① 真核基因如何在原核生物中表达 具体步骤
利用PCR技术扩增,连接到带原核启动子的表达载体上,得到阳性克隆就可以用了
② 原核生物如何表达遗传信息
真核生物和原核生物的细胞结构和遗传信息存在明显差异,在基因组结构上,原核生物结构简单,信息量少;真核生物结构复杂,信息量大,在基因表达调控上,虽然二者可以在复制、扩增、基因激活、转录、转录后、翻译和翻译后等多级水平上进行,但转录水平调控是主要的,如何实施调控,真核基因表达调控的环节更多。
③ 原核生物基因在真核生物中直接表达么
原核生物的机体能在基因表达过程的任何阶段进行调控,如调控可在转录阶段、转录后加工阶段和翻译阶段进行.转录的调控主要发生在起始阶段,这样可避免浪费能量合成不必要的转录产物.通常不在转录延伸阶段进行调控,但可在终止阶段进行调控,终止可以防止越过终止子而进行下一个基因的转录.RNA的初级转录产物本身是一个受调控的靶分子,转录物作为一个整体其有效性可以受到调控,例如,它的稳定性可以决定它是否保存下来用于翻译.此外,初级转录产物转变为成熟分子的加工能力可决定最后mRNA分子的组成和功能.在真核细胞中,还可对RNA从核到胞浆中的转运进行调控.但是在细菌中,mRNA只要一合成,就可用于翻译.翻译也像转录一样,在起始阶段和终止阶段进行调控.DNA转录的起始和RNA翻译的起始路线也很相似.
真核生物基因表达的调控要比原核生物复杂得多,特别是高等生物,不仅由多细胞构成,而且具有组织和器官的分化.细胞中由核膜将核和细胞质分开,转录和翻译并不是偶联,而是分别在核和细胞质中进行的,基因组不再是环状或线状近于裸露DNA,而是由多条染色体组成,染色体本身结构是以核小体为单位形成的多极结构,真核生物的个体还存在着复杂的个体发育和分化,因此说真核生物的基因表达调控是多层次的,从DNA到RNA到有功能蛋白质多途径进行调控的.主要的调控途径有如下几个方面:
①DNA和染色体水平上的调控:基因的拷贝数扩增或丢失和基因重排,DNA修饰,在染色体上的位置,染色体结构(包括染色质、异染色质、核小体)都可影响基因表达.
②转录水平上的调控:转录起始的控制和延伸的弱化对mRNA前体的水平都会产生影响.
③转录后RNA加工过程和运送中的调控:真核基因转录出的mRNA前体,要经过加工才能成熟为mRNA,包括切割、拼接、编辑、5`和3`末端修饰等,成熟的mRNA再运出细胞核.
④翻译水平上的调控:5`端前导序列形成茎环结构降低翻译水平或抑制蛋白结合5`端,阻止mRNA的翻译.
⑤翻译后的调控:翻译后产生的蛋白质常常需要修饰和加工如磷酸化、糖基化、切除信号肽及构象形成等,才能成为有活性的蛋白质,可以利用这个过程有选择地激活或灭活某些蛋白质.
⑥mRNA降解的调控:控制mRNA寿命就能控制一定数目的mRNA分子产生蛋白质数量,这种调控是由mRNA 3`端的序列决定的.
④ 如何使基因在原核生物中表达
1.获取目的基因:最简单的是直接从cDNA文库找,不然就要自己用mRNA逆转录出cDNA,然后PCR,电泳检测,回收。
2.酶切和连接:找一个质粒载体,根据载体的说明书选择内切酶,一般是双酶切。把载体和你的目的片段用一样的酶切了,然后混合了连接。
3、转化:找一种工程菌,把它弄成感受态,把你连接好了的重组质粒和菌混了,让质粒钻到菌里面去。
4、检验(筛选培养):看看质粒进到菌里面没有,目的基因连接到了质粒上了没有,一般是蓝白斑+抗生素抗性+电泳。
5、诱导表达:加入诱导剂,等着菌表达
6、检测,看看产物出来没有,量多少、有没有活性,etc。
完了,具体问题具体分析,思路以上。
⑤ 原核生物是如何进行基因表达的
1、Operon操纵子:一个或几个结构基因与一个调节基因和一个操纵基因,加上启动子构成一个操纵单元,这个单元称为操纵子。在操纵子中,结构基因产生mRNA并作为模板合成蛋白质;而调节基因则产生一种阻遏蛋白与操纵基因相互作用;阻遏蛋白与操纵基因结合从而阻碍了结构基因转录成为mRNA;在诱导过程中,诱导物通过与阻遏蛋白相结合而阻止阻遏蛋白与操纵基因结合。 2. CAP:环腺苷酸(cAMP)受体蛋白CRP(cAMP receptor protein ),cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP(cAMP activated protein ) 3.Attenuator弱化子:在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。 4. 魔斑:当细菌生长过程中,遇到氨基酸全面缺乏时,细菌将会产生一个应急反应,停止全部基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸(pppGpp)。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子,而是影响一大批,所以称他们是超级调控子或称为魔斑。 5. 上游启动子元件:是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列,-10区的TATA、-35区的TGACA及增强子,弱化子等