Ⅰ 土壤微生物碳氮实验方法氯仿熏蒸干燥器里分别放哪些试剂
1、提取液的制备：
仪器：抽气皿、无醇氯仿，抽气机，大铝盒，分析天平，小三角瓶（50ml）、大塑料瓶（250ml），三角瓶（100ml）。 试剂的制备：
无醇氯仿（提取方法：用1N硫酸溶液与氯仿按体积比2：1于分液漏斗中震荡混匀，静置分离，共做三次，再用去离子水代替硫酸与氯仿2：1混匀，震荡分离，共三次，将提纯的放入到棕色试剂瓶中，加一勺无水硫酸钠保存。）
分析步骤：1、称取相当于干土12.5g的鲜土于大铝盒中，在抽气皿中放入盛有25ml无醇氯仿的小烧杯，放几张小纸片以便于观察沸腾，放入装土的大铝盒，连上抽气机，抽真空使沸腾5分钟，关紧活塞，关闭抽气机，盖上黑布，置于阴暗处（25℃）熏蒸24小时，到时间后，取回小烧杯，后反复抽真空3~5次，排除氯仿。
2、另称取一批同等重量的土放入干燥器中作未熏蒸处理，同样包上黑布，置于阴暗处24小时。
3.将上述步骤中的两批土样转移到大塑料瓶中（此操作应尽快进行）每个瓶内50ml0.5M硫酸钾溶液，盖紧瓶塞，震荡30分钟，取出，用定量滤纸过滤到100ml大三角瓶中，应立即测定，如果不立即测定，可用保鲜膜封口（防止污染和挥发），保存在4℃的冰箱中24小时。
Ⅱ 土壤微生物的检测怎么做，哪里可以做
土壤微生物是土壤中一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称，严格意义上应包括细菌、古菌、真菌、病毒、原生动物和显微藻类。其个体微小，一般以微米或毫微米来计算，通常1克土壤中有几亿到几百亿个，其种类和数量随成土环境及其土层深度的不同而变化。它们在土壤中进行氧化、硝化、氨化、固氮、硫化等过程，促进土壤有机物的分解和养分的转化；那土壤内的微生物如何测定呢，下面喆图小编带大家来了解一下。
一、培养方法
（1）稀释平板涂抹法
具体操作如下：
①准确称取 10g（精确到 0.001）采集的鲜土，倒入装有 90 ml 无菌水的 500 ml 的三角瓶中，置于往返震荡机上（120r/min，常温），震荡 20 min，使土壤充分分散成为土壤悬液。
②将上面的土壤悬液用无菌移液管吸取 5 ml 到 45 ml 稀释液中，即为 10-2稀释度，依次按 10倍法稀释，制成 10-1~-~10-6稀释度。注意:每次吸取悬液时,在稀释液中反复吸入和吹出 3-~5 次,减少因管壁吸附而造成的误差,并使悬液进一步分散,每个稀释度需要更换无菌吸管吸取悬液。)
③根据各类微生物在土壤中的数量多少选择适当稀释度的悬液接种。本实验选择细菌的稀释度为 10-~10-5,放线菌为 10~-10-4,真菌为 10-1~-10-3。 -3-2
④土壤悬液的接种方法:在无菌培养皿中倒入 15~20 ml 选择性培养基,待凝固后,用 0.2 ml无菌移液枪吸取0.2 ml各稀释度的土壤悬液,然后立即用涂抹棒将悬液均匀的涂抹于培养基表面。用同一支吸管接种时,从高稀释度开始,依次接种到低稀释度。
⑤接种了土壤悬液的培养皿,平放在超净工作台 20~30 min,使得菌液渗透入培养基内,然后倒置于 28~-30°C 生化培养箱中培养一定时间:细菌 1~-3 天,放线菌 10-~14 天,真菌 3~-7 天。
⑥培养结束后,取出培养皿计数。
(2)稀释培养法
一系列稀释度的制作与稀释平板法相同。根据各类微生物在土壤中数量的多少选择适当的稀释度,分别接种 1 ml 稀释液与制作好的液体培养基中,根据需要做 3~4 次重复,适温培养。2 三大类土壤微生物培养基的分离三大类土壤微生物的分离采用稀释平板涂抹法,每个菌种要求做 3 个稀释度,每个稀释度做3-4次重复,选取细菌和放线菌的菌落在20~-200之间的培养皿、真菌的菌落在 10-~100 的培养皿计数,并计算三次重复的平均值。每克干土中微生物数量计算式:
每克干土中菌落数=(菌落平均数×稀释倍数×100%)/(湿土质量×干土)
1, 细菌:牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏 3g、蛋白胨 5g、琼脂 18g、蒸馏水 1000 ml、pH 值 7.0-~7.2 。
2, 放线菌:改良高氏 1 号培养基:KNO3 1g,FeSO4·7H2O 0.01g,K2HPO4 0.5g,淀粉 20g,MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、琼脂 18g、3%重铬酸钾溶液 3.3ml、蒸馏水 1000ml、pH 值 7.2~-7.4
3,真菌:马丁氏培养基(虎红琼脂):蛋白胨 5g、KH2PO4 1g、MgSO4 0.5g、葡萄糖 10g、琼脂 18.5g、孟加拉红 0.033g、氯霉素 0.1g、蒸馏水 1000ml。
所有培养基需在湿热灭菌锅中121°C灭菌 20-~30min
以上土壤微生物测定方案仅供参考，可以查询专业公司进行检测。
Ⅲ 土壤微生物量碳氮的测定方法
取一定重量的土壤，称取1g，置于100ml无菌水中，充分振荡，然后离心，取上清液，就得到土壤浸出液（可以看做土壤中的微生物全部转移至水中）。然后做梯度稀释，取一定稀释度的溶液，涂平板，培养后数菌落数，然后乘上稀释倍数，就可得到1g土壤中该微生物的数量。
例如，你在稀释10的7次方的平板上数出了15个菌落，则1g土壤中微生物数量为1.5×10的8次方个。
Ⅳ 求土壤微生物量氮的标准曲线的配置方法！谢谢！
1、土壤微生物量 (Mierobia lBiomass，MB) 能代表参与调控土壤能量和养分循环以及有机物质转化相对应微生物的数量，一般指土壤中体积小于5Χ103um3的生物总量。它与土壤有机质含量密切相关。 目前，熏蒸法是使用最广泛的一种测定土壤微生物量的方法阎，它是将待测土壤经药剂熏蒸后，土壤中微生物被杀死，被杀死的微生物体被新加人原土样的微生物分解(矿化)而放出CO2，根据释放出的CO2:的量和微生物体矿化率常数Kc可计算出该土样微生物中的碳量。因此碳量的大小就反映了微生物量的大小。 此外，还有平板计(通过显微镜直接计数)、成份分析法、底物诱导呼吸法、熏蒸培养法(测定油污染土壤中的微生物量—碳。受土壤水分状况影响较大，不适用强酸性土壤及刚施用过大量有机肥的土壤等)、熏蒸提取法等，均可用来测定土壤微生物量。 熏蒸提取-容量分析法 操作步骤： （1）土壤前处理和熏蒸 （2）提取 将熏蒸土壤无损地转移到200mL聚乙烯塑料瓶中，加入100mL0.5mol·L-1 K2SO4（图水比为1:4；w：v），振荡30min（300rev·min-1），用中速定量滤纸过滤于125mL塑料瓶中。熏蒸开始的同时，另称取等量的3份土壤于200mL聚乙烯塑料瓶中，直接加入100mlL0.5mol·L-1 K2SO4提取；另作3个无土壤空白。提取液应立即分析。 （3）测定 吸取10mL上述土壤提取液于150mL消化管（24mmх295mm）中，准确加入10mL0.018 mol·L-1K2Cr2O7—12 mol·L-1H2SO4溶液，加入2~3玻璃珠或瓷片，混匀后置于175±1℃磷酸浴中煮沸10min（放入消化管前，磷酸浴温度应调至179℃，放入后温度恰好为175℃）。冷却后无损地转移至150mL三角瓶中，用去离子水洗涤消化管3~5次使溶液体积约为80mL，加入一滴邻菲罗啉指示剂，用0.05 mol·L-1硫酸亚铁标准溶液滴定，溶液颜色由橙黄色变为蓝色，再变为红棕色，即为滴定终点。 （4）结果计算
Ⅳ 土壤微生物数量的测定方法
取一定重量的土壤，称取1g，置于100ml无菌水中，充分振荡，然后离心，取上清液，就得到土壤浸出液（可以看做土壤中的微生物全部转移至水中）。然后做梯度稀释，取一定稀释度的溶液，涂平板，培养后数菌落数，然后乘上稀释倍数，就可得到1g土壤中该微生物的数量。
例如，你在稀释10的7次方的平板上数出了15个菌落，则1g土壤中微生物数量为1.5×10的8次方个。
Ⅵ 测土壤微生物量碳磷酸浴用什么做
磷酸浴用于重铬酸钾容量法中土壤样品与重铬酸钾—硫酸(K2Cr2O7-H2SO4)溶液混合液体均匀加热。一般也可用液体石蜡油、植物油浴替代，但植物油浴效果相对会差些。
重铬酸钾容量法
一、测定原理
在加热的条件下，用过量的重铬酸钾—硫酸(K2Cr2O7－H2SO4)溶液，来氧化土壤有机质中的碳，Cr2O-27等被还原成Cr+3，剩余的重铬酸钾(K2Cr2O7)用硫酸亚铁(FeSO4)标准溶液滴定，根据消耗的重铬酸钾量计算出有机碳量，再乘以常数1.724，即为土壤有机质量。其反应式为：
重铬酸钾—硫酸溶液与有机质作用：
2K2Cr2O7+3C+8H2SO4=2K2SO4+2Cr2(SO4)3+3CO2↑+8H2O
硫酸亚铁滴定剩余重铬酸钾的反应：
K2Cr2O7+6FeSO4＋7H2SO4=K2SO4＋Cr2(SO4)3+3Fe2(SO4)3+7H2O
二、测定步骤：
1.在分析天平上准确称取通过60目筛子(＜0.25mm)的土壤样品0.1—0.5g(精确到0.0001g)，用长条腊光纸把称取的样品全部倒入干的硬质试管中，用移液管缓缓准确加入0.136mol/L重铬酸钾—硫酸(K2Cr2O7-H2SO4)溶液10ml，(在加入约3ml时，摇动试管，以使土壤分散)，然后在试管口加一小漏斗。
2.预先将液体石蜡油、植物油、磷酸浴锅加热至185—190℃，将试管放入铁丝笼中，然后将铁丝笼放入油浴锅中加热，放入后温度应控制在170—180℃，待试管中液体沸腾发生气泡时开始计时，煮沸5分钟，取出试管，稍冷，擦净试管外部油液。
3.冷却后，将试管内容物小心仔细地全部洗入250ml的三角瓶中，使瓶内总体积在60—70ml,保持其中硫酸浓度为1—1.5mol/l,此时溶液的颜色应为橙黄色或淡黄色。然后加邻啡罗啉指示剂3—4滴，用0.2mol/l的标准硫酸亚铁(FeSO4)溶液滴定，溶液由黄色经过绿色、淡绿色突变为棕红色即为终点。
4.在测定样品的同时必须做两个空白试验，取其平均值。可用石英砂代替样品，其他过程同上。
三、结果计算
在本反应中，有机质氧化率平均为90%，所以氧化校正常数为100／90，即为1.1。有机质中碳的含量为58%，故58g碳约等于100g有机质，1g碳约等于1.724g有机质。由前面的两个反应式可知：1mol的K2Cr2O7可氧化3／2mol的C，滴定1molK2Cr2O7，可消耗6mol FeSO4，则消耗1molFeSO4即氧化了3／2×1／6C=1／4C=3
计算公式为：
有机质g/kg=[ ((V0-V)N×0.003×1.724×1.1)／样品重×1000
式中：V0—滴定空白液时所用去的硫酸亚铁毫升数。
V—滴定样品液时所用去的硫酸亚铁毫升数。
N—标准硫酸亚铁的浓度。mol/L
四、注意事项
1.根据样品 有机质含量决定称样量。有机质含量在大于50g/kg的土样称0.1g，20—40g/kg的称0.3g，少于20g/kg的可称0.5g以上。
2.消化煮沸时，必须严格控制时间和温度。
3.最好用液体石蜡或磷酸浴代替植物油，以保证结果准确。磷酸浴需用玻璃容器。
4.对含有氯化物的样品，可加少量硫酸银除去其影响。对于石灰性土样，须慢慢加入浓硫酸，以防由于碳酸钙的分解而引起剧烈发泡。对水稻(Rice)(Rice)(Rice)(Rice)土和长期渍水的土壤，必须预先磨细，在通风干燥处摊成薄层，风干10天左右。
5.一般滴定时消耗硫酸亚铁量不小于空白用量的1/3，否则，氧化不完全，应弃去重做。消煮后溶液以绿色为主，说明重铬酸钾用量不足，应减少样品量重做。
Ⅶ 土壤中微生物碳氮的测定方法
1.3 土壤微生物区系测定
细菌、真菌、放线菌采用平板培养法。细菌采用牛肉膏蛋白胨培养基，放线菌采用改良高氏1号培养基，真菌采用马丁氏培养基。
1.4 土壤微生物活性指标测定方法
1.4.1 土壤微生物生物量碳、氮的测定：土壤微生物生物量碳的测定：采用氯仿熏蒸—0.5mol （L-1K2SO4提取法，TOC自动分析仪测定；土壤微生物生物量氮的测定：采用熏蒸提取一开氏定氮法测定微生物生物氮量。
1.4.2 土壤氨化作用强度、硝化作用强度分析：土壤氨化作用测定采用土壤培养法，用半微量开氏定氮蒸馏法测定NH4+-N的含量；土壤硝化作用测定采用溶液培养法，用比色法测定NO2-N的减少量。
Ⅷ 测定微生物的生物量有哪些主要方法
测定微生物的生物量有哪些主要方法
测定的方法主要有四种：
1.直接计数测定：根据微生物种类，有血球计数板和细菌计数板；
2.比浊法：根据菌悬液的浓度在一定范围内与光密度成正比，可以用分光光度计测OD值，用OD值表示样品菌液浓度；
3.核酸计数法：荧光定量PCR技术；
4.活菌计数法：MPN和平板计数法由于测定方法的限制。新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的LK2SO4溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（KEC），从而计算土壤微生物生物量碳。
Ⅸ 怎么测定土壤中微生物啊大家来帮帮忙！
，加入蒸馏水，小心震荡。
2作为土壤微生物，应为它们种类繁多，如果真菌的颜色不明，要有一个提取的过程。
1，可以用高倍的光学显微镜.制作土壤浸出液。
4：取干净土壤.培养：使用完全培养皿，滴入浸出液，培养
3.长出菌落后，根据菌落的形状大小，有些是真菌菌落，有些是细菌菌落，真菌菌落可先用肉眼观察，再都制成生物涂片，分层后取出上层清液。观察真菌可以用较低倍数的光学显微镜，可染色处理，对于细菌的观查，共生在一起，要想观察好
Ⅹ 请教比色法如何测定土壤微生物生物量氮非常着急
你可以参考一下植物中蛋白质含量的测定，一般都是采用三酸消煮，然后再在定氮仪上进行测定，仪器要求不高，但是操作起来也是比较麻烦的。