如何用生物素标记小分子

① 生物素标记肽的应用

生物素标记肽可用于蛋白纯化、检测、固化、药物导向、蛋白质结构分析等。

检测与某一多肽相互作用的物质，最简单的方法就是利用此多肽做亲和pull-down实验，然后直接检测结合蛋白。蛋白质体外结合(Pull-down)试验可用于验证蛋白-蛋白相互作用的存在（经由别的研究方法预测过的，如免疫共沉淀）和作为一种初级的筛选试验来识别一些未知的蛋白-蛋白相互作用。通过竞争性阻断结合，合成肽通常被用来验证被假设的蛋白质-蛋白质相互作用。

② 生物素标记的DNA探针用什么方法检测

生物素标记的DNA探针用什么方法检测
以病原微生物DNA或RNA的特异性片段为模板,人工合成的带有放射性或生物素标记的单链DNA片段,可用来快速检测病原体.
怎么检测：
将一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或荧光染料等标记后制成的探针.可与固定在硝酸纤维素膜的DNA或RNA进行互补结合,经放射自显影或其他检测手段就可以判定膜上是否有同源的核酸分子存在.
以细菌为例,目前分子杂交技术用于细菌的分类和菌种鉴定比之G+C百分比值要准确的多,是细菌分类学的一个发展方向.加之分子杂交技术的高敏感性,分子杂交在临床微生物诊断上具有广阔的前景.细菌的基因组大小约5×106bp,约含3000个基因.（各种细菌之间绝大部分DNA是相同的,要获得某细菌特异的核酸探针,通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法,即将细菌DNA切成小片段后分别克隆得到包含基因组的全信息的克隆库.然后用多种其它菌种的DNA作探针来筛选,产生杂交信号的克隆被剔除,最后剩下的不与任何其它细菌杂交的克隆则可能含有该细菌特异性DNA片段.将此重组质粒标记后作探针进一步鉴定,亦可经DNA序列分析鉴定其基因来源和功能.）括号里比较重要!

③ 为什么免疫组化染色ABC法比SP法更灵敏

可以看下面这个示意图：

如果没有生物素，链霉亲和素上带有的HRP酶是有限的，因为两个蛋白都有一定的空间结构，空间位阻可能会导致蛋白的某些生物学功能丧失，所以链霉亲和素能够偶联上的HRP数量受限。但是如果用生物素标记HRP，再把生物素-HRP与链霉亲和素一起孵育，这个时候是两个蛋白被生物素这个小分子连接，一个链霉亲和素可以和4个生物素结合，假设完全理想的状态，二抗的生物素占去一个位点，还有3个位点可以结合带有生物素的HRP，也就是变成了一分子链霉亲和素带有3分子的HRP，酶量增加了，当然灵敏度也就相应的提高了。

④ 怎样用生物素标记dna

先用限制性内切酶在DNA上切出两个粘性末端，然后在DNA连接酶的配合下用与这个粘性末端相配的有标志性的（可以是放射性和荧光性等同位素一般属于放射性）DNA片段标记出来，简单地说就是这样～

⑤ DNA或RNA分子探针要用什么标记

DNA探针的标记方法较成熟，有多种方法可供选择，如缺口平移法、随机引物法、PCR标记法等，能用于同位素和非同位素标记。

DNA探针技术又称分子杂交技术，是利用DNA分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性，对某一特异性DNA序列进行探查的新技术。DNA探针是利用同位素、生物素等标记的特定DNA片断，该片断可大至寄生虫基因组DNA，小至20个碱基。当DNA探针与待测的非标记单链DNA（或RNA）按碱基顺序互补结合时，以氢健将2条单链连接而形成标记DNA-DNA（或标记DNA-RNA）的双链杂交分子。将未配对结合的核苷酸溶解后用检测系统（放射自显影或酶检测等）检测杂交反应结果。由于DNA分子碱基互补的精确性，单连DNA探针仅与样品中变性处理的DNA单链出现配对杂交，由此决定了探针的特异性；用放射性同位素（如32P）或生物素标记探针，使杂交试验同时具有高度的敏感性