❶ 如何建立复杂多组分样品的高效液相色谱分析条件
1,为进行分离,可以根据样品的组分将流动相和固定相的组合最佳化.如果熟悉液相色谱,这是非常有利的,但对初学者来说,这是困难的. 2,适用样品范围广,80%的分析对象可借此法分析. 3,可以使用高效的分离柱,易于分离复杂的多组分混合物. 4,把被分离的组分溶解在流动相中,可以全部回收之. 5,可以使用多种非破坏性高灵敏度和选择性的检测器,把几种检测器串联起来,根据其对应特性,获取与定性有关的重要信息. 6,只能检测从色谱柱流出的组分. 7,由于没有通用型高灵敏度检测器,所以在分析未知混合物而没有色谱峰的时候,无法确定其原因是分离条件不合适,还是检测器没有响应. 8,采用尺寸排斥色谱法时,从低分子到高分子的样品全部流出,而且流出顺序是从高分子量开始,故可根据保留容量推测分子量,最适于做未知样品的组成分析. 9,测定精度好.因为注入精度比气相色谱好,故可以用绝对工作曲线. 10,虽然示差折光检测器为通用型检测器,但和气相色谱的热导检测器和氢火焰检测器相比,由于化合物之间的响应不同,所以用峰面积百分数求由多种化合物组成的混合物时问题较多. 11,要限制色谱柱的使用条件（温度、压力、流动相等）.而且与气相色谱相比,性能随时间的变化较大.必须定期用标准品在标准条件下检查色谱柱的性能.若按照不同的样品对象,固定使用色谱柱,对色谱柱的寿命是有利的. 12,制作色谱柱需要特殊装置和专门技能. 13,与气相色谱法相比,由于共存物质对分离的影响小,易于制备分析样品. 14,柱外死体积对色谱柱的性能有重大的综合性影响,而且连接方法依仪器制造厂而异.
❷ 如何建立好药物含量的高效液相色谱分析方法
1，首先必须去进行配制药物溶液前处理的工作。找出该药物的溶解性，探索出该药物的有效溶剂，使该药物能在该溶剂中充分溶解，这是药物溶液配制的前处理必然途径，也是进行高效液相色谱含量分析的首要条件。
2，然后就是根据该药物配制溶液的前处理方法，配制好适当浓度的药物溶液，利用该药物溶液，在紫外-可见分光光度计上进行紫外扫描，找到该药物的最大吸收波长，确立适合的高效液相色谱分析的检测波长。因为它是进行高效液相色谱含量分析的基本条件
3，再是色谱柱的选择：根据药物的极性来选择合适极性的色谱柱类型
4，再是流动相的确立。配制一系列的流动相，考察合适的流动相。
5，再是准确度考察。通过精密度、重复性和重现性的考察来衡量仪器的准确度
6，接着是线性关系考察。配制不同浓度的一系列溶液，进行其溶液的色谱扫描。根据所得的不同浓度下的药物峰面积作为纵坐标（Y轴）、以溶液浓度为横坐标（X轴）进行线性回归，得到其线性图，考察其线性程度，即线性相关系数R=？。考察的目的就是：为了我们在做含量分析时，选择一个合适的浓度进行检测，不至于你配制的待测溶液浓度范围不在线性范围之内，造成测量结果的错误。
7，再是最低检测浓度和检测限的考察。目的是为了考察这种方法的实用性，是否符合痕量分析的要求。
8，再是回收率考察。目的是考察方法的准确性。
9，再是稳定性考察。目的是考察试验方法的时间性，指导我们在分析检测时，建立合适的溶液配制到进样的时间段，保证实验结果的准确性。
10，最后是专属性考察。
❸ （五）生物标志物色谱-质谱分析
1.基本原理
生物标志物是指发现于地质体中的化学性质稳定、碳骨架结构具有明显生物起源特征的有机化合物。如甾类和萜类化合物烷。这类生物标志化合物一般用色谱-质谱（GC-MS）或色谱-质谱-质谱（GC-MS-MS）连用仪分析鉴定，这种连用仪的特点是充分发挥GC的高分离效能和MS的高鉴别能力之特长，这样即使有些化合物分不开，靠质量碎片也能把其鉴别出来。
样品注入GC气化室，气化后随载气进入毛细柱，分离成的单一组分，依次进入MS离子源。当化合物进入离子源时，用能量为70eV或低于70eV的电子束轰击，化合物就会失去一个电子变成等质量的分子离子，不同质量的分子离子或碎片离子（A+、B+、C+等）可在多个轨道中运行，经离子光学系统将其聚焦成具有一定速度的离子束，射入连续改变磁场强度的质量分析器，使具有不同质量的离子按从小到大的顺序进行方向、能量聚焦，并通过收集狭缝射到电子倍增器上，放大后被计算机采集下来，经数据系统处理，即可得到定性用的质谱图或质量碎片图。
2.样品要求
测定甾烷、萜烷的饱和烃组分，应按有机质族组分柱层析分析方法获取；当正构烷烃含量高时，会影响检测效果，应采用尿素络合或分子筛除去。
色谱进样方式为样品直接或用溶剂稀释后分流或无分流进样。质谱离化方式为电子轰击；分辨率大于500 或全质量范围为一个质量单位，扫描方式为全扫描或多离子检测（MID）。
3.地质应用
色谱-质谐分析鉴定所提供的萜烷、甾烷有机地化指标，是目前公认的可靠和有效的有机地化参数，主要用于生油岩评价（类型、成熟度）、油源对比、原油运移、生物降解、原油类型的划分、沉积环境的研究等方面，都取得了明显效果，有效地指导了油气勘探工作。
❹ 如何建立色谱含量测定方法
含量测定分析方法验证
摘要：本文介绍了在对含量测定所用的分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准，以利于判断该分析方法的可行性。
关键词：含量测定 分析方法验证 可接收标准
在进行质量研究的过程中，一项重要的工作就是要对质量标准中所涉及到的分析方法进行方法学验证，以保证所用的分析方法确实能够用于在研药品的质量控制。为规范对各种分析方法的验证要求，我国已于2005年颁布了分析方法验证的指导原则。该指导原则对需要验证的分析方法及验证的具体指标做了比较详细的阐述。但是文中未涉及各具体指标在验证时的可接受标准，国际上已颁布的指导原则中也未发现相关的要求。另一方面，大多数药品研发单位在进行质量研究时，已逐步认识到分析方法验证的必要性与重要性，大都也在按照指导原则的要求进行分析方法验证，但验证完后却因没有一个明确的可接受标准，而难以判断该分析方法是否符合要求。本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求，提出了在对含量测定方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。
1.准确度
该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为80%、100%和120%的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。
可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差(RSD)应不大于2.0%。
2.线性
线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为：
在80%至120%的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，进行线性回归分析。
可接受的标准为：回归线的相关系数(R)不得小于0.998，Y轴截距应在100%响应值的2%以内，响应因子的相对标准差应不大于2.0%。
3.精密度
1)重复性
配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。
2)中间精密度
配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。
4.专属性
可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。
5.检测限
主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。
6.定量限
主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。
7.耐用性
分别考察流动相比例变化±5%、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、流速相对值变化±20%时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离;各条件下的含量数据(n=6)的相对标准差应不大于2.0%。
8、系统适应性
配制6份相同浓度的供试品溶液进行分析，主峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%，主峰保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离，主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。
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❺ 建立生物样品分析方法，对定量分析方法进行验证包括哪些内容
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生物样品定量分析方法验证指导原则
1.
范围
准确测定生物基质（如全血、血清、血浆、尿）中的药物浓度，对于药物和制剂研发非常重要。这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性，或根据毒动学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。因此，必须完整地验证和记录应用的生物分析方法，以获得可靠的结果。
本指导原则提供生物分析方法验证的要求，也涉及非临床或临床试验样品实际分析的基本要求，以及何时可以使用部分验证或交叉验证，来替代完整验证。
生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求。应该在相应的生物样品分析中遵守GLP原则或GCP原则。
2.
生物分析方法验证
2.1
分析方法的完整验证
分析方法验证的主要目的是，证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析物浓度的可靠性。此外，方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。一般应对每个物种和每种基质进行完整验证。当难于获得相同的基质时，可以采用适当基质替代，但要说明理由。
一个生物分析方法的主要特征包括：选择性、定量下限、响应函数和校正范围（标准曲线性能）、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液中储存和处理全过程中的稳定性。
有时可能需要测定多个分析物。这可能涉及两种不同的药物，也可能涉及一个母体药物及其代谢物，或一个药物的对映体或异构体。在这些情况下，验证和分析的原则适用于所有涉及的分析物。