❶ 如何设计sybrgreen法荧光定量pcr引物
引物 荧光定量PCR 是利用荧光定量PCR 仪(如ABI 7500、stepone、ROChe LightCycler、Bio-Rad CFX96 等)通过实时追踪 PCR 每一步循环的荧光信号 值来达到对起始模板量的定量分析。一次成功的荧光定量 PCR 反应除了需要稳 定的仪器、优质的 Taq 酶、比较好的模板质量,更需要高质量的引物对。想要 得要高质量的引物对的前提是引物的设计必须要精益求精。下面我们以人IL6 因为例(以人IL6基因mRNA 序列作为模板设计引物),给大家讲解如何进行高 质量的引物设计。 (1)利用 NCBI 数据库,查询基因的序列。登录 NCBI 官方主页: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/。在栏目项中选择“Gene”,关键词输入“IL6 homo”,具体如下所示,点击“Search”。(2)结果如下,一般第一条基因即为所要查询的基因,这里需要注意“Aliases” 一栏,因为很多基因有很多别名,在查询时需要注意。明确基因后,直接点击 ,进入人IL6 基因的主页。 上海捷瑞生物工程有限公司(3)进入人 IL6 基因的主页后,往下拉动网页,看到如下界面。由于我们设计 引物的模板是mRNA,所以我们要找到该基因的转录本信息。点击“reference sequence details”。 (4)得到如下界面,我们看到,人IL6 基因在NCBI 里的记录是2 个转录本, 我们在设计引物时,除非需要检测某个特定的转录本,一般的做法是将该基因所 有的转录本序列进行比对分析,找到他们共有的序列区域,选择该共有区域作为 模板设计引物,这样设计的引物就能尽可能的扩增出该基因的所有mRNA 信息。 针对IL6 基因,我们分别点击“NM_000600.4”和“NM_001318095.1”打 开这两个转录本信息。 上海捷瑞生物工程有限公司(5)我们看到,人IL6 基因的两个转录本序列大小不一样,分别为1197bp 1006bp。我们将这两条mRNA序列复制到比对软件(如BIOEDIT 用软件对这两条序列进行比对分析。(6)比对结果如下,从比对结果看出,这两条序列前后均一致,只有转录本2 在141-331bp 处发生了缺失,我们选择共有区域331bp-1197bp 的序列作为 上海捷瑞生物工程有限公司模板设计引物。 (7)将这段共有序列复制到引物设计软件中,引物设计的软件很多,比如 Primer premier6.0、Oligo7.37、在线Primer3、Beacon Designer、在线NCBI Primer-BLAST 等。不同的引物设计软件的工作原理大同小异,基本都具备引物 设计的基本原则(后面列出),但是对引物Tm值的计算结果不同的软件可能有 差异,这主要跟计算方法有关。捷瑞生物提供免费的引物设计服务,所使用的设 计软件是自主开发,并自主运行ePCR(电子PCR),具备引物BLAST 功能,尽 量选择最优化的引物对。下面以在线NCBI Primer-BLAST 为例,说明引物的设 计过程。 (8)打开在线NCBI Primer-BLAST 。将序列复制到制定的位置,如下图。在“PCR proct size”选择 Min“80”;Max“250”(荧光定量PCR 产物的大小尽量不要很大,保证PCR 扩增的效率)。在“Database”一栏选择mRNA 数据库(一般默认为Refseq mRNA)。在“Organism”一栏选择物种是人(一般默认为Homo sapiens)。 一切设置好后,点击“Get Primers”即可。 上海捷瑞生物工程有限公司(9)打开后会出现以下选择项,需要观察这段序列是否属于所要设计的基因序 列,这里直接点击“Submit”即可。 (10)得到如下结果,图中给出所设计的引物的上下游引物位置;具体的某一 对引物的参数;该对引物的ePCR 结果等。考察一对引物质量是否理论上优异, 需要看如下几个方面:引物Tm值一致,尽量在60左右;引物尽量无发卡结 构二聚体等;ePCR 产物尽量单一,尽量无非特异性产物等。 上海捷瑞生物工程有限公司(11)至此,引物设计的工作就结束了,接下来就是将设计的引物序列发送到 引物合成公司合成,在拿到引物成品后,按照仪器和相关试剂盒说明书做预实验, 调试引物的质量。理论上,选择再优的引物对,只有且只能通过真实的实验验证, 才能100%确定该对引物是否能用。在做荧光定量P CR 实验时,对引物扩增效 率的测试非常的重要,这块后续我们再具体探讨。 (12)荧光定量PCR 引物设计的一般原则: PCR产物的长度在70-300bp 之间,避免产物太长导致PCR 扩增效率降低, 影响定量结果; 引物设计的区域尽量选择在mRNA的3’段,尽量保证扩增的产物为该基因 所表达的全部mRNA 信息; 如果一个基因有很多转录本,尽量选择他们的共有序列为模板来设计引物,保证扩增产物的稳定性; 引物尽量避免发卡结构、二聚体结构、非特异性扩增产物、引物Tm值不一致、引物序列中有连续4 个碱基以上的Poly 结构等等; 总之,理论上再好的引物对,只有通过真实的实验验证才能判断其是否能用、好用。
❷ 南京有没有做的比较好的实验外包的公司
南京英瀚斯生物不错的,有实验室,还能参与实验,做的还比较全
❸ 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司怎么样
简介:苏州康宁杰瑞生物科技有限公司由特聘专家,徐霆博士2009年四月归国创建。苏州研发中心共6000余平方米。已经汇聚百余位高端人才,并成立博士后工作站;与东南大学成立校企共建技术中心,中科院上海药物所形成生物大分子药物战略合作,与美国Thermo公司合作建立技术平台。研发团队中博士18人,具有海外经历的有10余人,硕士60余人。研发中心硬件方面前后共投入3亿元人民币,能够完成从抗体/蛋白药物早期筛选和工程化、细胞株构建和小试工艺、到中试放大和临床试验用药的生产全部流程。公司的分析质控平台可以自主完成生物大分子药物的全面深度表征。早期工艺开发平台包括50L,130L,250L的哺乳动物细胞生产线和100L的原核生产线。中试车间符合CFDA、EMA和FDA的cGMP标准,由包括4条250L,2条1000L哺乳动物细胞生产线的原液车间和6000瓶/小时的无菌制剂灌装车间组成。动物实验中心可以完成创新大分子药物药效,药理,药代,药动的早期评判。公司在2011年和施慧达药业集团形成战略合作。合作内容包括引入资金快速发展苏州的研发中心;在吉林长春筹建康宁杰瑞(吉林)大分子药物生产基地,建设符合CFDA,EMA和FDAcGMP标准的的厂房,一期拟投入10亿元人民币;逐步整合施惠达药业遍布全国的销售网络,为单抗与蛋白新药上市做好准备,同时积极开拓国外市场,参与国际竞争。2011年,康宁杰瑞和肿瘤免疫领域的国际着名学者共同成立丁孚靶点生物技术公司,专注肿瘤免疫治疗。
法定代表人:徐霆
成立时间:2008-11-06
注册资本:15000万人民币
工商注册号:320594000126820
企业类型:有限责任公司(自然人投资或控股)
公司地址:苏州工业园区星湖街218号C23
❹ 上海捷锐科技有限公司怎么样
简介:上海捷锐科技有限公司于2014年6月13日在松江市监局登记成立。法定代表人陈佩妤,公司经营范围包括从事生物医药科技领域内的技术开发、技术转让等。
法定代表人:陈佩妤
成立时间:2014-06-13
注册资本:5000万人民币
工商注册号:310117003138160
企业类型:有限责任公司(外商投资企业法人独资)
公司地址:上海市松江区小昆山镇广富林路4855弄107号202
❺ 请教基因克隆连接载体PTG-19T的精确大小
2880bp
❻ 上海捷瑞生物工程有限公司 待遇怎么样
公司人事会修改你的学历,少交金,女同事怀孕期间,想进各种办法赶你走,你问问里面员工就知道是不是真的了。
❼ 生物工程专业可以去那些企业实习 具体的公司名字!!
摘要 你好,可以应聘上海维普生物科技有限公司、上海捷瑞生物工程有限公司,简称捷瑞生物上海市高新技术企业、上海生物制品研究所有限责任公司实习。还有上海天伟生物制药有限公司(地址 : 上海市闵行区金都路4258号,电话 : 021-54427100)等公司。