捷瑞生物怎么样

㈠ 上海捷瑞生物工程有限公司 待遇怎么样

公司人事会修改你的学历，少交金，女同事怀孕期间，想进各种办法赶你走，你问问里面员工就知道是不是真的了。

㈡ 如何设计sybrgreen法荧光定量pcr引物

引物 荧光定量PCR 是利用荧光定量PCR 仪（如ABI 7500、stepone、ROChe LightCycler、Bio-Rad CFX96 等）通过实时追踪 PCR 每一步循环的荧光信号 值来达到对起始模板量的定量分析。一次成功的荧光定量 PCR 反应除了需要稳 定的仪器、优质的 Taq 酶、比较好的模板质量，更需要高质量的引物对。想要 得要高质量的引物对的前提是引物的设计必须要精益求精。下面我们以人IL6 因为例（以人IL6基因mRNA 序列作为模板设计引物），给大家讲解如何进行高 质量的引物设计。 （1）利用 NCBI 数据库，查询基因的序列。登录 NCBI 官方主页： http://www.ncbi.nlm.nih.gov/。在栏目项中选择“Gene”，关键词输入“IL6 homo”，具体如下所示，点击“Search”。（2）结果如下，一般第一条基因即为所要查询的基因，这里需要注意“Aliases” 一栏，因为很多基因有很多别名，在查询时需要注意。明确基因后，直接点击 ，进入人IL6 基因的主页。 上海捷瑞生物工程有限公司（3）进入人 IL6 基因的主页后，往下拉动网页，看到如下界面。由于我们设计 引物的模板是mRNA，所以我们要找到该基因的转录本信息。点击“reference sequence details”。 （4）得到如下界面，我们看到，人IL6 基因在NCBI 里的记录是2 个转录本， 我们在设计引物时，除非需要检测某个特定的转录本，一般的做法是将该基因所 有的转录本序列进行比对分析，找到他们共有的序列区域，选择该共有区域作为 模板设计引物，这样设计的引物就能尽可能的扩增出该基因的所有mRNA 信息。 针对IL6 基因，我们分别点击“NM_000600.4”和“NM_001318095.1”打 开这两个转录本信息。 上海捷瑞生物工程有限公司（5）我们看到，人IL6 基因的两个转录本序列大小不一样，分别为1197bp 1006bp。我们将这两条mRNA序列复制到比对软件（如BIOEDIT 用软件对这两条序列进行比对分析。（6）比对结果如下，从比对结果看出，这两条序列前后均一致，只有转录本2 在141-331bp 处发生了缺失，我们选择共有区域331bp-1197bp 的序列作为 上海捷瑞生物工程有限公司模板设计引物。 （7）将这段共有序列复制到引物设计软件中，引物设计的软件很多，比如 Primer premier6.0、Oligo7.37、在线Primer3、Beacon Designer、在线NCBI Primer-BLAST 等。不同的引物设计软件的工作原理大同小异，基本都具备引物 设计的基本原则（后面列出），但是对引物Tm值的计算结果不同的软件可能有 差异，这主要跟计算方法有关。捷瑞生物提供免费的引物设计服务，所使用的设 计软件是自主开发，并自主运行ePCR（电子PCR），具备引物BLAST 功能，尽 量选择最优化的引物对。下面以在线NCBI Primer-BLAST 为例，说明引物的设 计过程。 （8）打开在线NCBI Primer-BLAST 。将序列复制到制定的位置，如下图。在“PCR proct size”选择 Min“80”；Max“250”（荧光定量PCR 产物的大小尽量不要很大，保证PCR 扩增的效率）。在“Database”一栏选择mRNA 数据库（一般默认为Refseq mRNA）。在“Organism”一栏选择物种是人（一般默认为Homo sapiens）。 一切设置好后，点击“Get Primers”即可。 上海捷瑞生物工程有限公司（9）打开后会出现以下选择项，需要观察这段序列是否属于所要设计的基因序 列，这里直接点击“Submit”即可。 （10）得到如下结果，图中给出所设计的引物的上下游引物位置；具体的某一 对引物的参数；该对引物的ePCR 结果等。考察一对引物质量是否理论上优异， 需要看如下几个方面：引物Tm值一致，尽量在60左右；引物尽量无发卡结 构二聚体等；ePCR 产物尽量单一，尽量无非特异性产物等。 上海捷瑞生物工程有限公司（11）至此，引物设计的工作就结束了，接下来就是将设计的引物序列发送到 引物合成公司合成，在拿到引物成品后，按照仪器和相关试剂盒说明书做预实验， 调试引物的质量。理论上，选择再优的引物对，只有且只能通过真实的实验验证， 才能100%确定该对引物是否能用。在做荧光定量P CR 实验时，对引物扩增效 率的测试非常的重要，这块后续我们再具体探讨。 （12）荧光定量PCR 引物设计的一般原则： PCR产物的长度在70-300bp 之间，避免产物太长导致PCR 扩增效率降低， 影响定量结果； 引物设计的区域尽量选择在mRNA的3’段，尽量保证扩增的产物为该基因 所表达的全部mRNA 信息； 如果一个基因有很多转录本，尽量选择他们的共有序列为模板来设计引物，保证扩增产物的稳定性； 引物尽量避免发卡结构、二聚体结构、非特异性扩增产物、引物Tm值不一致、引物序列中有连续4 个碱基以上的Poly 结构等等； 总之，理论上再好的引物对，只有通过真实的实验验证才能判断其是否能用、好用。

㈢ 南京有没有做的比较好的实验外包的公司

南京英瀚斯生物不错的，有实验室，还能参与实验，做的还比较全