如何测定恒浊培养基中微生物总数

❶ 微生物计数方法有哪些

测定微生物计数的方法有很多,主要有以下几种：
1.血细胞计数法
将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数.
①此法的缺点是不能区分死菌和活菌.
②对压在小方格界线上的细菌,应当取平均值计数.
③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化
2.稀释涂布平板法
原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落.培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌.
①这一方法常用来统计样品中活菌的数目
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当两个活多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落.因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定.但不适于测定样品中丝状体微生物,例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等.
④此法若不培养成菌落,可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上,经固定染色后在显微镜下计数,这样又称涂片计数法.染色可用台盼蓝,台盼蓝能使死细胞染成蓝色,可分别计数死细胞和活细胞.
3.滤膜法
滤膜法是当样品中菌数很低时,可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器.然后将滤膜干燥、染色,并经处理使膜透明,再在显微镜下计算膜上（或一定面积上）的细菌数.
此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数.例如测定饮用水中大肠杆菌的数目：将已知体积的水过滤后,将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养.在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色,可根据培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数目.
此法也是统计样品中活菌的数目.
4.比浊法
原理是在一定范围内,菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可借助与分光光度计,在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度表示菌量.实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内,否则不准确.
5.显微镜直接计数法
在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法.”这里说的显微镜直接计数,我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数.再如滤膜法也一样,可以有两种情况.
另外,微生物计数法发展迅速,多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目.

❷ 土壤微生物数量的测定方法

取一定重量的土壤，称取1g，置于100ml无菌水中，充分振荡，然后离心，取上清液，就得到土壤浸出液（可以看做土壤中的微生物全部转移至水中）。然后做梯度稀释，取一定稀释度的溶液，涂平板，培养后数菌落数，然后乘上稀释倍数，就可得到1g土壤中该微生物的数量。

例如，你在稀释10的7次方的平板上数出了15个菌落，则1g土壤中微生物数量为1.5×10的8次方个。

❸ 微生物细菌总数测定会用到的所有仪器有什么

一般用 样方法。
需要的仪器有：试管（或者培养皿），滴管，死亡的血细胞（数量已知），转动床（也可手来摇匀），血细胞计数板，显微镜。
原理：将死亡的血细胞（数量已知）全部放入试管与微生物细菌混合，并且摇匀。使其均匀分布。然后取一滴试管液稀释后放入 血细胞计数板。
通过 观察到的血细胞数目：观察到的微生物数目=总血细胞数目：总微生物数目 来计算微生物细菌总数。

❹ 如何测定土壤中特定细菌的数量

显微镜直接计数法和稀释平板计数法是测定微生物数量的常用方法。直接计数法中常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数(图1-3-1)。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。直接计数法所需设备简单，可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征，其缺点是难以计数微小的细菌。这种方法一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。间接计数法最常用的是稀释平板计数法，它是根据微生物的培养特征而设计的计数方法。这种方法在样品中含菌数较少的情形下，也可以完成计数。应用稀释平板计数法计数时，需要将待测样品配制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开。再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内；或是将一定量的稀释液，与溶化后冷却至45℃左右的琼脂培养基混合，倾入无菌培养皿中，摇匀、静置待凝。经过培养后，就由单个微生物生长繁殖形成菌落，这样的一个菌落就代表着一个微生物个体。统计培养基中出现的菌落数，即可推算出检测样品中的活菌数。FOR EXAMPLE:] 土壤中好气性细菌的计数土壤中生活的微生物种类和数量是极其丰富的，这些数量众多的微生物对提高土壤肥力有重要作用。因此，测定土壤中的含菌量可以作为判定土壤肥力的一个重要指标。材料器具土壤样品；牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(附录二)、无菌水；培养皿、移液管、天平、锥形瓶、试管、酒精灯、恒温培养箱、摇床等。活动程序1.制备土壤稀释液取土壤表层5～10 cm 处的土样。准确称取1 g 土样，放入盛有99 mL 无菌水的锥形瓶(250 mL，放有小玻璃珠)中，用手或摇床振荡20 min，即制成102 倍的稀释液。用1 mL无菌移液管，吸取10 2倍稀释液0.5 mL，移入装有4.5 mL无菌水的试管中，配制成103 倍稀释液。用同样的方法可制成稀释倍数为104、105、106 的系列稀释菌液(图1-3-2)。图移液时，要将移液管插入液面，吹吸3 次，每次吸上的液面要高于前一次，让菌液混合均匀并减少稀释中的误差。每配一个稀释度要换用一支移液管。2.取样及倒平板将无菌培养皿编号，依次为104、105、106，每一号码设置三个重复。用无菌移液管三支，分别吸取稀释倍数为104、105、106的土壤稀释液各0.2 mL，注入到相应编号的培养皿中(每个稀释倍数各三个培养皿)。将已灭菌牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化，待冷却至45～50 ℃左右，倾入到无菌培养皿中，每皿约15 mL，轻轻转动培养皿，使土壤稀释液与培养基混合均匀。3.培养将上述接种好的平板培养基冷却后，倒置放入28～30 ℃的恒温培养箱中培养24～36 h，直至长出菌落为止。4. 观察记录将实验中得到的菌落数填入表1-3-1。结果分析1.选取具有合适菌落数的稀释倍数并计数。在计算结果时，从接种的3 个稀释度中选择一个合适稀释倍数，统计出菌落数(图1-3-3)。选择的原则是：过(1) 细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有30～300 个菌落为宜。霉菌以每个培养皿内有10～100 个菌落为宜。(2) 同一稀释倍数各个重复的菌落数相差不太悬殊。2.将统计出的菌落数按下列公式计算，得出每克样品菌数。每克土壤样品菌数= 某稀释倍数的菌落平均数×稀释倍数

❺ 微生物计数方法有哪些

测定微生物计数的方法有很多,主要有以下几种： 1.血细胞计数法 将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数. ①此法的缺点是不能区分死菌和活菌. ②对压在小方格界线上的细菌,应当取平均值计数. ③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化 2.稀释涂布平板法 原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落.培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌. ①这一方法常用来统计样品中活菌的数目 ②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当两个活多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落.因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示. ③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定.但不适于测定样品中丝状体微生物,例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等. ④此法若不培养成菌落,可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上,经固定染色后在显微镜下计数,这样又称涂片计数法.染色可用台盼蓝,台盼蓝能使死细胞染成蓝色,可分别计数死细胞和活细胞. 3.滤膜法 滤膜法是当样品中菌数很低时,可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器.然后将滤膜干燥、染色,并经处理使膜透明,再在显微镜下计算膜上（或一定面积上）的细菌数. 此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数.例如测定饮用水中大肠杆菌的数目：将已知体积的水过滤后,将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养.在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色,可根据培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数目. 此法也是统计样品中活菌的数目. 4.比浊法 原理是在一定范围内,菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可借助与分光光度计,在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度表示菌量.实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内,否则不准确. 5.显微镜直接计数法 在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法.”这里说的显微镜直接计数,我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数.再如滤膜法也一样,可以有两种情况. 另外,微生物计数法发展迅速,多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目.

❻ 如何检测菌落总数

菌落总数检测一般步骤为：

采样 — 样品制备与稀释 — 倒平板 — 涂布平板 — 倒置培养 — 菌落计数 — 计算菌落总数

样品制备，需要对样品进行均质，根据客户需要检测的样品不同。WIGGENS提供不同的均质设备，如均质机，拍打式均质器等；

样品的稀释，国标中采用1:10的十倍稀释方法，SOCOREX提供各种手动精密移液器，瓶口分液器，移液管控制器为液体操作提供了保证。

倒平板，扒敬使用的培养基为含有琼脂的固体培养基。培养基在配备的过程中需要经过煮沸和保温的步骤。WIGGENS红外加热磁力搅拌器，直接使用红外辐射方式进行加热，1L培养基只需要10分钟即春运慎可煮沸，极大节约了客户培养基制备时间。在倒平板之前，需要恒温培养基46±1 ℃， WIGGENS恒温水浴锅，可以为用户提供的温度控制和恒温条件；

涂布平板，培养基在培养皿中冷却成固态之后，将稀释后的样品用移液器取悄顷1mL,滴到培养基表面，用涂布棒涂匀。WIGGENS有专用的培养皿转盘，可以有效的将样品液均匀的涂布在培养基表面。

倒置培养，将涂布完毕的平板，放入恒温培养箱中进行培养，一般培养时间约为48h。WIGGENS恒温培养箱内容积50-140L各种规格的台式及落地式培养箱，先进的设计及数据接口，可以直接通过电脑编程控制及信息处理，非常适合规范化培养要求。

菌落数计算，经过48小时的培养之后，在培养基表面会长出菌斑，每个菌斑代表一个微生物。一般在培养皿中菌落数为30-300个之间，为有效菌落数。低于30个，会因为样本量不足，随机性大；超过300个，会因为菌落数太多，过于密集产生菌斑重叠等现象，不利于准确计数。WIGGENS菌落计数器，是带有非闪烁式环形光源，放大镜，压力传感器，计数笔等，可以让使用者轻松计数。

计算菌落总数，培养皿中的菌落数需要通过公式换算。 WIGGENS菌落计数器，配套软件可以直接通过压力传感器进行培养皿中菌落计数，通过软件内嵌程序直接计算出被检测样品中菌落总数。

❼ 测定水中微生物（包括细菌真菌等）数量的方法

器材及培养

材料和试剂
蒸馏水,自来水,取自儿童公园的湖水,牛肉膏蛋白胨琼脂培养基.
仪器或其他用具
灭菌三角烧瓶,灭菌带玻璃塞瓶,灭菌培养皿,灭菌吸管,灭菌量筒.
研究方法
采用平板菌落记数技术测定水中细菌总数.

水样的采取
自来水
先将自来水水龙头用火焰灼烧3min灭菌,再开放水龙头5min后,以灭菌三角烧瓶接取水样,以待分析.
公园的湖水
应取距水面10~15cm的深层水样,先将灭菌的带玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻过来,除去玻璃
塞,水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中取出,最好立即检查,否则需放入冰箱中保存.
细菌总数的测定

• 自来水
  Step1用灭菌吸管吸取1mL水样,注入灭菌培养皿中.共做两个平皿.
  Step2分别倾注约15mL已溶化并冷却到45e左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基.并立即在桌上做平面
  旋摇,使水样与培养基充分混匀.
  Step3另取一个空的灭菌培养皿,倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL,作对照.
  Step4培养基凝固后,倒置与37e温箱中,培养24h,进行菌落记数.

• 公园的湖水
  Step1稀释水样,取三个灭菌空试管,分别加入9mL灭菌水.取1mL水样注入第一管9mL灭菌水
  内,摇匀,再自第一管取1mL到下一管灭菌水内,如此稀释到第三管,稀释度分别为10-1,10-2,10-3.
  Step2自最后三个稀释度的试管中各取1mL稀释水加入空的灭菌培养皿,每一稀释度共做两个培养皿.
  Step3各倾注15mL已溶化并冷却到45e左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基并立即在桌上摇匀.
  Step4凝固后倒置于37e恒温恒湿培养箱中培养24h.

菌落记数方法
1)计算相同稀释度的平均菌落数.若有大片菌苔生长时,弃用;以无片菌苔生长的培养皿记数.若片状菌
苔大小不到培养皿的一半,其余一半分布均匀,将此一半计数@2.
2)选择平均菌落数在30~300之间的平板.只有一个符合此范围时,以该平均菌落数@稀释倍数.有两
个在30~300之间时,按两者菌落总数比值决定,比值小于2,取平均;比值大于2,取较小的菌落数.
3)若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数@稀释倍数.
4)若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则按稀释度的平均数@倍数.
5)若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,则以最近30或300的平均菌落数@稀释倍数.

微生物的含量能否反应水的营养化程度？

能

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❽ 细菌总数怎么检测

细菌总数检测目前国标规定的方法为平板计数法，其检验方法是：

在玻璃平皿内，接种一毫升水样或祥搭稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中，冷却凝固后在37°C培养24小时，培养基上胡宴旦的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数。

有的国家把培养温度定为35°C或其他温度，也有把培养时间定为48小时的。这裤扰种方法精度高，但耗时长，难以满足实际工作需要。

为了简化检测程序、缩短检测时间，国内外学者进行了大量的快速检测方法的研究，提出了阻抗检测法、Simplate TM全平器计数法、微菌落技术、纸片法等检测方法，取得了一定的成果，但检测时间仍在4 h以上。

本研究在分析了已有研究成果的基础上，提出了在滤膜上染色后，直接计数的细菌总数检测方法，具体步骤为：

用集菌仪进行细菌收集→在膜上进行染色→在油镜下计数→按公式计算出菌液浓度。实验结果表明，该方法与传统的平板培养法无显着性差异，检测时间约1 h，是一种快速的细菌总数检测方法。

(8)如何测定恒浊培养基中微生物总数扩展阅读：

水中通常存在的细菌大致可分为三类：

1、天然水中存在的细菌。普通的是荧光假单孢杆菌、绿脓杆菌，一般认为这类细菌对健康人体是非致病的。

2、土壤细菌。当洪水时期或大雨后地表水中较多。它们在水中生存的时间不长，在水处理过程中容易被去除。腐蚀水管的铁细菌和硫细菌也属此类。

3、肠道细菌。它们生存在温血动物的肠道中，故粪便中大量存在。水体中发现这类细菌，可以认为已受到粪便的污染。致病性肠道细菌有沙门氏杆菌（伤寒和副伤寒菌）、B型炭疽菌、痢疾志贺氏菌和霍乱弧菌等。