1. 高中生物实验中常用的染料有哪些
1、龙胆紫,又名甲紫、结晶紫
甲紫属于三苯甲烷类染料消毒剂,和微生物酶系统发生氢离子的竞争性对抗,使酶成为无活性的氧化状态,从而发挥杀菌作用。主要对革兰氏阳性菌如葡萄球菌、白喉杆菌,以及绿脓杆菌、白念珠菌、表皮癣菌有杀灭作用,对其他革兰氏阴性菌和抗酸菌几乎无作用。
2、醋酸洋红
在涂抹法与压碎法中,醋酸洋红常被用作核、染色体的固定和染色剂。在煮沸的45%醋酸中加洋红使之饱和,再加入微量的铁离子,便使醋酸洋红材料在为醋酸固定的同时,洋红将核或染色体染成红色。PH呈酸性。
3、斐林试剂
二价铜离子的酒石酸钾钠配合物,可以被脂肪醛或还原性糖还原为氧化亚铜。斐林试剂为深蓝色溶液, 在与脂肪醛或还原性糖共热时, 蓝色消失,析出红色的氧化亚铜沉淀。在氧化亚铜析出过程中, 反应液的颜色可能经过由蓝色→绿色→黄色→红色沉淀的逐渐变化,反应较快时,直接观察到红色沉淀。
它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下,能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。因此,斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。
4、班氏试剂
本尼迪特试剂,也称班氏试剂、本尼迪克试剂、本尼迪克试液或班乃德试剂,是一种浅蓝色化学试剂。本尼迪特试剂是斐林试剂的改良试剂,它与醛或醛糖反应生成红黄色沉淀。它是由硫酸铜、柠檬酸钠和无水碳酸钠配置成的蓝色溶液,可以存放备用,避免斐林溶液必须现配现用的缺点。
5、酚酞
酚酞是一种常用酸碱指示剂,广泛应用于酸碱滴定过程中。通常情况下酚酞遇酸溶液不变色,遇中性溶液也不变色,遇碱溶液变红色。
6、溴麝香草酚蓝
溴麝香草酚蓝(Bromothymol Blue),又名溴百里香酚蓝。英文简称BTB。溴麝香草酚蓝是一种酸碱指示剂、吸附指示剂。 在生物学实验中常用作水生生物的呼吸试剂。
2. 微生物实验室常用试剂有那些往XDJM指点一二
微生物学实验室常用试剂与培养基
第一节 常用试剂及其使用方法
一、诊断用纸片
⑴ 杆菌肽纸片(0.04U/片):抑菌圈>10mm为敏感。质控菌株: D群链球菌阴性, A群链球菌阳性。
⑵ SMZ纸片(1.25μg/片、23.75μg/片):出现抑菌圈即为敏感。质控菌株:D群链球菌阳性, A群链球菌阴性。
⑶ 新生霉素纸片(5.0μg/片):抑菌圈≥16mm为敏感。质控菌株:表皮葡萄球菌阳性,腐生葡萄球菌阴性。
⑷ O129纸片、奥普托欣(Optochin)纸片:参见第五节《生化试验培养基》。
二、诊断用血清
1.沙门菌属诊断血清
⑴ A-F群O多价诊断血清。
⑵ 特异O群因子诊断血清:常用的有O2,O4,O7,O9,O10诊断血清。
⑶ 特异H因子诊断血清 常用的有Ha,Hb,Hc,Hd,Hgm,Hi,Hf、Vi因子诊断血清。
2.志贺菌属诊断血清
志贺菌属4种多价血清:痢疾志贺菌Ⅰ、Ⅱ血清,福氏志贺菌多价血清及分型血清(1~6型),宋内志贺菌诊断血清,鲍氏志贺菌多价血清及分型血清。
3.致病性大肠埃希菌诊断血清
肠致病性大肠埃希菌(EPEC)诊断血清,产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)诊断血清,肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)诊断血清,肠出血性大肠埃希菌(EHEC)诊断血清O157: H 7。
4.霍乱弧菌O1、O139混合多价诊断血清及稻叶、小川、彦岛O139分型血清
5.脑膜炎奈瑟菌多价血清及分群血清
6.链球菌分类诊断血清
7.肺炎链球菌诊断血清
8.耶尔森菌诊断血清
三、常用染色液
1.革兰染色液
⑴ 结晶紫溶液 A液:结晶紫 20g,95%乙醇20 ml; B液:草酸铵 0.8g, 蒸馏水80 ml。
染色前24h将A液、 B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。
⑵ 碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml。
将碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升蒸馏水, 使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至碘、碘化钾完全溶解。最后补足水量。也可用少量蒸馏水将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。
⑶ 脱色液:95%乙醇
⑷ 复染液:沙黄2.5g,95%乙醇100ml为贮存液,取贮存液10ml,加蒸馏水90ml为应用液。
2.抗酸染色液
⑴ 碱性复红染色液: ①萋纳石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱和溶液10ml,5%石炭酸溶液90ml。 ②脱色液:浓盐酸3ml,95%乙醇97ml。③复染液(吕弗勒美蓝液):美蓝乙醇饱和溶液30ml,100g/L氢氧化钾溶液0.1ml,蒸馏水100ml。
⑵ 金胺O-罗丹明B染色液: ①罗丹明B液:罗丹明B 0.1g加蒸馏水100ml。②1g/L金胺O液:金胺O液0.1g加蒸馏水95ml,再加入纯石炭酸 5ml,混匀。③3%盐酸乙醇。④稀释美蓝液:吕弗勒美蓝液100ml,加蒸馏水90ml,混匀。
3.鞭毛染色液(改良Ryu法)
A液:5%石炭酸10ml,鞣酸2g,饱和硫酸铝钾溶液 10ml; B液:结晶紫乙醇饱和液。应用液A液10份,B液1份,混合,室温存放备用。
4.异染颗粒染色液
甲液:甲苯胺蓝 0.15g,孔雀绿 2g/L, 95% 乙醇2.0ml,蒸馏水100ml。乙液:碘 2g,碘化钾3g,蒸馏水300ml。
先将碘化钾加入少许蒸馏水(约2ml),充分振摇,待完全溶解,再加入碘,使完全溶解后, 加蒸馏水至300ml。
5.荚膜染色液
⑴ 印度墨汁或50g/L黑色素水溶液
⑵ 5g/L苯胺蓝水溶液。
第二节 基础培养基
一、液体基础培养基
1.蛋白胨水
[用途]
用于细菌靛基质试验;一般细菌培养和传代。
[配法]
蛋白胨(或胰蛋白胨)10g,氯化钠 5g,蒸馏水1L。
将上述成分溶于水中,校正pH 至7.2,分装试管,每管2~3ml,置121℃灭菌15min备用。
[质量控制]
大肠埃希菌生长良好,靛基质阳性;伤寒沙门菌生长良好,靛基质阴性。
2.营养肉汤
[用途]
一般细菌的增菌培养,加入1%的琼脂粉亦可作营养琼脂。
[配法]
蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化钠5g,蒸馏水1L。
将上述成分称量混合溶解于水中,校正pH至7.4,按用途不同分装于烧瓶或试管内。经121℃灭菌15min,作无菌试验后冷藏备用。
[质量控制]
金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌生长良好。
[保存]
置冰箱3周内用完。
3.牛肉浸液培养基
[用途]
细菌培养最基础的培养基,除用于一般细菌的培养外,又可以作营养琼脂及其它培养基的基础。
[配法]
新鲜除脂牛肉 500g,氯化钠5g
蛋白胨10g,蒸馏水1L。
先将牛肉清洗,除脂肪、肌腱,并切块绞碎。称取500g置容器加入蒸馏水1L,搅匀后置冰箱过夜,次日煮沸加热30min,并用玻棒不时搅拌用绒布或麻布进行粗过滤,再用脱脂棉过滤即成。在过滤中加入蛋白胨10g、氯化钠5g溶解后,用氢氧化钠溶液校正pH至7.6~7.8,并加热煮沸10min,补充蒸馏水至1L,最后用滤纸过滤,呈清晰透明、淡黄色液体,经121℃15min灭菌备用。
[用法]
根据用途不同可以制成营养肉汤,以此为基础制成其它培养基。如制作固体培养基,加入琼脂15 ~20g/L即可。
[质量控制]
金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌等均生长良好。
[保存]
置4℃冰箱内可以使用较长时间。
注:商品牛肉浸膏粉,一般使用量为3~5g/L。
二、固体基础培养基
1.营养琼脂
[用途]
一般细菌和菌株的纯化及传种。 [配法]
蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化钠5g,琼脂粉(优质)12g,蒸馏水1L。
将上述成分(除琼脂外)溶于水中,校正pH 7.2~7.4后加入琼脂,煮沸溶解,根据用途不同进行分装,经121℃灭菌15min,倾注平板或制成斜面,冷藏备用。
[质量控制]
金黄色葡萄球菌菌落呈浅黄色; 痢疾志贺菌菌落无色;铜绿假单胞菌 菌落无色或浅绿色。
[保存]
置4℃冰箱保存,2周内用完。
2.血琼脂培养基
[用途]
一般病原菌的分离培养和溶血性鉴别及保存菌种。
[配法]
pH 7.4~7.6牛肉浸液琼脂 100ml,脱纤维羊血(或兔血) 5~10ml。
将血琼脂基础经121℃灭菌15min,待冷却至50℃左右以无菌手续加入羊血,摇匀后立即倾注灭菌平皿内,待凝固后,经无菌实验冷藏备用。
[质量控制]
化脓性链球菌ATCC 19615生长良好,β-溶血;肺炎链球菌ATCC 6303生长良好,α-溶血;表皮葡萄球菌ATCC 12228 生长良好,不溶血。
[保存]
置4℃冰箱,1周内用完。
3.巧克力琼脂培养基
[用途]
主要用于嗜血杆菌的分离培养,亦可用于奈瑟菌的增殖培养。
[配法]
鲜牛肉浸出液1L, 蛋白胨10g,
氯化钠5g,琼脂粉12g,无菌脱纤维
羊血或兔血100ml。
将上述成分(除兔血外)加热溶解,调pH至7.2,置121℃15min高压灭菌,待冷至约85℃,以无菌方式加入兔血,摇匀后置85℃水浴中,维持该温度10min,使之成巧克力色。取出置室温冷至约50℃,倾注平板或制成斜面备用。
[质量控制]
流感嗜血杆菌ATCC 10211、肺炎链球菌ATCC 6305生长良好,菌落典型。
[保存]
置4℃冰箱,1周内用完。
4.胱氨酸胰化酪蛋白琼脂
[用途]
常用于测定脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌以及营养要求较高细菌的糖发酵试验。
[配法]
胱氨酸0.5g, 胰化酪蛋白20g,氯化钠5g,亚硫酸钠0.3g,琼脂3.5g,酚红0.0175g,蒸馏水1L。
将上述成分(酚红除外)混合溶解,调pH至7.2,加入酚红指示剂。分装试管,115℃灭菌15min。
[用法]
用于测定糖发酵时,按需要加入各种糖溶液,将待检标本直接种于培养基管内,置35℃孵箱,18~24h观察结果。培养基由红色变为黄色为阳性,不变色为阴性。
第三节 保存和增菌培养基
一、菌种保存培养基
[配法]
蛋白胨10g,牛肉膏5g,氯化钠3g,磷酸氢二钠2g,琼脂粉4.5g,蒸馏水1L 。
将上述成分混合于水中,加热溶解,调pH至7.4~7.6,分装试管2/3左右高度,121℃高压灭菌15min,成为半固体培养基,备用。
[质量控制]
培养基呈淡黄色半固体状。大肠埃希菌(ATCC 25922)生长良好,动力阳性;福氏志贺菌(ATCC 12022)生长良好,动力阴性;金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)生长良好,动力阴性。
二、增菌培养基
1.葡萄糖肉汤
[用途]
用于血液增菌。
[配法]
蛋白胨(或月示 胨)10g,氯化钠5g,肉浸液(或心浸液)1L,葡萄糖3g,枸橼酸钠3g,5g/L对氨基苯甲酸水溶液10ml,1mol/L硫酸镁溶液20ml,青霉素酶1000 U。
将蛋白胨、氯化钠混合于肉浸液中加热溶解,再加入葡萄糖、枸橼酸钠、对氨苯甲酸及硫酸镁,继续煮沸5min,并补足失水,调整pH至7.8。
过滤分装,每瓶50ml,高压灭菌115℃20min后,每瓶加入青霉素酶50 U,经无菌试验合格后,冷却备用。
[用法]
将采取的血液标本,以无菌手续注入培养瓶中(血液1ml,培养液10ml),置35℃培养箱内,每天1次取出观察结果。如有细菌生长,可出现数种不同的表现,应随时作分离培养,可选用血琼脂、伊红美蓝琼脂及巧克力琼脂平板等。无细菌生长表现的培养瓶,需连续观察7d,仍无细菌生长方可弃去。在观察的过程中,至少应作两次分离培养。
注:
⑴ 枸橼酸钠为抗凝剂,可使血液加入培养基中不凝固。
⑵ 对氨基苯甲酸主要中和血液中磺胺类药物的抑菌作用。
⑶ 硫酸镁主要抑制血液中存在的四环素、金霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑菌作用。
⑷ 本培养基近年来有许多改良配方,如加入0.3%~0.5%酵母浸膏以增加营养;加0.2%核酸刺激细菌生长;加0.1%粘液素能被覆于细菌的表面,保护细菌免受抗体破坏;加入聚茴香脑磺酸钠(SPS)能中和补体的抗药作用从而提高检出率。
2.血液增菌培养基
[用途]
血液和骨髓液病原菌的增菌培养。
[配法]
蛋白胨10g,氯化钠5g,牛肉膏3g,葡萄糖1g,酵母膏粉3g,枸橼酸钠3g,磷酸氢二钾2g,5g/L对氨基苯甲酸溶液5ml,1mol/L硫酸镁溶液20ml, 4g/L酚红溶液6ml,青霉素酶50 U,聚茴香脑磺酸钠(SPS) 0.3g,蒸馏水1L。
将上述成分(除酚红指示剂、青霉素酶外)混合加热溶解,校正pH至7.4,再加酚红,过滤分装每瓶30~50ml,经121℃灭菌15min和35℃24h无菌试验备用。临用时每瓶加入1.5~2.5 U青霉素酶。
[质量控制]
伤寒沙门菌ATCC 50096、白色念珠菌ATCC 10231、化脓性链球菌ATCC 19615、肺炎链球菌ATCC 6305、金黄色葡萄菌ATCC 25923、铜绿假单胞菌ATCC 27853均生长良好。
3.亚硒酸盐增菌培养基
[用途]
沙门菌增菌培养。
[配法]
蛋白胨5g,乳糖4g,磷酸氢二钠4.5g,磷酸二氢钠5.5g,亚硒酸氢钠4g,蒸馏水1L。
先将亚硒酸盐加到200ml蒸馏水中,充分摇匀溶解。其它成分称量混合,加入蒸馏水800ml,加热溶解,待冷却后两液混合,充分摇匀,校正pH 7.0~7.1(通过调整磷酸盐缓冲对的比例来校正pH值)。最后分装于15×150mm的试管内,每管10ml。置水浴隔水煮沸10~15min,立即冷却,置4℃冰箱保存备用。
[用法]
取新鲜标本1g或棉拭子采样直接种于该培养管内。摇动后置35℃培养过夜。如发现均匀混浊,管底有红色沉淀物,表示细菌生长。然后取培养物分离在选择性培养基上,如SS琼脂、麦康凯琼脂平板等,进行培养。
[质量控制]
培养基应呈淡黄色或无色,透明无沉淀物。增菌灵敏度:伤寒沙门菌1×10-5,鼠伤寒及副伤寒沙门菌1×10-7。
[保存]
4℃保存,1周内用完。
注:
⑴ 亚硒酸盐,包括亚硒酸钠、亚硒酸氢钠均可使用,但以亚硒酸氢钠效果为好。
⑵ 磷酸盐缓冲对中,两者的用量比例与亚硒酸盐及蛋白胨的品种有关。制备前应进行调试,其总量为10g/L。
⑶ 在制备过程中,亚硒酸盐不能直接加热。隔水煮沸时间亦不能超过规定时间,否则亚硒酸盐会变质,生成红色沉淀物。
⑷ 培养基应呈淡黄色,有红色沉淀物出现时不可再用。
4.SS增菌液
[用途]
用于沙门、志贺菌的增菌。
[配法]
月示 胨 2g,蛋白胨8g,牛肉膏3.5g,酵母膏2g,葡萄糖2g,枸橼酸铁10g,硫代硫酸钠10g,亚硫酸钠0.7g,胆盐5.5g,磷酸氢二钠4g,磷酸二氢钾0.1g,去氧胆酸钠(进口) 1.5g,煌绿0.005g,蒸馏水1L。
将上述成分加热溶于水中,调pH至7.1,分装试管(15×150mm),每管5~7ml,隔水煮沸5min备用。
[用法]
取粪便标本1g直接种于增菌液内,35℃16~18h培养,取出转种于分离培养基即可。
[质量控制]
培养基应呈淡黄色或略呈淡绿色。伤寒沙门菌ATCC 50096、福氏志贺菌ATCC 12022 生长良好;大肠埃希菌ATCC 25922 生长抑制。
注:
⑴ 切勿高压,隔水煮沸时间不超过5min。
⑵ 煌绿用量应根据不同产品批号酌情增减。
5.碱性蛋白胨水
[用途]
霍乱弧菌增菌培养。
[配法]
蛋白胨 20g,氯化钠5g,蒸馏水100ml。
将上述成分溶解于水中,校正pH 至8.6,分装于试管8~10ml,经121℃灭菌15min备用。
[用法]
将待检标本接种到碱性胨水中,置35℃培养6~8h,霍乱弧菌呈均匀混浊生长,表面有菌膜出现。取表面菌液一白金环移种到碱性琼脂、庆大琼脂或TCBS琼脂平板上。必要时做第二次增菌。
[质量控制]
有条件的实验室可用标准菌株,一般临床实验室可用非01群弧菌,培养后生长良好者方可使用。霍乱弧菌E1-Tor生物型和副溶血弧菌生长良好(6h);大肠埃希菌ATCC 25922不生长(6h)。
[保存]
置4℃冰箱,2周内用完。
注:若在每升碱性胨水中加入1%亚碲酸钾溶液0.5~1.0 ml,则成为亚碲酸钾碱性胨水,其增菌效果更为理想。
第四节 分离培养基
一、革兰阳性杆菌分离培养基
1.罗-琴改良培养基
[用途]
用于结核分枝杆菌培养。
[配法]
磷酸二氢钾2.4g,硫酸镁0.24g,枸橼酸镁(或枸橼酸钠) 0.6g,天门冬素3.6g,甘油12ml,蒸馏水600ml,马铃薯淀粉30g,新鲜鸡卵液1L,2%孔雀绿水溶液20ml。
先将磷酸盐、硫酸镁、枸橼酸镁、天门冬素及甘油,加热溶解于600ml蒸馏水中。再添放马铃薯粉,边放边搅,并继续置沸水中加热30min,待冷却至60℃左右时,加入鸡卵液1L及孔雀绿溶液20ml,充分混匀后,用无菌操作分装于灭菌试管,每支5~6ml,塞紧橡皮塞(最好是翻口塞),置于血清凝固器内制成斜面,经85℃1h间歇灭菌2次(或高压灭菌115℃20min),待凝固后经无菌试验,4℃冷藏备用。
[用法]
取晨咳痰或其它体液标本,经消化处理和离心沉淀的浓缩液0.1ml(约2滴)滴种于培养基的斜面上,尽量摇晃,置35℃5%~10%二氧化碳温箱内培养1~4周,观察结果。凡在1周内发现生长的菌落,一般不可能是结核分枝杆菌;在2周后生长的菌落,奶油状,略呈黄色,粗糙突起,不透明,即取菌进行涂片染色镜检及鉴定。
[质量控制]
用结核分枝杆菌菌株作阳性培养试验。
[保存]
置4℃冰箱内2~4周有效。
注:
⑴ 本培养基由Lowenstein-Jenden设计的基础上改良。
(2)本培养基pH约为6.0左右,一般无须校正。
(3)间歇灭菌的温度不宜超过90℃。
2.血清斜面培养基(吕氏血清斜面)
[用途]
用于白喉棒状杆菌培养。
[配法]
1%葡萄糖肉汤(pH 7.6)100ml,无菌动物血清(牛、羊、猪、兔) 300ml。
将上述成分混合后,分装于试管内,每管约4~5ml。斜插在血清凝固器内(或蒸笼)加热80~85℃30min,使血清凝固成斜面,冷却后放4℃冰箱内。取出后采用间歇灭菌法,85℃灭菌30min,连续3天,经无菌试验证明无杂菌生长即可应用。
微生物学实验室常用试剂与培养基 第一节 常用试剂及其使用方法 分类:默认栏目2006.2.21 20:54 作者:hbmzhsh | 评论:2 | 阅读:1037
微生物学实验室常用试剂与培养基
第一节 常用试剂及其使用方法
一、诊断用纸片
⑴ 杆菌肽纸片(0.04U/片):抑菌圈>10mm为敏感。质控菌株: D群链球菌阴性, A群链球菌阳性。
⑵ SMZ纸片(1.25μg/片、23.75μg/片):出现抑菌圈即为敏感。质控菌株:D群链球菌阳性, A群链球菌阴性。
⑶ 新生霉素纸片(5.0μg/片):抑菌圈≥16mm为敏感。质控菌株:表皮葡萄球菌阳性,腐生葡萄球菌阴性。
⑷ O129纸片、奥普托欣(Optochin)纸片:参见第五节《生化试验培养基》。
二、诊断用血清
1.沙门菌属诊断血清
⑴ A-F群O多价诊断血清。
⑵ 特异O群因子诊断血清:常用的有O2,O4,O7,O9,O10诊断血清。
⑶ 特异H因子诊断血清 常用的有Ha,Hb,Hc,Hd,Hgm,Hi,Hf、Vi因子诊断血清。
2.志贺菌属诊断血清
志贺菌属4种多价血清:痢疾志贺菌Ⅰ、Ⅱ血清,福氏志贺菌多价血清及分型血清(1~6型),宋内志贺菌诊断血清,鲍氏志贺菌多价血清及分型血清。
3.致病性大肠埃希菌诊断血清
肠致病性大肠埃希菌(EPEC)诊断血清,产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)诊断血清,肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)诊断血清,肠出血性大肠埃希菌(EHEC)诊断血清O157: H 7。
4.霍乱弧菌O1、O139混合多价诊断血清及稻叶、小川、彦岛O139分型血清
5.脑膜炎奈瑟菌多价血清及分群血清
6.链球菌分类诊断血清
7.肺炎链球菌诊断血清
8.耶尔森菌诊断血清
三、常用染色液
1.革兰染色液
⑴ 结晶紫溶液 A液:结晶紫 20g,95%乙醇20 ml; B液:草酸铵 0.8g, 蒸馏水80 ml。
染色前24h将A液、 B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。
⑵ 碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml。
将碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升蒸馏水, 使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至碘、碘化钾完全溶解。最后补足水量。也可用少量蒸馏水将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。
⑶ 脱色液:95%乙醇
⑷ 复染液:沙黄2.5g,95%乙醇100ml为贮存液,取贮存液10ml,加蒸馏水90ml为应用液。
2.抗酸染色液
⑴ 碱性复红染色液: ①萋纳石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱和溶液10ml,5%石炭酸溶液90ml。 ②脱色液:浓盐酸3ml,95%乙醇97ml。③复染液(吕弗勒美蓝液):美蓝乙醇饱和溶液30ml,100g/L氢氧化钾溶液0.1ml,蒸馏水100ml。
⑵ 金胺O-罗丹明B染色液: ①罗丹明B液:罗丹明B 0.1g加蒸馏水100ml。②1g/L金胺O液:金胺O液0.1g加蒸馏水95ml,再加入纯石炭酸 5ml,混匀。③3%盐酸乙醇。④稀释美蓝液:吕弗勒美蓝液100ml,加蒸馏水90ml,混匀。
3.鞭毛染色液(改良Ryu法)
A液:5%石炭酸10ml,鞣酸2g,饱和硫酸铝钾溶液 10ml; B液:结晶紫乙醇饱和液。应用液A液10份,B液1份,混合,室温存放备用。
4.异染颗粒染色液
甲液:甲苯胺蓝 0.15g,孔雀绿 2g/L, 95% 乙醇2.0ml,蒸馏水100ml。乙液:碘 2g,碘化钾3g,蒸馏水300ml。
先将碘化钾加入少许蒸馏水(约2ml),充分振摇,待完全溶解,再加入碘,使完全溶解后, 加蒸馏水至300ml。
5.荚膜染色液
⑴ 印度墨汁或50g/L黑色素水溶液
⑵ 5g/L苯胺蓝水溶液。
3. 高中生物常用检测试剂有哪些
一、与颜色反应有关的试剂1、斐林试剂:成分:0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液).用法:将斐林试剂甲液和乙液等体积混合,再将混合后的斐林试剂倒入待测液,水浴加热或直接加热,如待测液中存在还原糖,则呈砖红色.2、班氏糖定性试剂:为蓝色溶液.和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀.用于尿糖的测定.3、双缩脲试剂:成分:0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4(乙液).用法:向待测液中先加入2ml甲液,摇匀,再向其中加入3~4滴乙液,摇匀.如待测中存在蛋白质,则呈现紫色.4、苏丹Ⅲ:用法:取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中,摇匀.用于检测脂肪.可将脂肪染成橘黄色(被苏丹Ⅳ染成红色).5、二苯胺:用于鉴定DNA.DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色.6、甲基绿:用于鉴定DNA.DNA遇甲基绿(常温)会被染成蓝绿色.7、碘液:用于鉴定淀粉的存在.遇淀粉变蓝.8、龙胆紫溶液:(浓度为0.01g/ml或0.02g/ml)用于染色体着色,可将染色体染成紫色,通常染色3~5分钟.(也可以用醋酸洋红染色,可将染色体染成红色)9、伊红—美蓝试剂:大肠杆菌鉴定,与其中有机酸反应产生深紫色,有金属光泽.10、结晶紫染液:用于自生固氮微生物的鉴定,染色,利于观察.11、重铬酸钾:酸性条件下与酒精反应,由橙红变为灰绿.12、溴麝香草酚蓝:与二氧化碳反应由蓝变绿,在变黄.13、健那绿:与线粒体反应,将线粒体染成蓝绿色.14、甲基绿:与DNA反应,将DNA染成绿色.15、吡罗红:与RNA反应,将RNA染成绿色.二、作为溶剂的试剂1、酒精在不同实验中的作用(1)50%的酒精溶液:在脂肪鉴定中,用苏丹Ⅲ染液染色,再用50%的酒精溶液洗去浮色.(2)75%的酒精溶液:用于杀菌消毒,75%的酒精能渗入细胞内,使蛋白质凝固变性.低于这个浓度,酒精的渗透脱水作用减弱,杀菌力不强;而高于这个浓度,则会使细菌表面蛋白质迅速脱水,凝固成膜,妨碍酒精透入,削弱杀菌能力.75%的酒精溶液常用于手术前、打针、换药、针灸前皮肤脱碘消毒以及机械消毒等.(3)95%的酒精溶液:冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA.用于DNA的粗提取实验.(4)95%的酒精溶液和15%的盐酸等体积混合可用于解离根尖.用于植物根尖分生区有丝分裂的实验观察,作为解离液可以将植物细胞分离开.2、丙酮(酒精):用于提取叶绿体中的色素.使色素在有机溶剂丙酮中溶解,便于溶解.3、层析液:(成分:20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成,也可用93号汽油)可用于色素的层析,即将色素在滤纸上分离开.4、0.1g/mL的柠檬酸钠溶液:与鸡血混合,防凝血.用于DNA的粗提取实验.5、氯化钠溶液:(1)可用于溶解DNA.当氯化钠浓度为2mol/L、 0.015mol/L时DNA的溶解度最高,在氯化钠浓度为0.14 mol/L时,DNA溶解度最高.(2)浓度为0.9%时可作为生理盐水.(3)高浓度食盐:选择培养基,金黄色葡萄球菌可以生存.三、作为培养基的成分1、青霉素:选择培养基,使霉菌,酵母菌可以生存,杀死细菌和放线菌.2、牛肉膏,蛋白胨:微生物培养基中的C源、N源和生长因子,作为培养异养型微生物的原料.3、琼脂:固体培养基成分;生长素生理功能(温特实验) 四、育种中使用的试剂1、胰蛋白酶:可用来分解蛋白质,可用于动物细胞培养时分解组织使组织细胞分散.2、纤维素酶、果胶酶:可用于植物细胞培养时分解组织使组织细胞分散.3、秋水仙素:人工诱导多倍体试剂.用于萌发的种子或幼苗,可使染色体组加倍,原理是可抑制正在分裂的细胞纺锤体的形成.4、氯化钙:增加细菌细胞壁的通透性(用于基因工程的转化,使细胞处于感受态)5、细胞工程促溶剂:(1)PEG(聚乙二醇):动物细胞及植物细胞工程中,用于细胞的融合.(2)灭活(仙台)病毒:动物细胞工程中,用于细胞的融合.6、硫酸二乙酯:生物人工诱变剂,可以导致生物基因突变.7、亚硝酸(盐):(1)化学致癌因子,导致细胞癌变.(2)生物人工诱变剂,可以导致生物基因突变.五、其他1、20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁:用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率.(新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶)2、蔗糖(1)3%的蔗糖溶液、3%的可溶性淀粉溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液:用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验.(2)植物组织培养的人工合成培养基的原料之一.(3)0.3g/mL的蔗糖溶液:相当于30%的蔗糖溶液,比植物细胞液的浓度大,可用于质壁分离实验.3、色素提取:(1)二氧化硅:在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入,可使研磨充分.(2)碳酸钙:研磨绿色叶片时加入,可中和有机酸,防止在研磨时叶绿体中的色素受破坏.4、过氧化氢溶液:(1)用来作为验证酶的高效性实验(2)一定浓度的该溶液可以作为消毒剂,有一定的腐蚀性.
4. 高中生物中实验试剂一共有哪些,其对应的实验是什么,实验中有哪些要注意的,还有其试剂的组成成分是什么
新课标人教版必修1:
1.
斐林试剂:
成分:0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液)。
用法:将斐林试剂甲液和乙液混合,再将混合后的斐林试剂倒入待测液,水浴加热,如待测液中存在还原糖,则呈砖红色。
2.班氏糖定性试剂:
为蓝色溶液。和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。用于尿糖的测定。
3.双缩脲试剂:成分:0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4(乙液)。用法:向待测液中先加入2ml甲液,摇匀,再向其中加入3~4滴乙液,摇匀。如待测中存在蛋白质,则呈现紫色。
4.苏丹Ⅲ:用法:取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中,摇匀。用于检测脂肪。可将脂肪染成橘黄色
(被苏丹Ⅳ染成红色)。
5.二苯胺:用于鉴定DNA。DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色。
6.甲基绿:用于鉴定DNA。DNA遇甲基绿(常温)会被染成蓝绿色。
吡罗红:检测RNA,呈红色
7、50%的酒精溶液:用于洗去苏丹Ⅲ在脂肪上的浮色。
8、70%的酒精溶液:用于医学临床上的消毒灭菌。
9、95%的酒精溶液:冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA
10、15%的盐酸:和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。
11.龙胆紫溶液或醋酸洋红:碱性染料,用于染色体染色时,前者呈深蓝色,后者呈红色
改良苯酚品红染液:检测染色体,红色
健那绿:检测线粒体,专一性让线粒体染色呈蓝绿色
12.20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁:用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。(新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶)
13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液:用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。
14.碘液:用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝。遇糖原变红
15.丙酮:用于提取叶绿体中的色素
16.层析液:(成分:20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成,也可用93号汽油)
可用于色素的层析,即将色素在滤纸上分离开。
17.二氧化硅:在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入,可使研磨充分。
18.碳酸钙:研磨绿色叶片时加入,可中和有机酸,防止在研磨时叶绿体中的色素受破坏。
19、0.3g/mL的蔗糖溶液:相当于30%的蔗糖溶液,比植物细胞液的浓度大,可用于质壁分离实验。
20、0.1g/mL的柠檬酸钠溶液:与鸡血混合,防凝血
21、氯化钠溶液:①可用于溶解DNA。当氯化钠浓度为2mol/L、0.015mol/L时DNA的溶解度最高,在氯化钠浓度为0.14 mol/L时,DNA溶解度最低。②浓度为0.9%时可作为生理盐水。
22、胰蛋白酶:①可用来分解蛋白质。②可用于动物细胞培养时分解组织使组织细胞分散于。
23、秋水仙素:人工诱导多倍体试剂。用于萌发的种子或幼苗,可使染色体组加倍,原理是可抑制正在分裂的细胞纺缍体的形成。
24、氯化钙:增强细菌细胞壁的通透性,可用于基因工程。
25.石磊试剂:检验溶液酸碱性→判断光合速率与呼吸速率快慢的关系;
26、NaHCO3/ Na2CO3 Na2HPO4/ NaH2PO4:酸碱缓冲对→调节PH
27.NaCl:配制生理盐水(0.9%)或用于提取DNA(0.14M或2M)
28.溴麝香草酚蓝水溶液:检测CO2,由蓝变绿再变黄
5. 什么是生化试剂生化试剂有哪些种类,活化凝血液体试剂是生物试剂吗
生化诊断是指利用兰伯-比尔定律,通过各种生化反应,在体外测定各种无机元素、蛋白质和非蛋白质氮、酶、糖类、脂类等生化指标的一种体外诊断方法。常用的检查项目如肝功能、肾功能、血糖、血脂等都属于生化诊断。临床生化诊断试剂与生化分析仪配合使用,运用化学、酶学、免疫学等相关技术原理,对人体的临床生化指标进行诊断。通过试剂与相关待测物的特定反应给出特定的光学信号,由生化仪器记录,并与校准器进行比较,得出相关待测物的水平。生化诊断是目前最常用的体外诊断方法之一,也是国内外最早、最成熟的IVD细分领域。
色谱试剂:色谱试剂是指用于色谱分析、色谱分离和色谱制备的化学试剂。化学试剂有200多种,包括甲醇、乙腈、四氢呋喃、二甲亚砜、叔丁基甲醚、聚乙二醇等。
表面活性剂:表面活性剂是指加入少量能使溶液体系界面状态发生明显变化的物质,包括阳离子表面活性剂和阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、两性表面活性剂、复合表面活性剂和其他表面活性剂。硬脂酸、十二烷基苯磺酸钠是常用的阴离子表面活性剂,烷基葡糖苷(APG)、脂肪酸甘油三酯、脂肪酸山梨醇(pan)、聚山梨醇(Twain)等为非离子表面活性剂。
6. 怎样区分化学试剂与生物试剂
没法区分 化学试剂包含生物试剂的概念。
给化学试剂一个准确的定义还是一件很困难的事情.早期的化学试剂只是指化学分析中为测定物质的组分或组成而使用的纯粹化学药品.后来又被扩展为为实现化学反应而使用的化学药品,而现在的化学试剂所指的化学药品早已超出了这一范畴.有人认为在科学实验中使用的化学药品都可称为化学试剂,因此本人认为凡与实验有关的化学药品都可称为化学试剂.
化学试剂(chemical regent)是进行化学研究、成分分析的相对标准物质,是科技进步的重要条件,广泛用于物质的合成、分离、定性和定量分析,可以说是化学工作者的眼睛,在工厂、学校、医院和研究所的日常工作中,均离不开化学试剂.
对化学试剂,我们习惯上有许多混乱的称谓:
以含量为基础的称谓:标准物质、标准溶液、标准杂质溶液、标准对照品、标准样品、行标试剂、指示试剂、基准物质、基准试剂、化学基准、化学标准、仪器标准、分析试剂、一类试剂、二类试剂、超纯试剂、高纯试剂、当量试剂、医药标准、农药标准、光谱纯、色谱纯、电子纯、钢铁标样、生铁标样、煤标样、矿石标样等……
以用途为基础的称谓:化学试剂、通用试剂、分析试剂、诊断试剂、教学试剂、实验试剂、分离工具、缓冲溶液、指示试剂、生物染色素、感光材料、合成试剂、中间体、化工原料、水质分析、残留农药测试、分子生物学试剂……
以来源为基础的称谓:进口试剂、天然物提取、浸膏、干粉、提取物…… 以习惯为基础的称谓:化学药品、精细化学品、药品、冷偏试剂、特种试剂、一类试剂、二类试剂、三类试剂、小品种试剂……
以性质为基础的称谓:无机试剂、有机试剂、同位素及标记化合物、生化试剂、氨基酸及其衍生物、蛋白质与多肽、核苷酸及其衍生物、单糖与多糖、酶和辅酶、抗生素、维生素、染料及色素、培养基、层析介质、电泳介质、生物缓冲剂……
化学试剂的门类基本上是按照用途或学科性划分的,国外八十年代增添了不少新门类.德国伊默克(E.Merck)公司分为20大类,88小类.美国贝克(J.T.Baker)公司则有75个大类,124个小类.随着科学技术的发展,化学试剂的品种日益繁多,门类划分的趋势越来越细,而且达到品种系列化、配套化.
这里面包括了生物试剂的概念