⑴ 如何验证环境有大量微生物并写出具体方法步骤
空气中微生物的检测
(一)实验目的 (1)了解空气中微生物的分布状况。 (2)比较普通实验室和无菌室空气中存在的微生物的数量和种类。 (3)验证无菌操作法在微生物学实验中的重要性。
(二)实验原理 在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。空气中也不例外。虽然空气不是微生物栖息的良好环境。但由于气流、灰尘和水沫的流动,人和动物的活动等原因,仍有相当数量的微生物存在。当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时,在适温下培养一段时间后,每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。观察大小、形态各异的菌落,就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。本实验通过检测普通实验室和消毒后的无菌室空气中存在的微生物,从而判断无菌室的消毒效果,了解空气中常见的微生物类群。
(三)实验器材 (1)培养基: 1)牛肉膏蛋白胨培养基。 2)马铃薯蔗糖培养基。 (2)器材:无菌平皿若干套,酒精灯,培养箱等。
(四〕实验方法 (1)倒平板:按常法配置上述培养基,分装于三角瓶中,高压灭菌备用。临用前将培养基熔化,冷却至50℃左右,倒平板若干个备用。 (2)检测:先将无菌室的紫外灯打开,照射15min后关闭。打开上述冷凝了的无菌平板的皿盖,让其在无菌室空间和无人走动的普通实验室空间分别暴露Ih后,盖上皿盖。要求每种培养基的平板在每个空间设3个重复。 (3)培养:将细菌培养基平板和真菌培养基平板分别置37℃和28℃的培养箱中倒置培养,1—2d后开始连续观察,注意不同类别的菌落出现的顺序及菌落的大小、形状、颜色、干湿等的变化。
如果是其他环境中的菌株,比如 土壤 植被 动物毛发 生活器具,可以取少量以上样品 在无菌水中振荡半小时,然后取其上清液涂布于无菌平板表面.
⑵ 微生物方法学验证需要三批样品吗
通常情况就是在其他项目进行检验的同时,进行微生物的方法学研究,然后三批样品微生物全检。既然是微生物检查,那就要求样品是在车间生产的,有一定的环境控制条件下生成的样品,普通实验室样品是达不到要求的。
⑶ 微生物计数方法验证需要怎么准备
微生物限度检查方法学验证
1、供试品:XXXXX胶囊(批号:XXXXXX)
2、菌种:
菌落计数用菌种:
(1) 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]
(2) 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]
(3) 大肠埃希菌[CMCC(B)4]
(4) 白色念珠菌[CMCC (F) 98001]
控制菌检查用菌种:
(1) 大肠埃希菌[CMCC(B)4]
(2) 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]
3、培养基:营养肉汤培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷培养基(MUG)。
4、预试验 按照中国药典2005年版微生物限度检查法中常规法及培养基稀释法检验,金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的回收率均小于70%,本品有抑菌作用。
5、细菌、霉菌及酵母菌计数
按照中国药典2005年版微生物限度检查法进行细菌、霉菌及酵母菌计数的方法学验证试验及菌落计数。
5.1菌液制备:
(1) 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤中,35~37℃培养18~24小时,取此培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-5~10-7,使菌数约为50~100cfu/ml。
(2) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中,23~28℃培养24~48小时,取此培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-5~10-7,使菌数约为50~100cfu/ml。
5.2 供试液的制备 取供试品10g,pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,振摇,使呈1:10的供试品储备液。取1:10的供试品储备液 10ml
⑷ 微生物的鉴定方法
鉴定方法很多
1、送到鉴定机构里面,自己只需要准备样品
2、如果自己做鉴定,方法如下:
各种染色方法+镜检
筛选培养基
荧光定量PCR
⑸ 微生物方法检出限应该怎么在书面上书写
结果就写是否符合规定,标准规定项如果简单就直接写出具体的值,如果多就写应符合标准规定
⑹ 微生物定量方法怎么做方法验证
目前注册申请提供微物限度检查验证内容于简略设计够严谨程够规范或者未进行验证等虽进行验证验证重点突能反映试验完整性行性 实际微物限度检查主要考察待测物受微物污染程度检查内容包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查验证应针细菌、霉菌、酵母菌计数控制菌检查进行验证 面别介绍细菌、霉菌、酵母菌计数验证控制菌检查验证内容
⑺ 微生物的菌种鉴定方法与步骤(鉴定到“株”一级)
基本上认可的方法就是随机扩增多态性RAPD
⑻ 微生物的方法确认怎么做
这在不同样本中的确定方法是不同的,在实际工作中各种情况还是很复杂的,也需要比较多的经验来进行判断,并不是一句两句就能说清楚的。
简单说一下:
首先假设在样本中检测到明确为致病微生物的细菌,那么就可以说明这些细菌,很可能是导致疾病的微生物,比如沙门氏菌志贺氏菌,金黄色葡萄球菌等。
在无菌体液中,比如血液,骨髓,脑脊液等检测出来细菌那么也可以明确这些细菌是导致疾病的微生物。
在含有正常菌群的体表或者体腔管道内,贱厨拉菲正常菌群,并且数量比较多的细菌,那么这种细菌可能也是致病微生物。