即用型微生物平板怎么使用方法

① 生物中接种方法→平板划线法要注意什么

（1）要注意全程无菌操作；

（2）滑动时用力要均匀，切勿将接种环嵌入培养基内；

（3）平板应较硬、较厚、表面干燥；

（4）需要分区的时候，划完一个区后必须烧去接种环上的残菌，待冷却后再划另一个区；

（5）划线的线条宜平行、密集、整齐。

接种是食用菌生产中的关键环节之一，如果接种技术不过关，即会造成杂菌污染，成活率低而前功尽弃。无论是菌种分离、传代还是扩繁，都要在无菌条件下严格按照无菌操作规程进行。

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常用的接种方法

1、三点接种

在研究霉菌形态时常用此法。此法是把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。

2、穿刺接种

在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针，用的培养基一般是半固体培养基。用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。

3、浇混接种

将待接的微生物和45℃左右的固体培养基进行混合，这样菌液就达到稀释的目的，待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。

4、涂布接种

将菌液倒入凝固的平板上面，用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落

5、注射接种

用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。

6、活体接种

活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。

② 微生物研究中的传统平板法是什么方法具体怎么做的

传统的平板法为：稀释混合倒平板法

平板是指经熔化的固体培养基倒入无菌培养皿中,
冷却凝固而成的盛有固体培养基的平皿。该法是先将待分离的含菌样品,
用无菌生理盐水作一系列的稀释(常用十倍稀释法,
稀释倍数要适当),
然后分别取不同稀释液少许
(0.5-1.0ml)于无菌培养皿中,
倾入已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基,
迅速旋摇,
充分混匀。待琼脂凝固后,
即成为可能含菌的琼脂平板。

于恒温箱中倒置培养一定时间后,
在琼脂平板表面或培养基中即可出现分散的单个菌落。

③ 跪求 土壤微生物的测定：涂布平板法 测定细菌、真菌和放线菌的实验步骤（详细）

涂布平板法实验器材 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制 牛肉膏 0.3g
蛋白胨 1g
氯化钠 0.5g
琼脂 2g
自来水 100mL
pH 7.0～7.2 灭菌 1.05kg/cm2，22min
配制具体步骤
1．称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。
3．调pH
在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7．6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。
对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。
4．过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去（本实验无需过滤）。很多都是不需要过滤的。
5．分装
按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图Ⅴ-1。
分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，如图Ⅴ-2。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
6．加塞
培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）。
7．包扎
加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
8．灭菌
将上述培养基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃， 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。
9．搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
10．无菌检查
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。

1．活材料：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）菌剂。
2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（附录三、1）
3．器材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等。
四、实验方法
1．样品稀释液的制备 准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液（图22-1）。
图22-1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样培养
用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。
2．平板接种培养 平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。
（1）混合平板培养法 将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中，同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基(图22-2)，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。
（2）涂抹平板计数法 涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设三个重复）。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀（图22-3），每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。

④ 简述如何利用浇注平板法和涂布平板法分离微生物，这两种方法的适用范围分别是什么

两种办法都是先要做好固体培养基的配制，之后灭菌后备用。
1、先将样品按10稀释法进行系列稀释，用的是无菌水即可。根据样品中微生物数目的多少确定用哪三个连续稀释度，一般先10的负6次方到10的负8次方。
2、涂布法，将灭菌的培养基冷却到摄氏50度左右时，倒入无菌的空平板，冷却凝固后备用；将稀释的样品取1毫升放于凝固的固体培养基表面，之后用无菌的玻璃涂棒分布均匀。
3、浇平板法：将1毫升稀释的样品放于空白的无菌培养皿，之后将冷却到45-50度之间的培养基倒入，轻摇混匀、凝固。
4、待完全凝固后倒置培养，即可获得单一菌落。

适用范围：
浇平板法适用于兼性微生物的培养，涂布法适用于好氧微生物的培养。最好是单细胞微生物，或有孢子或芽孢。