微生物实验室常用灭菌方法有哪些

‘壹’ 灭菌方法分为哪几种类别

灭菌方法分为：

1、热灭菌法

热灭菌法利用高温使微生物细胞内的一切蛋白质变性，酶活性消失，致使细胞死亡。通常有干热、湿热和间歇加热灭菌等法。

2、干热灭菌

把金属器械或洗净的玻璃器皿放入电热烘箱内，在150～170℃下维持1～2小时后，可达到彻底灭菌（包括细菌的芽孢）的目的。灼烧是一种最彻底的干热灭菌法，应用范围仅限于接种环、接种针的灭菌或带病原菌的材料、动物尸体的烧毁等。

3、湿热灭菌

以沸水、蒸气和蒸气加压灭菌。

4、间歇灭菌

间歇灭菌连续3天，每天进行一次蒸气灭菌的方法。此法适用于不能耐 100℃以上温度的物质和一些糖类或蛋白质类物质。一般是在正常大气压下用蒸气灭菌1小时。灭菌温度不超过100℃，不致造成糖类等物质的破坏，而可将间歇培养期间萌发的孢子杀死，从而达到彻底灭菌的目的。

5、辐射灭菌

辐射灭菌在一定条件下利用射线进行灭菌的方法，较常用的有紫外线，其他还有电离辐射。波长在25000～80000纳米之间的激光也有强烈的杀菌能力，以波长26500纳米最有效。辐射灭菌法仅限于某一定材料，因所需设备复杂，难于广泛使用。

6、渗透压灭菌

渗透压灭菌利用高渗透压溶液进行灭菌的方法。在高浓度的食盐或糖溶液中细胞因脱水而发生质壁分离，不能进行正常的新陈代谢，结果导致微生物的死亡。

7、化学试剂灭菌

大多数化学药剂在低浓度下起抑菌作用,高浓度下起杀菌作用。常用5%石炭酸、70%乙醇和乙二醇等。化学灭菌剂必须有挥发性，以便清除灭菌后材料上残余的药物。

‘贰’ 微生物实验室常用的灭菌方法有哪些

常用的灭菌方法主要包括以下三种：干热灭菌；湿热灭菌；紫外灭菌
1.干热灭菌法
1.1灼烧与火焰灭菌：灼烧主要用于接种工具灭菌,在火焰上灼烧即可达灭菌目的,火焰灭菌通常用于无菌操作中试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等实验物品的灭菌,防止管口污染。
1.2干烤灭菌：利用热辐射及干热空气进行灭菌.将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后,在烤箱内加热至160℃,保温2h可完全灭菌.但不宜超过170℃.此外降温过速,骤冷易引起玻璃器皿炸裂.干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密,应有空隙,利于热空气流动,过密,致使温度不均,部分物品灭菌不彻底.
2.湿热灭菌法
通过加压提高蒸汽温度,用高压蒸汽灭菌,温度高,灭菌效果最好.
注意事项：1.完全排除高压灭菌器内的冷空气.有冷空气存在时,在同一表压下所达到的温度值要低,而冷空气排出越少,温度就低得越多.在高压蒸汽灭菌时,为保证达到规定的温度,必须将冷空气完全排除.否则,虽然压力达到,而温度达不到规定的要求,灭菌就不彻底.
3.紫外线
杀菌谱广,但穿透力弱,影响因素多,杀菌效能受到一定限制.
紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关.紫外灯杀菌的温度以20~40℃,相对湿度40%~60%为宜.

‘叁’ 微生物学实验室常用的灭菌方法有哪些

物理方法

1、温度

利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方法。高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活，从而起灭菌作用，低温通常起抑菌作用。

1 干热灭菌法：

a.灼烧灭菌法：利用火焰直接把微生物烧死。此法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，所以使用范围有限，只适合于接种针、环、试管口及不能用的污染物品或实验动物的尸体等的灭菌。

b.干热空气灭菌法：这是实验室中常用的一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至160℃，恒温1小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。

2 湿热灭菌法：

在同样的温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好，这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性。另一方面高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡。

a.巴氏消毒法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在62℃，30分钟即可达到消毒目的。此法为法国微生物学家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。

b.煮沸消毒法：直接将要消毒的物品放入清水中，煮沸15分钟，即可杀死细菌的全部营养和部分芽孢。若在清水中加入1%碳酸钠或2%的石炭酸，则效果更好。此法适用于注射器、毛巾及解剖用具的消毒。

c.间歇灭菌法：上述两种方法在常压下，只能起到消毒作用，而很难做到完全无菌。若采用间歇灭菌的方法，就能杀灭物品中所有的微生物。具体做法是：将待灭菌的物品加热至100℃，15~30分钟，杀死其中的营养体。然后冷却，放入37℃恒温箱中过夜，让残留的芽孢萌发成营养体。第2天再重复上述步骤，三次左右，就可达到灭菌的目的。此法不需加压灭菌锅，适于推广，但操作麻烦，所需时间长。

d. 加压蒸汽灭菌法：这是发酵工业、医疗保健、食品检测和微生物学实验室中最常用的一种灭菌方法。它适用于各种耐热、体积大的培养基的灭菌，也适用于玻璃器皿、工作服等物品的灭菌。

加压蒸汽灭菌是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的，以大量蒸汽使其中压力升高。由于蒸汽压的上升，水的沸点也随之提高。在蒸汽压达到1.055公斤/厘米2时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到121℃。在这种情况下，微生物（包括芽孢）在15~20分钟便会被杀死，而达到灭菌目的。如灭菌的对象是砂土、石蜡油等面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭菌时间。

在加压蒸汽灭菌中，要引起注意的一个问题是，在恒压之前，一定要排尽灭菌锅中的冷空气，否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系，这样会大大降低灭菌效果。

3 影响灭菌的因素：

a.不同的微生物或同种微生物的不同菌龄对高温的敏感性不同。多数微生物的营养体和病毒在50~65℃，10分钟就会被杀死；但各种孢子、特别是芽孢最能抗热，其中抗热性最强的是嗜热脂肪芽孢杆菌，要在121℃，12分钟才被杀死。对同种微生物来讲，幼龄菌比老龄菌对热更敏感。

b.微生物的数量多少显然会影响灭菌的效果，数量越多，热死时间越长。

c.培养基的成分与组成也会影响灭菌效果。一般地讲，蛋白质、糖或脂肪存在，则提高抗热性，pH在7附近，抗热性最强，偏向两极，则抗热能力下降，而不同的盐类可能对灭菌产生不同的影响；固体培养基要比液体培养基灭菌时间长。

04

灭菌对培养基成分的影响：

a.pH值普遍下降。

b.产生混浊或沉淀，这主要是由于一些离子发生化学反应而产生混浊或沉淀。例如Ca+2与PO4-3化合，就会产生磷酸钙沉淀。

c.不少培养基颜色加深。

d.体积和浓度有所变化。

e.营养成分有时受到破坏。

2、辐射

利用辐射进行灭菌消毒，可以避免高温灭菌或化学药剂消毒的缺点，所以应用越来越广，目前主要应用在以下几个方面：

1）接种室、手术室、食品、药物包装室常应用紫外线杀菌。

2）应用β射线作食品表面杀菌，γ射线用于食品内部杀菌。经辐射后的食品，因大量微生物被杀灭，再用冷冻保藏，可使保存期延长。

3、过滤

采用机械方法，设计一种滤孔比细菌还小的筛子，做成各种过滤器。通过过滤，只让液体培养基从筛子中流下，而把各种微生物菌体留在筛子上面，从而达到除菌的目的。这种灭菌方法适用于一些对热不稳定的体积小的液体培养基的灭菌以及气体的灭菌。它的最大优点是不破坏培养基中各种物质的化学成分。但是比细菌还小的病毒仍然能留在液体培养基内，有时会给实验带来一定的麻烦。

二 化学方法

一般化学药剂无法杀死所有的微生物，而只能杀死其中的病原微生物，所以是起消毒剂的作用，而不是灭菌剂。

能迅速杀灭病原微生物的药物，称为消毒剂。能抑制或阻止微生物生长繁殖的药物，称为防腐剂。但是一种化学药物是杀菌还是抑菌，常不易严格区分。消毒剂在低浓度时也能杀菌（如1：1000硫柳汞）。由于消毒防腐剂没有选择性，因此对一切活细胞都有毒性，不仅能杀死或抑制病原微生物，而且对人体组织细胞也有损伤作用，所以只能用于体表、器械、排泄物和周围环境的消毒。

常用的化学消毒剂有：石碳酸、来苏水（甲醛溶液）、氯化汞、碘酒、酒精等。答案来自

‘肆’ 微生物的几种灭菌方法

方法较多，方法有化学试剂灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和过滤除菌等。

1、化学灭菌法是指用化学药品直接作用于微生物而将其杀死的方法。

对微生物具有杀灭作用的化学药品称为杀菌剂，可分为气体灭菌剂和液体灭菌剂。杀菌剂仅对微生物繁殖体有效，不能杀灭芽孢。化学杀菌剂的杀灭效果主要取决于微生物的种类与数量，物体表面的光洁度或多孔性以及杀菌剂的性质等。化学灭菌的目的在于减少微生物的数目，以控制一定的无菌状态。

2、干热灭菌法是指在干燥环境（如火焰或干热空气）进行灭菌的技术。一般有火焰灭菌法和干热空气灭菌法。适用于干燥粉末、凡士林、油脂等。

3、过滤除菌法是用物理阻留的方法将液体或空气的细菌除去，以达到无菌目的。所用的器具是含有微小孔径的滤菌器。主要用于血清、毒素、抗生素等不耐热生物制品及空气的除菌。常用的滤菌器有薄膜滤菌器(0.45μm和0.22μm孔径)、陶瓷滤菌器、石棉滤菌器、烧结玻璃滤菌器等。

(4)微生物实验室常用灭菌方法有哪些扩展阅读：

灭菌的基本要求：

重复使用的诊疗器械、器具和物品，使用后应先清洁，再进行消毒或灭菌。

被朊病毒、气性坏疽及突发不明原因的传染病病原体污染的诊疗器械、器具和物品，应执行WS/T 367第11章的规定。

耐热、耐湿的手术器械，应首选压力蒸汽灭菌，不应采取化学消毒剂浸泡灭菌。

环境与物体表面，一般情况下先清洁，再消毒；当受到患者血液、体液等污染时，先去除污染物，再清洁与消毒。

医疗机构消毒工作中使用的消毒产品应经卫生行政部门批准或符合相应标准技术规范，并应遵循批准使用的范围、方法和注意事项。

‘伍’ 常用的灭菌方法有哪些

常用的灭菌方法有：

1、热灭菌法

热灭菌法利用高温使微生物细胞内的一切蛋白质变性，酶活性消失，致使细胞死亡。通常有干热、湿热和间歇加热灭菌等法。

2、干热灭菌

火焰灼烧法或烘箱内热空气灭菌法称为干热灭菌法。把金属器械或洗净的玻璃器皿放入电热烘箱内，在150～170℃下维持1～2小时后，可达到彻底灭菌（包括细菌的芽孢）的目的。

3、湿热灭菌

因最早由法国微生物学家巴斯德用于果酒消毒，故名。这是一种专用于牛奶、啤酒、果酒或酱油等不宜进行高温灭菌的液态风味食品或调料的低温消毒方法。

灭菌的原则：

重复使用的诊疗器械、器具和物品，使用后应先清洁，再进行消毒或灭菌。被朊病毒、气性坏疽及突发不明原因的传染病病原体污染的诊疗器械、器具和物品，应执行WS/T 367第11章的规定。

耐热、耐湿的手术器械，应首选压力蒸汽灭菌，不应采取化学消毒剂浸泡灭菌。环境与物体表面，一般情况下先清洁，再消毒；当受到患者血液、体液等污染时，先去除污染物，再清洁与消毒。

医疗机构消毒工作中使用的消毒产品应经卫生行政部门批准或符合相应标准技术规范，并应遵循批准使用的范围、方法和注意事项。

以上内容参考：网络—灭菌

‘陆’ 微生物学实验常用的灭菌方法有哪些

一般分为湿热灭菌法和干热灭菌法两种。

一、湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，所以该法的灭菌效率比干热灭菌法高，是最常用的灭菌方法。湿热灭菌法可分为：煮沸灭菌法、巴氏消毒法、高压蒸汽灭菌法、流通蒸汽灭菌法、和间歇蒸汽灭菌法。

（1）煮沸灭菌法：将水煮沸至100摄氏度，保持5-10分钟可杀死细菌繁殖体，保持1-3小时可杀死芽胞。在水中加入百分之一至百分之二的碳酸氢钠时沸点可达105摄氏度，能增强杀菌作用，还可去污防锈。此法适用于食具、刀箭、载玻片及注射器等。

（2）巴氏消毒法：一种低温消毒法，因巴斯德首创而得名。有两种具体方法，一是低温维持法：62摄氏度维持30分钟；二是高温瞬时法：75摄氏度作用15-30秒。该法适用于食品的消毒。

（3）流通蒸气灭菌法：利用常压下的流通蒸汽进行灭菌。

（4）间歇蒸汽灭菌法

（5）高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3摄氏度，维持15-20分钟。

二、干热灭菌法是指在干燥环境（如火焰或干热空气）进行灭菌的技术。一般有火焰灭菌法和干热空气灭菌法。

（1）火焰灭菌法：是指用火焰直接烧灼的灭菌方法。该方法灭菌迅速、可靠、简便，适合于耐火焰材料（如金属、玻璃及瓷器等）物品与用具的灭菌，不适合药品的灭菌。

（2）干热空气灭菌法：是指用高温干热空气灭菌的方法。该法适用于耐高温的玻璃和金属制品以及不允许湿热气体穿透的油脂（如油性软膏机制、注射用油等）和耐高温的粉末化学药品的灭菌，不适合橡胶、塑料及大部分药品的灭菌。

‘柒’ 微生物学实验室常用的灭菌方法有哪些

1 最常用的是高压蒸汽灭菌，属于湿热灭菌；
2 火焰灼烧、高温烘烤等，干热灭菌；
3 化学法灭菌，如福尔马林、次氯酸钠、酒精等；
4 过滤除菌，如细菌过滤器；

‘捌’ 常用6种灭菌方法有哪些，附适用范围

回答
常用6种灭菌方法有干热灭菌法、湿热灭菌法、间歇灭菌法、辐射灭菌法、过滤除菌法和化学试剂灭菌法。干热灭菌法是指在干燥环境(比如火焰或者干热空气)进行灭菌的技术。湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或者流通蒸汽进行灭菌的方法。间歇灭菌法是指利用反复多次的流通蒸汽加热，从而杀灭所有微生物的方法。
一、常用6种灭菌方法有哪些
1、干热灭菌法:是指在干燥环境(比如火焰或者干热空气)进行灭菌的技术。一般有火焰灭菌法和干热空气灭菌法，适用于干燥粉末、凡士林、油脂等。火焰灭菌法是指用火焰直接烧灼的灭菌方法;干热空气灭菌法是指用高温干热空气灭菌的方法。
2、湿热灭菌法:是指用饱和水蒸气、沸水或者流通蒸汽进行灭菌的方法，湿热灭菌法是以高温高压水蒸气为介质，因为蒸汽的潜热大，而且穿透力强，容易使蛋白质变性或者凝固，从而导致微生物的死亡。该方法的灭菌效率比干热灭菌法高，而且还是药物制剂生产过程中比较常用的灭菌方法。
3、间歇灭菌法:是指利用反复多次的流通蒸汽加热，从而杀灭所有微生物。间歇灭菌一般在流动蒸汽的灭菌锅中进行，也可用普通铝锅代替。这种方法多用于明胶、牛乳等物质的灭菌，这类物质在100°C以上的温度下处理比较长时间会被破坏，用间歇灭菌法可以起到杀菌作用，又可以让被处理的物质免遭破坏。
4、辐射灭菌法:是利用电离辐射杀死大多数物质上的微生物的一种有效方法，它们都可以通过特定的方式控制微生物生长或者杀死微生物，比如微波可以通过热产生杀死微生物的作用，该方法可以在常温或者低温下进行，处理过程食品温升很小，这样有利于维持食品的质量;而且辐射过的食品不会留下任何残留物。
5、过滤除菌法:是用物理阻留的方法将液体或空气的细菌除去，从而达到无菌目的，过滤除菌的原理有惯性撞击截留作用、拦截截留作用、布朗扩散截留作用等。
6、化学试剂灭菌法:是指用化学药品直接作用于微生物而将其杀死的方法，该方法可以分为气体灭菌法和液体灭菌法，气体灭菌法是指采用气态杀菌剂进行灭菌的方法，比如臭氧、甲醛等;液体灭菌法是指采用杀菌剂容易如进行消毒的方法。
二、6种灭菌方法的适用范围
1、干热灭菌法:适用于高温下不损坏、不变质、不蒸发物品的灭菌，不耐湿热的器械的灭菌，用于蒸汽或者气体不能穿透物品的灭菌，比如玻璃、油脂、粉剂和金属等制品的消毒灭菌。
2、湿热灭菌法:适用于耐高温、耐湿热物品，如培养基、动物尸体等，比如实验室内常见压力蒸汽灭菌器。
3、间歇灭菌法:适用于不耐高温、热敏感物料和制剂的灭菌。
4、辐射灭菌法:适用于食品、化妆品、药品、日用品、医疗产品和电子塑胶等领域，主要作用是产品消毒灭菌处理，通过射线作用于产品在不拆外包装的前提下可以有效降低或者杀灭产品内部不同类形的微生物。
5、过滤除菌法:适用于血清、毒素、抗生素等不耐热生物制品及空气除菌。
6、化学试剂灭菌法:适用于环境消毒以及不耐加热灭菌的医用器具、设备和设施等的消毒，也用于粉末注射剂。