㈠ 生物安全柜的适用范围
1、生物安全柜保护对象
样品、操作人员、环境
2、生物安全柜应用领域
A2/B2：组织培养、细胞培养、血液元素分析、QA/QC、遗传基因工程、抗肿瘤药物制剂；
B2：挥发性有毒有害化学物质、微量的放射性物质、有毒粉尘和悬浮物质。
3、主要结构与配置
1、结构：电源开关、送排风速传感器、送排风高效过滤器、风机、紫外灯、保险丝座、不锈钢工作腔、下支架、电气箱、照明、水气端口、污口阀、箱体、操作面板、前窗、集液槽、负压通道、可调地脚、万向脚轮。
2、配置：直流电机、节能模式、显示屏、插座（含备用）、水气阀门、紫外灯预约开启、前窗、全部开启及任意定位升降（上下限报警系统）、侧窗、支架、人机对话功能。
4、生物安全柜工作原理
主要是将柜内空气向外抽吸，使柜内保持负压状态，通过垂直气流来保护工作人员；外界空气经高效空气过滤器( high-efficiency particulate air filter, HEPA过滤器)过滤后进入安全柜内，以避免处理样品被污染；柜内的空气也需经过HEPA过滤器过滤后再排放到大气中，以保护环境。SICOLAB总结八个字“吸入、下降、循环、外排”。
五、生物安全柜的选用
1、一级生物安全柜
一级生物安全柜可保护工作人员和环境而不保护样品。
其气流原理和实验室通风橱基本相同，不同之处在于排气口安装有HEPA过滤器，将外排气流过滤进而防止微生物气溶胶扩散造成污染。
一级生物安全柜本身无风机，依赖外接通风管中的风机带动气流，由于不能保护柜内产品，目前较少使用。
2、二级生物安全柜
二级生物安全柜是目前应用最为广泛的柜型。
按照《中华人民共和国医药行业标准YY0569-2005生物安全柜》中的规定，二级生物安全柜依照入口气流风速、排气方式和循环方式可分为4个级别：A1型，A2型，B1型和B2型。
所有的二级生物安全柜都可提供工作人员、环境和产品的保护。
A1型：
前窗气流速度最小量或测量平均值应至少为0.38m/s。70%气体通过HEPA过滤器再循环至工作区，30%的气体通过排气口过滤排出。
A2型：
前窗气流速度最小量或测量平均值应至少为0.5m/s。70%气体通过HEPA过滤器再循环至工作区，30%的气体通过排气口过滤排出。
二级B型生物安全柜均为连接排气系统的安全柜。连接安全柜排气导管的风机连接紧急 供应电源，目的在断电下仍可保持安全柜负压，以免危险气体泄漏出实验室。其前窗气流速度最小量或测量平均值应至少为0.5m/s(100fpm)。
B1型：
70%气体通过排气口HEPA过滤器排除，30%的气体通过供气口HEPA过滤器再循环至工作区。
B2型：
100%全排型安全柜，无内部循环气流，可同时提供生物性和化学性的安全控制，可以操作挥发性化学品和挥发性核放射物作为添加剂的微生物实验。
3、三级生物安全柜
三级生物安全柜是为生物安全防护等级为4级实验室而设计的，柜体完全气密，工作人员通过连接在柜体的手套进行操作，俗称手套箱(Golvebox)，试验品通过双门的传递箱进出安全柜以确保不受污染，适用于高风险的生物试验，如进行SARS、埃博拉病毒相关实验等。
㈡ 实验室生物安全分区及如何避免交叉污染
防止交叉污染，操作区应与外界分开。
不晓得你的实验室主要研究什么，我现在以微生物实验室分区为例，划分以下三个区域：
一、清洁区
包括办公室、休息室、培养基配制室与试剂储藏室。此区域禁止带人细菌检验标本。
二、操作区
（1）整洁：微生物操作区是各种病原菌相对集中的地方，为了减少粉尘流动，防止交叉污染，操作区应与外界分开。实验室工作人员进入操作区应换鞋，送标本人员不进入操作区，操作区地面用专用拖把每天拖1 次，每周用消毒剂擦洗1 次。每天早上工作前，用紫外线照射30 min ，或每天工作后，用紫外线照射60 min ，对整个操作区进行消毒；下午工作结束后用消毒液消毒工作台面，以保证工作环境的安全清洁。
（2）光线：细菌培养的细小菌落及血清试验凝集颗粒的观察， 都需要有充足的光线。操作区除设置常规照明灯外，还必须安装操作台灯，以保证实验结果的正确判断。
（3）通风：由于各种病原菌集中，空气污浊，实验室要求保持排的生物安全柜中进行。
（4）温度和湿度：由于无菌操作的要求，实验过程中经常使用酒精灯，因此，微生物学实验室不能安装吊扇。为了达到实验所需的适宜温度，尤其是满足某些仪器对温度湿度的要求，实验室应安装空调。
（5）电源：要求提供稳压、恒频的电源；根据仪器设备要求，必要时配备不间断电源。
（6）水源：操作区内须设置水源。用于标本处理（如细菌染色） 的水槽与工作人员洗手用的水槽不能混用。
（7）污染物处理：操作区须备有消毒缸，以处理沾有活菌的玻片等污染物品。检验剩余的标本及使用过的带菌平板、试管均须集中地点安全放置，经消毒灭菌处理后再洗涤或丢弃。
三、无菌区
（1）无菌室应完全封闭，进出无菌室至少要经两道门，中间隔有缓冲间，无菌室与外间设置一个可开闭的窗口，用于传递器具。
（2）无菌室必须保持整洁。工作人员进入无菌室应换专用鞋、专用衣。无菌室使用前须用紫外线消毒30 min ，操作结束后清洁台面，再用紫外线消毒30 min 。定期用乳酸或甲醛熏蒸，彻底消毒。
（3）无菌室仅用于培养基分装等无菌操作，不能进行有菌标本的操作。操作人员操作时应严格关门，并戴好专用的口罩、帽子。
（4）无菌室内应有空气过滤装置，并安装空调。
㈢ 请述如何进行pcr实验室的工作独立分区，pcr实验室分区有哪些要求
要求及功能分区PCR实验室分为四个区域，进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，不同的工作区域使用 不同的工作服（例如不同的颜色）。
工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出，
四区域分别 1.试剂配制区n2.样品处理区n 3.核酸扩增区n 4.产物分析区n 如使用全自动分析仪，区域可适当合并,三四区可合并为扩增产物分析。
各区的功能是：
1.1.1 试剂准备区：扩增试剂的配制、分装和保存。
1.1.2 样品处理区：样品登记、分装；核酸提取、保存和加样。
1.1.3 扩增产物分析区：扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
1.2 扩增前区与扩增后区应严格分开，须使用不同的房间，两区之间最好有一定的间隔。
1.3 使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。
1.4 在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内： 1.4.1 在生物安全柜内操作。
1.4.2 每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。
1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
1.4.4 用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。
设计要求：
PCR实验室可以是分散形式，也可以是组合形式,现要主要是以组合形式为主流。完成一组PCR 实验，通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程，若实验工艺需要，还 应增加样品粉碎过程。
一、分散形式PCR实验室所谓分散形式PCR实验室，是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远，呈分散布置形式。
对于这种布置形式的PCR实验室，由于各个实验之间不易相互干扰，因此无需特殊条件要求。
二、组合形式
所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置，组成独立实验区域 的形式。对于组合形式PCR实验室，由于各个实验间集中布置，容易造成相互干扰，因此，对总体 布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在入口处设缓冲间，以减少室内外空气交换。 试剂配制室及样品处理室宜呈微正压，以防外界含核酸气溶胶的空气进入，造成污染,可以通 过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。
核酸扩增室及产物分析室应呈微负压，以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品，可以通 过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。
在理想情况下，PCR实验室缓冲间内，可设置正压，使室内空气不流向室外，室外空气不流向 室内。
PCR实验室进风由原有中央空调控制，要求将中央空调风口安装到指定定点，且高度为地面铺 装好后2600mm处。 如果使用荧光PCR仪，扩增室和产物分析室可以合并。
若房间进深允许，可设PCR内部专用走廊。需要指出的是在减少室内外空气交换方面，缓冲间 比专用走廊更有意义。 各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流，形成单向流程的保护屏障，避免 实验之间的相互干扰，防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。 实验室的墙体，包括顶棚，应结构牢固、气密性好；
所有阴角宜采用圆弧形线条过渡；墙体内 壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒；地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
主要设备 试剂准备区 仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等，加样器、天 平除了要专用外，还应有定期校准。 试剂分装应在超净台中进行 扩增反应混合液应使用分子 生物学级的，试剂制备好后应有质检：一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。 标本制备区 仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等 扩增区 扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩 增仪需进行校准。并配备UPS电源，以防止由于电压的波动，停电对扩增效果的影响。 分析区 本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等 洁净实验区的缓冲间部分面积不能超过主实验室的八分之一,这是有规定的.
主体结构：主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝，从而解决容易污 染、积尘、不易清扫等问题。
结构牢固，线条简明，美观大方，密封性好。 标准的四区分隔和气压调节：将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增，产物分析四个独立的实验区。整个区域有一个 整体缓冲走廊。
每个独立实验区设置有缓冲区，同时各区通过气压调节，使整个PCR实验过程中试 剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
可打开缓冲区，缓冲区和 PCR 扩增区的排风扇往外排气，在实验区的外墙上和各扇门上 都安装有风量可调的回风口，空气通过回风口向室内换气。
消毒：在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯，供消毒用。
在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯，对实验桌进行局部消毒。 不锈钢传递窗：试剂和标本通过机械连锁不锈钢（不建议使用电子连锁方式）传递窗传递，保证试剂和标本在 传递过程中不受污染（人物分流）。
地面地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面，整体性好。便于进行清扫，耐腐蚀。 照明灯具要选用净化灯具，能达到便于清洗、不积尘的特点。 在建设的过程中应注意： 规范的安装流程和全面的服务流程。
㈣ 如何安全使用生物安全柜
在实验室中使用生物安全柜
1. 位置 空气通过前面开口进入生物安全柜的速度大约为0.45m/s。这样速度的定向气 流是极易受到干扰的，包括人员走近生物安全柜所形成的气流，打开窗户，送 风系统调整以及开关门等都可能造成影响。
因此，最为理想的是，生物安全柜应位于人员活动，物品流动以及可能会扰乱 气流的地方。在安全柜的后方以及每一个侧面要尽可能留有30cm的空间，以利 用对安全柜的维护。在安全柜的上面应留有30-35cm的空间，以便准确测量空 气通过排风过滤器的速度，并便于排风过滤器的更换。
2. 操作人员 生物安全柜如果使用不当，其防护作用就可能大大地受到影响。操作人员在移 动双臂进出安全柜时，需要小心维持前面开口处气流的完整性，双臂应该垂直 地缓慢进出前面的开口。
手和双臂伸入到生物安全柜中等待大约一分钟，以便安全柜调整完毕并且让里 面的空气“扫过”手和双臂的表面以后，才可以开始对物品进行处理。要在开 始实验之前将所有必须的物品置于安全柜内，以尽可能减少双臂进出前面开口 的次数。
BSC
BSC Biological Safety Cabinet
Return Air Grille
Personnel Traffic
Barrier Airflow
BSC BSC
Air Inlet
BSC
BSC
Fig 8. 典型II级生物安全柜的安装
A typical Class II Cabinet Installation
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生物安全和生物安全柜指南
3.物品放置 二级生物安全柜前面的进气格栅不能被纸，仪器设备或其他物品阻挡。放入安 全柜内的物品应采用70%酒精来消除表面污染。可以在消毒剂浸湿的毛巾上进 行实验，以吸收可能溅出的液滴。
所有物品应尽可能地放在工作台后部靠近工作台边缘的位置，并使其在操作中 不会阻挡候补格栅。可产生气溶胶的设备(例如混匀器，离心机等)应靠近安全 柜的后部放置。像有生物危害性的废弃物袋，盛放废弃吸管的盘子以及吸滤瓶 等体积较大的物品，应该放在安全柜内的某一侧。在工作台面上的实验操作应 该按照从清洁区到污染区的方向进行。
耐高压灭菌的生物危害性废弃物袋以及吸管盛放盘不应放在安全柜的外面，否 则在使用这些物品时双臂就必须频繁进出安全柜，这样会干扰安全柜空气屏障 的完整性，从而影响对人员和物品的防护。
4.操作和维护 大多数生物安全柜的设计允许全天24小时工作。研究人员还发现，连续工作有 助于控制实验室中灰尘和颗粒的水平。向房间中排风或通过套管接口与专门的 排风管相连接的一级A1和A2型生物安全柜，在不使用时是可以关闭的。其他如 二级B1和二级B2型生物安全柜，是通过硬管安装的，就必须始终保持空气流动 以维持房间空气的平衡。
在开始工作以前以及完成工作以后，应至少让安全柜工作5分钟来完成“净 化”的过程，应即应留在将污染的空气派出安全柜的时间。
生物安全柜的所有维修工作应该由有资质的专业人员来进行。在生物安全柜操 作中出现的任何故障都应该报告，并应在再次使用之前进行维修。
5.紫外灯 生物安全柜中不需要紫外灯。如果使用紫外灯的话，应该每周进行清洁，以除 去可能影响其杀菌效果的灰尘和污垢。在安全柜重新认证时，要检查紫外线的 强度，以确保有适当的光发射量。房间中有人时一定要关闭紫外灯，以保护眼 睛和皮肤，避免因不慎暴露而造成伤害。
6.明火 在生物安全柜内所形成的几乎没有微生物的环境中，应避免使用明火。使用明 火会对气流产生影响，并且在处理挥发性物品和易燃物品时，也易造成危险。 在对接种环进行灭菌时，可以使用微型燃烧器或电炉，而不应使用明火。
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生物安全和生物安全柜指南
7. 溢出 实验室中要张贴如何处理溢出物的实验室操作规则，每一位使用实验室的成员 都要阅读并理解这些规程。一旦在生物安全柜中发生由生物学危害的物品溢 出时，应在安全柜出于工作状态下立即进行清理。要使用有效的消毒剂，并在 处理过程中尽可能减少气溶胶的生成。所有接触溢出物品的材料都要进行消 毒/或高压灭菌。
8. 认证 在安装是一季每隔一定时间以后，应由有资质的专业人员按照生产商的说明对 每一台生物安全柜的运行性能以及完整性进行认证，以检查其是否符合国家及 国际的性能标准。安全柜防护效果的评估应该包括对安全柜的完整性，HEPA过 滤器的泄漏，向下气流的速度，正面气流的速度，负压/换气次数，气流的烟 雾模式以及警报和互锁系统进行测试。
还可以选择进行漏电，光照度，紫外线强度，噪声水平以及震动性的测试。在 进行这些测试时，检测人员要经过专门的培训，采用专门的技术和仪器设备。 强烈建议由有资质的专业人员来进行测试。
9. 清洁和消毒 由于剩余的培养基可能会使微生物生长繁殖，因此在实验结束时，包括仪器设 备在内的生物安全柜里的所有物品都应清楚表面污染，并移出安全柜。
在每次使用前后，要清除生物安全柜内表面的污染。工作台面和内壁要用消毒 剂进行擦拭，所用的消毒剂要能够杀死安全柜里可能发现的任何微生物。在每 天试验结束时，应擦拭生物安全柜的工作台面，四周以及玻璃的内外侧等部位 来清除表面的污染。在对目标生物体有效时，可以采用漂白剂溶液或70%酒精 来消毒。在使用如漂白剂等腐蚀性消毒剂后，还必须用无菌水再次进行擦拭。
推荐将安全柜一直维持运行状态。如果要关闭的话，则应在关机前运行5分钟 以净化内部的气体。
10. 清除污染 生物安全柜在移动以及更换过滤器之前，必须清除污染。最常用的方法是采用 甲醛蒸汽熏蒸。应该由有资质的专业人员来清除生物安全柜的污染。
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生物安全和生物安全柜指南
11.个体防护装备 在使用生物安全柜时应穿着个体防护服。在进行一级和二级生物安全水平的操 作时，可穿着普通试验服。前面加固处理的反背式试验隔离衣具有更好的防护 效果，应在进行三级和四级生物安全水平（防护服型实验室除外）的操作时使 用。手套应套在隔离衣的外面，可以戴加有松紧带的套袖来保护研究人员的手 腕。有些操作可能还需要戴口罩和安全眼镜。
12.警报器 可以在两种警报器中选择一种来装备生物安全柜。窗式警报器只能装在带有滑 动窗的安全柜上。发出警报时表明操作者将滑动窗移到了不当的位置。处理这 种警报时，只要将滑动窗移到适宜的位置就可以了。气流警报器报警时，表明 安全柜的正常气流模式受到了干扰，操作者或物品当即处于危险状态。当气流 警报响起时，应立刻停止工作，并通知实验室主管。生产商的说明手册中将提 供更详细的资料，在生物安全柜的使用培训中也应包括这一方面的内容。
13.补充资料 选择正确类型的生物安全柜，进行安装并正确使用，同时每年进行认证，这是 一个复杂的程序。强烈推荐在经过良好培训并具有丰富生物安全操作经验的专 家监督下来进行上述工作。该专家应非常熟悉“参考文献”部分中所列出的相 关文献，并且经过了有关生物安全柜各方面的培训。操作者应接受生物安全柜 操作和使用的正规培训。