生物取样注意什么

‘壹’ 对食品进行微生物检测取样时，应注意哪些事项

食品微生物检测时,我认为最主要的尽量避免杂菌污染.
体现在操作过程中,也就是,在超净台操作,注意紫外线和臭氧灭菌,与酒精灯保持合适的距离.
倒平板和接种时都要避免其他细菌进入.
还有就是,因为检测的细菌是不一样的,所以对应的培养基也不一样,要注意它的配制和接种方法的区别.
取样时注意量,也要注意细菌侵入.
所用器具与无菌水要严格按照要求进行灭菌。

‘贰’ 环境微生物测序采样指南

随着高通量测序技术飞速发展，人们对微生物的认知也在逐渐深入。凌恩生物每天都会接到全国各类型微生物测序样本，上到山巅土壤，下至深海底泥；有老师研究植物根际和叶内微生物，也有老师关注动物昆虫肠道生理代谢的奥秘。为了得到能够研究的测序结果，规范标准的取样及送样是成功的前提。

在样本送测前，我们要注意以下几点：

1、取样使用的工具及容器必须经过灭菌处理；

2、取样后及时做好标记，记录取样相关信息；

3、样本送测前做好备份，防止意外发生丢失珍贵样本；

4、送测样本使用标准容器承装，在容器上标记清晰，送样不宜过多；

5、寄送时保持低温环境，建议使用干冰配送；

6、可使用凌恩微生态样本保真液，高品质样本是决定高品质研究成果的第一步。

常规土壤类样本取样方法-农田/森林/草原土壤等

(1) 取样方法

按实验设计确定采样范围，取样器具需事先消毒灭菌处理。采样时应去除地表杂质，根据需要挖取相应深度（如5~20 cm）的土壤，置于冰磨拍掘上运至实验室。去除可见杂质，建议过2 mm无菌筛网。同一样方多点样本等量混合均匀后取5~10 g，保存无菌EP管中，进行核酸提取，或-80℃保存备用。若不能自行提取，可置于干冰寄送至公司。

注：建议戴一次瞎核性手套、口罩，进行严格贺敬取样和操作，尽可能减少人为的污染。

根际土壤样本取样方法-作物/蔬菜/草木根系等

（1）作物类（含草地等矮小植物）根际土壤取样方法

a. 采集植物植株，去除根部大块土壤，置于冰上运输至实验室；

b. 晃动根部，去除根部松散的土壤后，使用无菌刷子从根部收集残留土壤；

c. 同一样方多点取样土壤样本等量混合均匀后，液氮速冻，置于-80℃冰箱保存。

（2）林木类根际土壤取样方法

a. 采集地面下 10-20 cm 根际土壤，置于冰上运输至实验室；

b. 过 2-5 mm 孔径无菌筛网；

c. 同一样方多点取样土壤样本等量混合均匀后，液氮速冻，置于-80℃冰箱保存。

若不能自行提取，可置于干冰寄送至公司提取。

注：取样器具请事先消毒灭菌处理。若为真菌根际土壤，请务必尽可能去除菌丝体残留，减少对 DNA/RNA 提取的干扰。

植物表面微生物取样方法

（1）取样方法

依据实验设计，进行样方设置，每一样方进行多点取样，同一样方点等量混匀成一个样本。植物根部组织可以通过摇晃振荡或无菌刷子去除根表粘附土壤。

（2）样本前处理

将植物组织浸没于无菌PBS溶液，180rpm孵育20min；取出植物组织，再次加入无菌PBS溶液，180rpm孵育20min，取出植物组织，再次加入无菌PBS溶液，超声波洗涤10min（参数：160 W，30s/30s），最后取出植物组织至于-80度冰箱保存备用。

将三次洗涤液汇总，过0.2um滤膜（或12000g离心10min，收集沉淀），收集滤膜至于-80度冰箱保存。

植物内部微生物取样方法

（1）依据实验设计，进行样方设置，每一样方进行多点取样，同一样方点等量混匀成一个样本。

（2）对植物组织进行表面消毒操作或者使用上一步“ 植物表面微生物取样”中处理过的植物组织，液氮速冻后，研磨成粉，即可用来进行核酸的提取。

植物组织表面消毒具体操作如下：

无菌水洗涤30s，70%无菌乙醇洗涤2min，2,5% NaClO（含0.1% Tween 80）浸泡5min后转移至70%无菌乙醇浸泡30s，最后使用无菌水洗涤植物组织3次，即视为对植物组织表面进行无菌化。

表面无菌化的植物组织至于-80度冰箱保存备用或进行核酸提取。

植物根表面微生物取样方法

（1）将所研究的物体放在事先灭好的无菌容器当中；

（2）加入PBS缓冲液后进行振荡，使得微生物从物体表面充分的脱落并聚集在PBS缓冲液当中,震荡至少2h以上；

（3）直接提取PBS缓冲液中的微生物或者将缓冲液用滤膜过滤之后再进行DNA的提取。

PBS浓度和PH有要求：浓度是用1x的，PH值是7.4，一般买回来的PBS是10x的，建议稀释到1x。

注意： 建议优先使用超声波洗涤 。

空气样本微生物取样方法

使用空气抽滤机，使空气通过 0.22 μm 滤膜，滤膜上有可见覆盖物（过滤时间越长，收集的空气中的灰尘越多，菌数量越多），收集完成后取下滤膜。滤膜置于冻存管中，液氮速冻，干冰寄送到实验室。

注意：由于样本特殊，微生物含量较少，建议多保管备份保存。

水体样本微生物取样方法

送样量：扩增子直径3-4cm滤膜1-2张；宏基因组直径3-4cm滤膜>=2张；

（1）研究目的进行确定水体的取样深度和范围；

（2）采样后进行滤膜过滤，选择合适孔径的滤膜，对于澄清水体或者略浑浊水体，选用0.22μm或者0.45μm的滤膜，取样体积大于5L；对于浑浊水体，建议先用大孔径的滤膜过滤一遍，再用小孔径的滤膜过滤；

（3）水体泥样的采集提供大于5g样本；

（4）用大体积干冰运输，且要保证我方在收到样品开箱检验时有足够的干冰剩余。

注意：扩增子项目将2-3L水体过滤到1-2张滤膜（0.22或0.45um）后装入到离心管中；宏基因组项目将10L水体过滤到>=2张滤膜（0.22或0.45um）后装入到离心管中。

活性污泥与水体/地表沉积物类样本取样方法

（1）活性污泥

从活性污泥装置中取大于10 ml的悬浮污泥样本（约5-10 g沉降物），保存无菌EP管中，放入液氮或置于冰上，立即运至实验室进行核酸提取，或-80℃保存备用。

注：若液态污泥样本沉降物较少，可适当增加取样量。

（2）水体/地表沉积物

取距离水底/地表0-10 cm（具体按实验需要而定）的沉积物5~10 g，保存无菌取样袋或EP管中，置于冰上运送至实验室进行核酸提取，或-80℃保存备用。若不能自行提取，可置于干冰寄送至公司提取。

‘叁’ 微生物检验时，人员操作应注意哪些

1）保证手部的清洗、消毒：取样前及做样前都要先洗手再消毒。
2）取样要具有代表性（随机样、目的样、综合样）且要标示清楚。
3）取样完毕，不可在车间逗留，要及时将样品放入安全柜，对其外表面进行紫外灯照射消毒。
4）在要求的做样区域进行操作。
5）做样前，要用 75%酒精棉球对样品袋口部进行擦拭消毒再开口。
6）往盐水瓶加样品时，要注意勺子或袋子尽量不接触瓶口。
7）微生物中的稀释，吸管通常不接触液面，都是悬空加液，因为吸管外壁会挂液，造成加入量有误差。
8）微生物检测中，盐水常温即可。不能过热，会将部分微生物烫死；也不能温度太低，不能将样品溶解完全。
9）加入试剂需要充分混合均匀，保证溶液的均一性。
10）倾倒平皿时，要注意瓶口不要接触到平皿；倾倒的培养基要适量，不可以太少，在培养过程中干掉，微生物亦死亡，加入约15mL培养基后，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀。
11）做样完毕，及时放入相应培养箱进行培养，并清理清洁安全柜。

‘肆’ 微生物检验标本的正确采集及注意事项

微生物检验标本的正确采集及注意事项

正确采集临床微生物标本，直接影响到微生物培养鉴定结果。可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗，为临床科学用药和成功的感染控制提供依据，是正确、合理使用抗菌药物，延缓细菌耐药，减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步，也是最重要的一步。下面是我为大家带来的微生物检验标本的正确采集及注意事项的知识，欢迎阅读。

一、 血液标本的采集

1、 采集方法

（1）75%酒精清洁局部皮肤。

（2）待皮肤干后，再用2%—2。5%碘酒从穿刺点中心部位开始消毒，范围不应小于5cm（直径），且不能用手指触摸消毒后的皮肤。

（3）皮肤碘酒干后（约1min），穿刺采集血液，采血量成人5—10ml，婴幼儿1—5ml。

（4）采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。

2、注意事项

（1）怀疑菌血症应尽早采血，体温上升（38。5℃）采血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机。

（2）对已经使用抗菌药物，而又不能停药者，也应在下次用药前采血。切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本，也不能从静脉导管及动脉插管中取血。

（3）培养基与血液之比以10：1为宜，以稀释血液中的抗生素，抗体等杀菌物质;有人主张对接受抗菌药物治疗的病人，培养基与采血量之比可为20：1或大于这个比例。

（4）近年研究表明，将血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。

（5）每例至少采血两次，间隔0。5—1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。

（6）疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人，以肘动脉或股动脉采血为宜，除在发热期采血外，并要多次采血（24h 3—4次）和增加采血量（可增加10ml）。

（7）采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。

（8）如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。

二、骨髓的采集

1、采集方法

在病灶部位或髂前（后）上脊处严格消毒后抽取骨髓1ml，注入血培养瓶内。

2、注意事项

（1）骨髓内含有大量的单核巨噬细胞系统的细胞，因而骨髓培养对伤寒病人的.诊断较血培养优越。

（2）用于怀疑细菌性骨髓炎病人。

三、静脉导管标本的采集

1、采集方法

（1）常规导管部位皮肤消毒。

（2）无菌方法从病人体内拔出静脉导管，剪下导管尖端5cm，放入无菌瓶中。

（3）立即（15min内）送检，避免标本干燥。

2、注意事项

（1）剪下的导管立即接种血平皿，可提高阳性率。

（2）肉汤反复冲洗导管腔内，冲洗液做定量培养。

（3）有人将剪下的导管置肉汤增菌液或培养瓶中，此法不能区分导管感染菌与少量定植菌。

（4）卫生部在《医学感染诊断标准》（试行）（2001年1月3日施行）中规定：导管管尖培养其接种方法应取导管尖端5cm，在血平板表面往返滚动一次。细菌≥15cfu/平板，即为阳性。

四、呼吸道

1、痰标本

（1）采集方法

①清晨起床后用凉开水漱口多次，以除去口腔内大量杂菌，用力咳出肺深部的脓痰，置于清洁干燥容器中送检。

②痰量极少者可用45℃ 3%—10%的氯化钠溶液约25ml雾化。对于咯痰量少的幼儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管，当其咯痰后用无菌棉棒采集标本。

③咳嗽无力或昏迷病人，可用吸痰管经鼻腔或口腔经气管腔内吸引痰液送检。

④气管切开者可以深入透气孔中取痰。

⑤可用支气管镜直接在病灶部位采集高浓度的病原菌。

⑥用无菌导管经鼻腔插入气管镜内，缓慢注入无菌蒸馏水5ml，取出导管。留取患者在3h内咳出的痰液，放入无菌容器中送检。

⑦胃内采痰法。无自觉症状的结核病人。有时可把痰误咽入胃内，因而可采用胃内溶物做结核菌培养，其阳性结果比咯痰高10%左右，该方法于晨起空腹时，把灭菌的胃管，从鼻腔送入胃内，用20ml注射器抽取胃液。

（2）注意事项

①痰标本的采集以晨痰为准，此时患者痰量较多且含菌量也多。

②标本采集后立即送检，若不能及时送检者，可暂存2—8℃冰箱。若晚1—2h接种，会失去苛氧菌，并使得革兰阴性菌过分生长。

③可接受的标本：痰;支气管灌洗液，支气管刷，支气管活检;肺吸出物和肺活检。不能接受的标本：唾液;24h留的痰（结核杆菌培养除外）;拭子。

④ 痰标本的质量评价：（用显微镜筛选）在低倍镜下，检查鳞状上皮细胞，至少10个视野，集中在有白细胞处，合格标本为白细胞与鳞状上皮细胞比例大于2：1。

2、鼻拭子

（1）用湿的拭子（生理盐水）;

（2）需插两个鼻孔;

（3）深入3。3cm左右，转动4—5次;

（4）以上用于诊断金黄色葡萄球菌暴发时的鼻带菌者。

3、咽拭子、口腔拭子

（1）采集方法（到细菌室取专用拭子）

①患者清水漱口后，由检查者将其舌外拉，用棉拭子将咽后壁或悬雍垂的后侧反复擦拭数次;

②化脓性扁桃体炎、口腔念珠菌病时，直接用棉拭子在病灶部位擦拭;

③插入运送培养基中立即送检，防止干燥。

（2）注意事项

①棉拭子应避免触及舌、口腔黏膜和唾液;

②采集标本前数小时不可用消毒药物漱口或接触病灶局部。

五、胃肠道

1、粪便

（1）采集方法

选取脓血、黏液粪便2—3g，液体粪便取絮状物1—2ml。盛于灭菌瓶中或蜡纸盒中及时送检。

（2）注意事项

①标本要采集新鲜的，陈旧标本影响阳性检出率;

②切忌粪尿混合;

③若要分离阿米巴，标本要立即送检并注意保温;

④运送培养基可提高阳性率;

⑤分离难辨梭菌时需选不成形或水样便;

⑥霍乱弧菌、大肠杆菌Ο157感染的腹泻便则为水样便或血性便;

⑦标本在病理早期或治疗前采集;

⑧一般认为用抗菌药三天后，标本培养病原菌阴性。

2、肛拭子

在无法获得粪便的情况下，可用经无菌甘油水或无菌生理盐水湿润的肛拭子插入肛门4—5cm（幼儿2—3cm）处，轻轻旋转擦取直肠表面黏液后取出，置运送培养基中送检。

六、泌尿道

根据卫生部《医学感染诊断标准》（试行）通知，泌尿系统临床诊断为：患者出现尿频、尿急、尿痛等尿路刺激症状，或有下腹触痛、肾区叩痛、伴或不伴发热，并具有下列情况之一：

（1）尿检白细胞男性≥5个/高倍视野，女性≥10个/高倍视野，插导尿管患者应结合尿培养;

（2）临床已诊断为泌尿道感染，或抗菌治疗有效而认定的泌尿道感染。

1、中段尿

（1）采集方法

①女性 采样前用肥皂水或0。1%的高锰酸钾溶液冲洗外阴，用手指阴x分开排尿，弃其前段尿，不终止排尿，留取中段尿10ml于灭菌容器内。

②男性 用肥皂水清洗尿道口，或0。1%的碘伏溶液消毒尿道口，灭菌纱布擦干，上翻包皮，弃其前段尿，不终止排尿，留取中段尿10ml于灭菌容器内。

（2）注意事项

①导尿虽然可以减少污染，但是多次重复导尿可以造成逆行性感染，因此近年来大多采用中段尿。

②女性病人最好采取膀胱截石位由护士采取标本，减少污染。

③采集标本以晨起第一次尿液为佳。

④采集标本后，若不能在1h内送检，暂放4℃冰箱，但不能超过8h。若尿液标本在室温下放置超过2h，即使接种培养结果细菌数≥104 cfu/ml获103cfu/ml，也不能作为诊断依据，应重新留取标本送检。

⑤疑为尿道炎时可将最初3—4ml尿液收集在灭菌容器内。该尿中即使有少数细菌，如反复检查为同一细菌，也应考虑为病原菌。

⑥儿童在多数情况下，仅冲洗外阴是不够的，故采集标本较为困难。如果尿内细菌明显增多，可以高度怀疑为尿路感染，无菌则可否定。

⑦若细菌培养结果为两种或两种以上细菌，需考虑污染可能，建议重新留取标本送检。

⑧尿液中不得加入防腐剂，消毒剂否则影响阳性检出率。

2、膀胱穿刺采集法

避免污染是很困难的，培养结果与病情不符时，或尿厌氧菌培养，或婴幼儿中段尿采集困难时，可以用耻骨上穿刺膀胱内采尿。

3、留置导尿者采集法

拔去闭式引流的集尿袋，弃去导尿管前段尿液，留无污染的膀胱内尿液10ml送检。不可从集尿袋下端留取标本。

七、脑脊液

1、采集方法

由临床医师以无菌方法收集脑脊液3—5ml（细菌1ml，真菌2ml抗酸杆菌2ml，病毒1ml）盛于无菌试管或小瓶中立即送检。

2、注意事项

（1）采集标本后立即送检，因脑膜炎奈瑟菌离体后迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌也易死亡;

（2）疑为上述细菌感染时，应注意保温，不可置冰箱或低温保存。

八、胆汁

1、十二指肠引流法

在无菌操作下，将十二指肠导管吞咽至十二指肠乳头部（距齿65—70cm）时，收集A液（来自总胆管，为橙黄或金黄色），随之注入25%硫酸镁溶液40ml，经1—2min后再采取B液（来自胆囊，为棕黄绿色），随后收取C液（来自肝胆管，为柠檬色），一般认为B液做细菌培养意义较大。

2、胆囊穿刺法

胆囊造影术时，可同时采取胆汁。

3手术采取法

由总胆管、胆囊直接穿刺采取胆汁。

以上采集之标本应立即送检，否则置于4℃冰箱内，采集时需小心，避免被唾液、十二指肠液细菌污染。

九、穿刺液标本

穿刺液包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液。

1、采集方法

由临床医师行穿刺术抽取。胸腹水可收集5—10ml，心包液、关节液收集2—5ml，置于无菌含抗凝剂的试管或小瓶中，充分混匀后，立即送检。抗凝剂10%EDTA二钠盐，标本与抗凝剂之比10：1。

2、注意事项

⑴标本采集应在患者用药之前或停止用药1—2天后进行;

⑵不能立即送检可置4℃冰箱保存;

⑶疑为淋病性关节炎患者的关节液，采集后立即送检，或床旁培养为佳;

⑷不能用棉拭子浸蘸标本送检。

十、脓汁及病灶分泌物

1、伤口

⑴表面伤口拭子采集方法及注意事项

① 仅限于皮肤与皮下组织，包括手术切口、褥疮溃疡、新生儿脐炎、婴儿脓疮病。

②用无菌生理盐水或75%的酒精擦去病灶表面渗液;

③用无菌棉拭子抹去及较深部的脓汁分泌物或组织送检;

④采集褥疮溃疡标本时应采集褥疮边缘的脓性分泌物，拭子放在运送培养基中立即送检，不要采集创口表面的渗液。

⑵伤口、脓肿、窦道、坏疽组织采集方法及注意事项

①闭锁性脓肿用碘酒和酒精消毒皮肤后，用灭菌注射器穿刺抽取全部脓液送检，疑为厌氧菌感染时，排去针管内空气将针头插入灭菌橡胶塞内送检;

②伤口处若有脓及渗出物要用无菌棉签深入各种窦道中擦拭，用小刀刮取，穿刺抽吸或手术切除获得深处伤口标本;

③当创伤出血时，敷有药物在2h以内及烧伤在12h内均不应采集标本，此时获得阳性结果机会甚少。

④采集标本注意观察脓汁及分泌物性状、色泽、气味等。可为培养鉴定提供依据。

⑶烧伤创面

①烧伤创面需要脓性分泌物，焦痂迅速分离变棕黑、黑或紫罗兰色，烧伤边缘水肿。患者发烧>38℃或低体温<36℃，合并低血压。

②用无菌生理盐水冲洗伤口创面。

③由于创面部位不同，细菌种类也不尽相同，要用灭菌棉拭子采集多个部位的炎症区送检。

④采集痂下变黑或变性的不健康区边缘或引流液等做定量培养及组织活检。

2、厌氧伤口拭子

⑴厌氧专用棉棒或玻璃棒触及深部脓汁;

⑵可用注射器抽吸，排去针管内空气将针头插入灭菌橡胶塞内送检;

⑶立即送检，送检过程中必须保持在无氧条件;

⑷不宜做厌氧菌培养的有痰、喉拭子、鼻咽拭子、齿龈拭子、直肠、阴道和宫颈拭子以及回肠、结肠造瘘术的流出物，胃、小肠及大肠内容物等。

3、尿道口分泌物拭子

⑴男性用无菌纱布擦拭和清洗尿道口，然后采取从尿道口溢出的脓性分泌物;

⑵采集前列腺液时，先将尿道、膀胱冲洗，然后从肛门用手指按摩前列腺，促使前列腺液溢出;

⑶女性病人先用灭菌纱布或棉拭子仔细擦拭或清洗尿道口，然后从阴道内诊压迫尿道，使分泌物溢出;

⑷取子宫颈分泌物，先用内窥镜扩张阴道，然后从宫颈口用灭菌棉拭子采取分泌物，尽量避免被阴道宫颈附近正常菌群的污染。

4、蜂窝织炎

⑴用无菌生理盐水或酒精消毒皮肤;

⑵用细针在炎症最显着处穿刺吸引;

⑶抽少量灭菌生理盐水在针管内;

⑷注入无菌试管内送检。

5、组织标本

⑴活体组织采取的微量标本，可直接接种在培养基内;

⑵表浅组织可直接用棉拭子擦拭、小刀刮去;

⑶较大组织块的表面可采用烧灼或浸入沸水中5—10s，然后用灭菌剪刀切开，取其中的脓汁;

⑷深部组织标本可经皮肤穿刺或手术切取送检;

⑸组织标本不可用福尔马x固定;

⑹有时也可将沾有脓汁的最内层敷料放入无菌平皿内送检。

十一、眼标本采集

⑴一般细菌，以无菌棉拭子采集眼分泌物，尤其脓性分泌物;

⑵沙眼衣原体，首先擦去眼结膜上面的分泌物，然后用无菌小刀刮取穹窿部及眼结膜上皮细胞，用链霉素处理后备用;

⑶对于刚治疗或药物冲洗过的患者最好12—24h后采集标本;

⑷对于泪囊炎患者可稍加挤压后以无菌棉拭子采集标本。

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‘伍’ 微生物检验时的注意事项

微生物检验时的注意事项

微生物(microorganism)，包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物等在内的一大类生物群体，个体微小，与人类生活密切相关。广泛涉及健康、医药、工农业、环保等诸多领域。在中国大陆地区的教科书中，均将微生物划分为以下8大类：细菌、病毒、真菌、放线菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体。下面是我为大家带来的微生物检验的注意事项的知识，欢迎阅读。

一、培养基的灭菌及使用

(1)每次配置时，要注意其生产日期是否在保质期内，查看其开瓶日期及瓶口密封性，保证其未变质，并且未吸潮。

(2)培养基配置时，称量要准确，包括盐水的分装要准确。

(3)一定要保证现配制现灭菌，未灭菌的配好培养基不能长时间放置，更不可隔夜。

(4)灭菌时要保证恒温、恒压，同时要保证有效灭菌时间。

(5)灭菌过的培养基要冰箱保存，可保存一周，一般不超过 3 天。而且要遵循“先入先出”原则，先配制的要先使用。

(6)在使用时，要根据当班次的.使用量，用水浴锅先将培养基溶化为液态，然后及时调低水域温度(先化好的可从水域取出，放在水浴锅锅盖上)待用，千万不可长时间使培养基处于高温状态。

(7)做产品微生物检测时，倾倒培养基温度在 45℃左右，不可过烫，避免将菌烫死;也不可过凉，化好的培养基又结块凝固，不便于观察结果。

(8)每瓶培养基均要做空白。

(9)尽量集中做样，避免频繁打开同一瓶培养基瓶塞，增大培养基的污染几率，出现误差结果。

(10)培养基剩余过少时，可先将其倾倒成空白用板。

二、 做样环境的维持

(1)大环境(房间)

1)做样时，窗户和空调要关闭，或用酒精对房间进行喷雾消毒，避免房间内空气流通影响超净台内部环境(最好在有通排风系统的恒温恒湿无菌间进行操作)。

2)如果在原来的原料微生物检测室进行做样，要定期开启紫外灯，对房间进行杀菌。

(2)小环境(超净台)

1)定期清洁初效过滤器，要及时更换。

2)做样前，将超净台内部进行清洁，用 75%酒精进行擦拭消毒，并提前半小时将超净台紫外灯打开，对超净台内部环境进行杀菌。

3)关紫外灯，开风机，调整合适进风量，风量不可过低。

4)每次做样后，要对超净台内部进行清理、清洁，并用 75%酒精进行擦拭消毒。

5)紫外灯根据其使用寿命要及时更换。

6)做样同时，要做上相应菌落检测的环境空白。

7)做样区域的选择：

a、一般在距离超净台外沿的 1/3-2/3 区域进行无菌操作;

b、要在酒精灯火焰的外焰保护区域进行操作。

三、 工器具的洁净度

(1)玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌。

(2)做样用剪刀、勺子等物品要做到做样专用，不可与其它操作器具混用，使用时，先用75%酒精消毒，再采用灼烧方式进行灭菌。

(3)接种针(环)采用灼烧方式进行灭菌，但要注意做样时要先将接种针(环)进行冷却。

四、样品的采集及检测

(1)保证采样器具的无菌性

1)玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌，保证恒温、时间足够(但不可时间过长，导致玻璃器皿易裂纹而报废)。

2)取样筐：使用前要用 75%酒精进行喷洒消毒

3)取样勺、浓奶取样提子：要保证其清洁消毒，清洁后用 75%酒精进行擦拭消毒。

4)取样袋：可现用酒精进行擦拭消毒，再在超净台用紫外灯照射消毒，(包装车间要在传递窗用紫外灯照射消毒)。

5)电子称表面用 75%酒精消毒。

(2)人员操作

1)保证手部的清洗、消毒：取样前及做样前都要先洗手再消毒。

2)取样要具有代表性(随机样、目的样、综合样)且要标示清楚。

3)取样完毕，不可在车间逗留，要及时将样品放入超净台，对其外表面进行紫外灯照射消毒。

4)在要求的做样区域进行操作。

5)做样前，要用 75%酒精棉球对样品袋口部进行擦拭消毒，再开口。

6)往盐水瓶加样品时，要注意勺子或袋子尽量不接触瓶口。

7)样品计量要准确，稀释倍数也要准确(1mL 吸管不允许将管口敲掉)，进行 100 倍稀释时，1mL 吸管要伸入盐水中，不可以将样品管壁流下去，同时要避免将管底部捅破。

8)盐水温度以 40℃左右为宜，不能过热，将部分微生物烫死，也不能温度太低，不能将奶粉溶解完全。

9)进行稀释时，要摇匀，保证溶液的均一性。

10)倾倒平皿时，要注意培养基瓶口不要接触到平皿;倾倒的培养基要适量，不可以太少，在培养过程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右为宜。

11)做大肠菌群样时，要提前将乳糖胆盐培养基培养管按需要量备好，放入超净台对外表面进行紫外线灭菌。

12)接二步时，要注意先将接种针(环)进行冷却，避免出现接不上菌落的情况发生，导致无法判断、确认。

13)做样完毕，及时放入相应培养箱进行培养，并清理清洁超净台。

五、 微生物的培养

(1)在培养过程中，要随时监控培养箱温度，保证其在适宜的温度进行培养。

(2)要按照《微生物检验规范》要求及时观察结果，出现异常，要及时分析原因进行反馈。

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