‘壹’ 分离纯化微生物的方法有哪些各方法适用分离什么菌种
主要有:划线法、倒平板法、涂布法,根据分离的菌种选择不同的培养基。
稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离法、选择培养分离法等。其中前三种方法最为常用,不需要特殊的仪器设备,分离纯化效果好。
从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中,不仅需要通过分离。
分离技术
主要是稀释和选择培养,稀释是在液体中或在固体表面上高度稀释微生物群体,使单位体积或单位面积仅存留一个单细胞,并使此单细胞增殖为一个新的群体。最常用的为平板划线法。
如果所要分离的微生物在混杂的微生物群体中数量极少或者增殖过慢而难以稀释分离时,需要结合使用选择培养法,即选用仅适合于所要分离的微生物生长繁殖的特殊培养条件来培养混杂菌体,改变群体中各类微生物的比例,以达到分离的目的。为保证分离到的微生物是纯培养,分离时必须用。
以上内容参考:网络-微生物分离纯化
‘贰’ 以DNA的分离纯化为例,阐述生物大分子分离纯化的基本原则原理和注意事项
首先最重要的一点事保证大分子物质不变性,否则分离纯化的工作将毫无意义,对于分离dna如果,是从生物体中直接提纯,要注意提取溶液的浓度,根据你所想要的A型或者B型来选配盐水,ph当然很重要,稍微偏碱性有利于提纯。如果从rna和dna的混合物种分离,直接使用弱碱性的缓冲液进行电泳就行。
此外,就是要提取周期短。周期越长提取效果越差
步骤尽量简洁。过于繁琐的步骤会让生物大分子活性降低,尤其提取酶的时候尤其重要
当然一定的纯度也是必须的考虑因素,根据实验需要,提纯也需要不同的纯度,自然方法有差异
提纯过程中的副产物也是需要考虑的因素。要保证他们不能影响提纯工作的进行
‘叁’ 如何进行生物大分子的分离提纯
用凝胶过滤层析法
是最好的方法之一。
可以分离不同大小的物质例如蛋白质混合物、胶体混合物等等。
大分子物质先出来,小分子物质后出来。
‘肆’ 生物实验室做实验有用到哪些设备
微生物实验室主要用于无菌环境下微生物提纯、分离、增殖及鉴定等工作,对无菌环境的要求很高。那么微生物实验室中需要用到哪些仪器设备呢?
一、无菌室
无菌室是实验室的核心部分,主要为样品提供保护,保证实验结果的准确和人员的安全。
二、超净工作台
微生物的培养都是在特定培养基中进行无菌培养,那么无菌培养必然需要超净工作台提供一个无菌的工作环境。超净工作台的主要用途是微生物的接种及处理时的无菌操作。
三、高压蒸汽灭菌锅
高压蒸汽灭菌锅是一个密闭的、可以耐受一定压力的双层金属锅。一般在进行无菌操作前需要将操作器皿、培养基等在高压灭菌锅里进行灭绝后才能使用。
四、培养箱
培养箱主要用于实验室微生物的培养,为微生物的生长提供一个适宜的环境。培养箱有以下几种:
1、普通培养箱
2、生化培养箱
3、恒温恒湿箱
4、厌氧培养箱
五、天平
天平是用于精确称量各类试剂及药品的设备。实验室常用的是电子天平。
六、微波炉/电炉
其主要作用是用于溶液的快速加热,微生物固体培养基的加热溶化等。
七、摇床
摇床又称摇瓶机,它是培养好气性微生物的小型试验设备或作为种子扩大培养之用。
八、冰箱
冰箱是实验室中保存试剂和样品必不可少的仪器。微生物学实验中用到的试剂有些要求是4度保存,有些要求是负20度保存,实验人员一定要看清试剂的保存条件,放置在恰当的温度下保存。
九、显微镜
微生物个体微小,必须借助显微镜才能观察清楚它们的个体形态和细胞结构。因此,在微生物学的各项研究中,显微镜就成为不可缺少的工具。
十、生物安全柜
微生物实验中所涉及到的部分试剂和样品微生物有些是有毒的,对于操作人员来说伤害比较大。为了防止有害德悬浮微粒、气溶胶的扩散,可以利用生物安全柜对操作人员、样品及样品间交叉感染和环境提供安全的保护作用。
十一、菌落计数器
菌落计数仪可帮助操作者计数菌落数量。通过放大,拍照,计数等方式来准确的获取菌落的数量。有些高性能的菌落计数器还可直接连接电脑来完成自动计数的操作,方便快捷的计数。
十二、分光光度计
分光光度计在微生物试验中用于测定微生物悬液的浓度,可以正确选取合适的培养时间。
十三、离心机
离心机是用于收集微生物菌体以及其他沉淀物。有冷冻离心机和常温离心机之分。
十四、液氮罐
液氮罐里装有液氮,可用于微生物实验室中各菌种的长期保存。
‘伍’ 从生物材料中提取生物大分子物质时,对生物材料的选择有什么要求
首先,这种生物材料必须含有这种生物大分子物质,没有目标物质,啥也提取不出来。其次,这种生物材料要比较容易获得,尽量不要用人体来源的材料,要用动物的或者是构建基因工程菌来生产目标物质。然后,就是这种生物材料的杂质含量要少,有些杂质会干扰提取的效果,造成生物分离过程成本太高,还有的杂质会影响目标物质的活性,这种杂质要第一步就除去,否则,提取的目标物质也不会产生应该有的作用。最后,要易破碎,因为,不少生物目标物质都是在细胞内部的。
‘陆’ 请问:怎样分离提纯微生物
1. 稀释涂布平板法
(1) 倒平板 将肉膏蛋白胨琼脂培养基, 高氏Ⅰ号琼脂培养基;马丁氏琼脂培养基加热溶化,待冷至55~60℃, 高氏Ⅰ号琼脂培养基加入10%酚数滴,马丁氏琼脂培养基加入链霉素溶液。混匀后分别倒平板,每种培养基倒三皿;
(2) 制备土壤稀释溶液 称取土样10g,放入盛有90ml无菌水并带入玻璃珠的三角烧瓶,振动约20min,使土样与水分混合,将细胞分散.用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一个盛有9ml无菌水的试管中,混合均匀,以此推制成10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释的土壤溶液;
(3) 涂布 将上述每种培养基的三个平板地面分别用记号笔写上10-4,10-5,10-6三种稀释度,然后用无菌吸管分别由10-4,10-5,10-6三管土壤稀释液中各取0.1ml对号放入已写好室温下静置5~10min,使菌液吸附进培养基;
(4) 培养 将高氏Ⅰ号琼脂培养基平板;马丁氏琼脂培养基平板倒置于28℃温室中培养3~5day,肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2~3day;
(5) 挑菌落 将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到上述三种培养基的斜面上,分别置28℃和37℃温室培养,大菌苔长出后,检查其特征是否一致,同时将细胞涂片染色后用显微镜检查是为单一的微生物。若发现有杂菌,需要再一次进行分离、纯化,直到获得纯培养。
2.平板划线分离法
(1)倒平板 按稀释涂布平板倒平板,并用记号标明培养基名称,土样编号和实验日期;
(2) 划线 在近火焰处,左手拿皿底,右手拿接种环,挑取上述的土壤悬液一环在平板上划线.划线的方法很多,但无论采用那种方法,其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释,使之形成单个菌落;
(3) 挑菌落 同稀释涂布平板法,一直到分离的微生物认为纯化为止。
‘柒’ 植物提取的提纯分离需要哪些设备
目前植物提取行业大都采用的工艺是:原料预处理→除菌除杂澄清过程→膜分离纯化→浓缩及制剂过程,采用板框压滤、树脂分离、溶剂萃取、热浓缩等传统工艺来制备植物提取产物,对于植物提取产物的质量不稳定、有效成分纯度较低、易破坏热敏性物质等活性成分、耗费大量有机溶剂以及耗时耗能等问题仍然存在,而植物提取产物的应用取决于其色泽、气味、状态及功效的稳定性是否达标。
植物提取现在应用较多的是膜分离设备
‘捌’ 蛋白质分离提纯的方法,要生物化学的方法(要详细的)
分离提纯蛋白质的方法采用渗析的方法,因为蛋白质可以形成胶体,胶体的分离好提纯方法应该是渗析。
‘玖’ 微生物实验室需要哪些常用的仪器
微生物实验室主要用于无菌环境下微生物提纯、分离、增殖及鉴定等工作,对无菌环境的要求很高。那么微生物实验室中则需要用到以下仪器设备。
一、无菌室
无菌室是实验室的核心部分,主要为样品提供保护,保证实验结果的准确和人员的安全。
二、超净工作台
微生物的培养都是在特定培养基中进行无菌培养,那么无菌培养必然需要超净工作台提供一个无菌的工作环境。超净工作台的主要用途是微生物的接种及处理时的无菌操作。
三、高压蒸汽灭菌锅
高压蒸汽灭菌锅是一个密闭的、可以耐受一定压力的双层金属锅。一般在进行无菌操作前需要将操作器皿、培养基等在高压灭菌锅里进行灭绝后才能使用。
四、培养箱
培养箱主要用于实验室微生物的培养,为微生物的生长提供一个适宜的环境。培养箱有以下几种:
1、普通培养箱
2、生化培养箱
3、恒温恒湿箱
4、厌氧培养箱
五、天平
天平是用于精确称量各类试剂及药品的设备。实验室常用的是电子天平。
六、微波炉/电炉
其主要作用是用于溶液的快速加热,微生物固体培养基的加热溶化等。
七、摇床
摇床又称摇瓶机,它是培养好气性微生物的小型试验设备或作为种子扩大培养之用。
八、冰箱
冰箱是实验室中保存试剂和样品必不可少的仪器。微生物学实验中用到的试剂有些要求是4度保存,有些要求是负20度保存,实验人员一定要看清试剂的保存条件,放置在恰当的温度下保存。
九、显微镜
微生物个体微小,必须借助显微镜才能观察清楚它们的个体形态和细胞结构。因此,在微生物学的各项研究中,显微镜就成为不可缺少的工具。
十、生物安全柜
微生物实验中所涉及到的部分试剂和样品微生物有些是有毒的,对于操作人员来说伤害比较大。为了防止有害德悬
十一、菌落计数器
菌落计数仪可帮助操作者计数菌落数量。通过放大,拍照,计数等方式来准确的获取菌落的数量。有些高性能的菌落计数器还可直接连接电脑来完成自动计数的操作,方便快捷的计数。
十二、分光光度计
分光光度计在微生物试验中用于测定微生物悬液的浓度,可以正确选取合适的培养时间。
十三、离心机
离心机是用于收集微生物菌体以及其他沉淀物。有冷冻离心机和常温离心机之分。
十四、液氮罐
液氮罐里装有液氮,可用于微生物实验室中各菌种的长期保存。
‘拾’ 1、 生物制药产品分离提纯包括哪些基本操作单元结合实例介绍1个。
1.分离提纯首先要确定你的产物是胞内产物还是胞外产物。胞内产物先要经细胞破碎,碎片分离后提纯。分离的方法多种,常用的是过滤和离心,一些新的方法有如双水相萃取,膜分离等。提纯是对目的产物的进一步纯化处理,方法很多,比如超滤,微滤,膜分离,液膜等。
2.生物制药产品副反应主要是由药品的纯度决定,杂质是引起副反应的主要因素。副反应类型:药效下降,药物毒性,过敏反应等
3.开办生物制药企业条件:资金,产品,人才,场地,创新研究,国家政策支持
4.临床试验分三期:
一期是为了观察药物的毒性和代谢过程,需在健康人身上进行;
二、三期是为了观察药物的有效性和安全性,受试对象为病人。 二期要求50-200人,三期要求大于400人。