适当的方式保存，使样品在检测之前维持取样时的状态，即样品的检测结果能够代表整个产品。实验室应有足够和适当的样品保存设施(如冰箱或冰柜等)。保存的样品应进行必要和清晰的标记，内容包括：样品名称，样品描述，样品批号，企业名称、地址，取样人，取样时间，取样地点，取样温度(必要时)，测试目的等;样品在保存过程中应保持密封性，防止引起样品pH值的变化。

不同类型的样品，保存方法不同：

① 易腐样品：要用保温箱或采取必要的措施使样品处于低温状态(0～4℃)，应在取样后尽快送至实验室，并保证样品送至实验室时不变质。易腐的非冷冻食品检测前不应冷冻保存(除非不能及时检测)。如需要短时间保存，应在0～4℃ 冷藏保存，但应尽快检验(一般不应超过36h)，因为保存时间过长会造成样品中嗜冷细菌的生长和嗜中温细菌的死亡。

② 冷冻样品：要用保温箱或采取必要的措施使样品处于冷冻状态，送至实验室前样品不能融解、变质。冰冻样品要密闭后置于冷冻冰箱(通常为-l8℃)，检测前要始终保持冷冻状态，防止样品暴露在二氧化碳气体中。

③ 其他样品：应用塑料袋或类似的材料密封保存，注意不能使其吸潮或水分散失，并要保证从取样到实验室进行检验的过程中其品质不变。必要时可使用冷藏设备。

‘叁’ 微生物实验纸片法测定测定抗生素效价方法的整套实验步骤

实验前准备：4个培养皿，2支移液管，1支涂布棒，并将培养皿包好灭菌，取一定的蒸馏水灭菌制成无菌水。
1、配制营养琼脂培养缓段基：称取营养琼脂9.6g，加入300ml蒸馏水，加热煮沸后将培养基导入锥形瓶，然后包扎灭菌(121°C，20min)。
2、倒平板：在无菌环境操作下，将上述培养基倒入4个平板，并编号1，2,，3，4.
3、制菌悬液：用5ml无菌移液管在无菌操作下，吸取3ml无菌水到菌种斜面，用接种环轻刮下菌苔，捣碎，塞上棉塞，振荡片刻。
4、将抗生素稀释成10-3,10-4，10-5,10-6四种不同稀释度的梯度液。
5、取直径1cm圆形滤纸若干，取4个圆形滤纸分别放入10-3,10-4，10-5,10-6的抗生素溶液中浸泡一会。
6、待平板凝固后接种，各取0.2ml菌悬液倒入平板中，用涂布棒抹匀。
7、在1,2,3,4,号已接种的平板中分别放入4个浸泡在10-3,10-4，10-5,10-6抗生素溶液中的滤纸扰燃誉片，并注意个纸片间的距离应较大。
8、培养，放入37°c恒温箱中培养24h。
9、观察测量并记录数据，观察抗生素滤纸周围的透明抑菌圈，测量16个抑菌圈的大小，求算不同浓度抗生素段空滤纸抑菌圈的大小。

‘肆’ 怎么用琼脂培养微生物（实验方法,步骤) 现有材料：培养皿，琼脂粉，各种细菌

大多数细菌可在蛋白胨牛肉膏培养中生长，就是蛋白胨牛肉膏培养基为例实验步骤如下：
1、培养皿用报纸包起来，灭菌
2、配制培养基，培养基完全溶于水后，调PH值7.2-7.4之间。
3、配制好并调完PH值的培养基中，按1.5%的比例加入琼脂粉。（教材上写要加热溶解后再灭菌，根据工作经验，加入培养基中，直接灭菌，高温状态下，琼脂自然就溶解了）
4、灭菌后的培养基倒入平板中，琼脂凝固后，倒置。
5、接种环在酒精灯的火焰上烧红后，降温，取一环菌，在平板上划线。
6、划线后的平板，倒置放入培养箱中培养。
7、培养24小时后，观察菌苔形态、菌生长情况。
以上是我工作的步骤，可能与书上有出入，因工作时间长了，有些细节就不太注意了。还是要以微生物实验书以主。

‘伍’ 常见微生物实验步骤怎么写

1、药敏试验：主要是通过测定抑菌圈的范围来确定药物的疗效。
2、血凝实验：通过测定病毒与红细胞反应的浓度测定其抗体效价。
3、PCR：细菌主要通过16srRNA确定其细菌的种类。
4、中和实验：主要测定病毒的稀释浓度。
5、革兰氏染色：确定是革兰氏阳性还是阴性
6、瑞氏染色：主要是对细菌染色。

‘陆’ 怎样设计一个微生物实验

科普性的？有灭菌锅不？
简单地搞一个：培养与观察手指和空气中的微生物
需要：灭菌锅、培养皿、250ml三角瓶、酵母膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、NaOH、琼脂粉、pH试纸、酒精灯、培养箱。
步骤：
1，按照
蛋白胨
10g/L、酵母粉
5g/L、NaCl
5g/L的量配置培养基，NaOH调pH到7.0，分装到三角瓶中，然后分别加入15g/L的琼脂粉；用报纸或牛皮纸包好培养皿。
2，在灭菌锅中121℃灭菌培养基、培养皿20分钟；
3，
混匀培养基，稍等到60℃左右，酒精灯火焰周围将培养基倒到培养皿里，每皿内厚度约0.6cm。
4，
等培养基凝固好就可以实验了。
5，
每人在培养基上按手印，另外将几个培养皿打开盖子放在空气中15分钟左右，或者根据学生兴趣自己在培养基上接种（口水、脸、头屑、泥土等等）。
6，包好接种完的培养皿，37℃培养14h左右。
7，观察培养皿上各种颜色、不同形态菌落的微生物。
8，
有条件的话再挑菌落，涂到载玻片上，进行显微镜下的观察。