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微生物方法证实如何做加标

发布时间:2022-05-18 23:09:25

㈠ 二氧化硫实验中如何做加标

环境监测中的各项实验,都有进行加标回收的需要。加标回收是质控的一个具体手段,与其等效的还有盲样考核,标样考核,平行双样等 一般来说,在考核实验员操作能力的时候使用标样或者盲样,如果考核较严格,就加上加标回收。

微生物方法学验证验证结果怎么填写

微生物限度检查方法学验证

1、供试品:XXXXX胶囊(批号:XXXXXX)

2、菌种:

菌落计数用菌种:

(1) 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]

(2) 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]

(3) 大肠埃希菌[CMCC(B)4]

(4) 白色念珠菌[CMCC (F) 98001]

控制菌检查用菌种:

(1) 大肠埃希菌[CMCC(B)4]

(2) 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]

3、培养基:营养肉汤培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷培养基(MUG)。

4、预试验 按照中国药典2005年版微生物限度检查法中常规法及培养基稀释法检验,金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的回收率均小于70%,本品有抑菌作用。

5、细菌、霉菌及酵母菌计数

按照中国药典2005年版微生物限度检查法进行细菌、霉菌及酵母菌计数的方法学验证试验及菌落计数。

5.1菌液制备:

(1) 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤中,35~37℃培养18~24小时,取此培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-5~10-7,使菌数约为50~100cfu/ml。

(2) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中,23~28℃培养24~48小时,取此培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-5~10-7,使菌数约为50~100cfu/ml。

5.2 供试液的制备 取供试品10g,pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,振摇,使呈1:10的供试品储备液。取1:10的供试品储备液 10ml

㈢ 原子吸收测CU如何做加标试验回收率怎么算

最近实验室搞内部质控,火焰法测CU,
样品浓度测得为0.013mg/L,
取10mL浓度为10.0ug/mL标准液于50mL容量瓶中,用待测样品定容至刻度,加标二次平行结果测得为2.004mg/L,
报告结果为1.991mg/L

㈣ 微生物计数方法有哪些我想知道详细的操作步骤

微生物的显微直接计数法

一、实验目的
了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法,掌握显微镜下直接计数的技能。
二、实验原理
测定微生物细胞数量的方法很多,通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质,常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petrof Hausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜,计数板下部的细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区(图21-1),计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm,则计数区的面积为l mm2,每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后,计数区的高度为0.1mm,所以每个计数区的体积为0.1mm3,每个小方格的体积为1/4000mm3。
使用血球计数板计数时,先要测定每个小方格中微生物的数量,再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。
已知:1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3
所以:1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格,即系数K=4×106 。
因此:每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数(N)×系数(K)×菌液稀释倍数(d)
三、实验器材
1.活材料:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)斜面或培养液。
2.器材:显微镜、血球计数板、盖玻片(22mm×22mm)、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。
四、实验方法
1.视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释(斜面一般稀释到10-2),以每小格的菌数可数为度。
2.取洁净的血球计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片。
3.将酵母菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴(不宜过多),让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上,不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后,造成计数区深度的升高。然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。4.静置片刻,将血球计数板置载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近,观察时应减弱光照的强度。
5.计数时若计数区是由16个大方格组成,按对角线方位,数左上、左下、右上、右下的4个大方格(即100小格)的菌数。如果是25个大方格组成的计数区,除数上述四个大方格外,还需数中央l个大方格的菌数(即80个小格)。如菌体位于大方格的双线上,计数时则数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差。
6.对于出芽的酵母菌,芽体达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2—3次(每次数值不应相差过大,否则应重新操作),求出每一个小格中细胞平均数(N),按公式计算出每ml(g)菌悬液所含酵母菌细胞数量。
7.测数完毕,取下盖玻片,用水将血球计数板冲洗干净,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干,放入盒内保存。
五、实验作业:
将实验结果填入下表中:
计数次数 每个大方格菌数 稀 释
倍 数 试管斜面中的总菌数 平均值
1 2 3 4 5
第一次
第二次

㈤ 微生物的鉴定方法

鉴定方法很多

1、送到鉴定机构里面,自己只需要准备样品

2、如果自己做鉴定,方法如下:
各种染色方法+镜检
筛选培养基
荧光定量PCR

㈥ 微生物的方法确认怎么做

这在不同样本中的确定方法是不同的,在实际工作中各种情况还是很复杂的,也需要比较多的经验来进行判断,并不是一句两句就能说清楚的。

简单说一下:
首先假设在样本中检测到明确为致病微生物的细菌,那么就可以说明这些细菌,很可能是导致疾病的微生物,比如沙门氏菌志贺氏菌,金黄色葡萄球菌等。
在无菌体液中,比如血液,骨髓,脑脊液等检测出来细菌那么也可以明确这些细菌是导致疾病的微生物。
在含有正常菌群的体表或者体腔管道内,贱厨拉菲正常菌群,并且数量比较多的细菌,那么这种细菌可能也是致病微生物。

㈦ PCR鉴定微生物,请问一下具体的步骤是什么

PCR即聚合酶链式反应是常用的快速扩增基因的方法。
通过PCR可以鉴定到种
具体步骤:
1将培养过的微生物(最好是青年时代的)提取基因组(这步不清楚再问我)
2 通过PCR扩增,
3 测定基因序列
4 和已知的基因图库上的序列比较,就可以确定是哪一个种
不过现在一般不采用基因组来比较,这样工程量太大。比较16SRNA是比较常用的方法。相对简单,准确度高。

㈧ 做微生物实验的步骤

操作步骤
1.涂片将培养14—16小时的枯草芽孢杆菌和培养24小时的大肠杆菌分别作涂片(注意涂片切不可过于浓厚),干燥、固定。固定时通过火焰1—2次即可,不可过热,以载玻片不烫手为宜。
2.染色
(1)初染
加草酸铵结晶紫一滴,约一分钟,水洗。
(2)媒染
滴加碘液冲去残水,并覆盖约一分钟,水洗。
(3)脱色
将载玻片上面的水甩净,并衬以白背景,用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止,约20—30秒钟,立即用水冲净酒精。
(4)复染
用番红液染1—2分钟,水洗。
(5)镜检
干燥后,置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色,革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准,过于密集的细菌,常常呈假阳性。
(6)同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片,作革兰氏染色对比。
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度,如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌。此外,菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈阴性反应。

㈨ 列举微生物鉴定的方法至少三种

楼上,反正你要提DNA了做PCR了,还看毛的形态啊?

医院用的最多的鉴定方法是API或者其他类似的试验条,通过观察对不同底物利用的情况进行鉴定。
条件好一点的医疗或者卫生机构么可以用MIDI系统这样的化学分类系统进行鉴定。
实验室里么,提DNA做PCR比对序列么最常见。

当然,都是大致初步鉴别,不是学术性的全面鉴定。

㈩ 微生物定量方法怎么做方法验证

目前注册申请提供微物限度检查验证内容于简略设计够严谨程够规范或者未进行验证等虽进行验证验证重点突能反映试验完整性行性 实际微物限度检查主要考察待测物受微物污染程度检查内容包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查验证应针细菌、霉菌、酵母菌计数控制菌检查进行验证 面别介绍细菌、霉菌、酵母菌计数验证控制菌检查验证内容

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