㈠ 统计活菌数量的方法都有哪些
统计菌落数目的方法有直接计数法和间接计数法两种。
1. 直接计数法
直接计数法是将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4〜5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按公式求出每 毫升样品中所含的细菌数。计算公式 为:每毫升原液所含细菌数=每小格平 均细菌数X400X1 000X稀释倍数。这种方法的优点是所需设备比较简单，能迅速得到结果，而且在计数的同时还可以观察到所研究的微生物的形态特征； 缺点是不能区分死菌与活菌。
2. 间接计数法
在应用稀释涂布平板法计数时，首先要将待测样品配制成均匀的系列稀释液，尽量使微生物细胞分散开，再把稀释液接种到平板上，进行培养观察。但值得注意的是，统计的菌落数往往比活菌 的实际数目低，而且统计的结果一般用 菌落数而不用活菌数来表示。计算公式为:每克样品中的菌落数= (C+V)X M，其中，C表示某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V表示涂布平板时所 用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
㈡ 若要测定培养液中微生物的菌体数,若要测定其活菌数量,用什么方法
（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、氮源、无机盐四类，培养基配制时，基本过程为计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板五个步骤．
（2）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用血细胞计数板直接计数；若要测定其活菌数量，可选用稀释涂布平板法进行计数．
（3）采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格．
（4）三块平板有两块平板长有菌落，说明含有菌株并可在培养基上生长；而其中一块未见菌落，说明菌株死亡．因此，应在接种过程中接种环灼烧后未冷却或未足够冷却，使菌株因温度过高被杀死．
（5）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少含有三种组分，即C 1 酶、C x 酶、葡萄糖苷酶，其中葡萄糖糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖；刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌．
故答案为：
（1）氮源和无机盐先调PH，后灭菌
（2）血细胞计数板稀释涂布平板
（3）检测培养基平板灭菌是否合格
（4）接种环温度过高，菌被杀死
（5）纤维二糖红透明圈
㈢ 酵母菌存活率实验
1、我能想到的方法是稀释后的菌液铺板,数菌落数,最后计算存活率.
2、诱变所获得的基因变异是不稳定的,随着传代次数的增加这种突变会回复.道理很简单,对于正常生长的菌来说,这种基因突变是不正常的,生物会想办法解决这种不正常.
㈣ 怎样用平板菌落计数法测定微生物活菌数
1.先将微生物制成菌悬液
2.梯度稀释
3.涂平板
4.培养，计算菌落数，然后算出菌悬液单位体积的活菌数
㈤ 细菌活体浓度如何测定，单位mg/L,不用平板计数法
在微生物学研究中,经常需要测定培养溶液中细菌数量,比色法和比浊法是常用的方法,细菌培养液中含有活的和死的细菌、未利用完的培养基以及细菌生长过程中的代谢产物等,因此,培养液的吸光度值并不完全是细菌(活细菌、死细菌)数量的真实体现。作者比较了2 种方法(细菌培养原液、培养液离心后沉淀+ 无菌水) 测定培养液中细菌数的差异和对细菌生长曲线测定结果的影响,以期为液体培养条件下细菌数的快速测定提供参考。
1 材料与方法
1. 1 试验用菌株
由患烂爪病的中华鳖血液中分离所得,并经检验为气单胞菌属嗜水产气单胞菌种。
1. 2 细菌培养
①选用不同pH 值的营养肉汤培养基。在预先标号的试管中分别加入不同pH 值(pH 值设定为4. 5 、5. 0 、5. 5 、6. 0 、6. 5 、7. 0 、7. 5 、8. 0 、8. 5 、9. 0 、9. 5 、10. 0 、10. 5 、11. 0 共13 组) 的培养基5mL ,121. 5 ℃灭菌30 min ,然后在每支试管中加入经24 h 复壮培养的均匀菌悬液100μL ,30 ℃、140 r/ min 振荡培养24 h ,待测; ②连续培养,定期
采样。使用500 mL 锥形瓶,普通肉汤培养基,培养方法同①,培养过程中间隔1 h 连续采样。
1. 3 细菌浓度与吸光值的相关性计算
活细菌数测定采用稀释平板法,细菌总数测定采用血球计数板在显微镜下直接计数。对细菌悬液吸光值的测定采取3 种方法进行: ①以原培养基作对照,在420 nm 处直接测定细菌悬液吸光值(记ODa) ; ②将培养后的细菌悬液离心(3 000r/ min、30 min) ,取沉淀加入与上清液等量的无菌生理盐水,混匀后,以无菌盐水作对照,测定溶液吸光值(记ODb) ; ③以原培养基作对照,测定离心后上清液的吸光值(记ODc) 。参照Lambert2Beer 定律logI0/ I = k·C(其中logI0/ I 为吸光度、C为细菌浓度) ,计算活菌数和细菌总数与对应溶液吸光值的关系,并求出常数k 。
2 结果与分析
2. 1 不同pH值条件下细菌悬液的吸光值
测定不同pH 条件下的细菌培养悬液吸光度与离心沉淀+ 无菌盐水的吸光度值是两条不同的曲线,离心上清液的吸光值也不是1 条与横坐标重叠或平行的直线。说明在培养基中除细菌影响吸光值大小外,不同培养条件下的培养基质对吸光值的影响也不尽相同。
2. 2 连续培养过程中细菌悬液吸光值的变化
细菌在连续培养21 h 过程中,间隔1 h 连续测得细菌培养原液、培养液离心上清液及培养液沉淀+ 等量无菌水在420 nm 处的吸光值。2 种菌悬液(培养液,离心沉淀+ 无菌盐水) 的吸光值变化趋势一致,但在数量上存在一定差异。在细菌培养过程中不断有培养液组份消耗和细菌代谢产物增加,同时死亡细菌的消融产物也会对离心上清液的吸光值产生影响。因此,显示
出上清液随时间延长吸光值不断增加。试验中也发现,上清液颜色随培养时间延长变化明显,由棕黄色逐步变为浅黄色。
2. 3 细菌浓度与吸光值的关系
连续培养细菌5 h 后,在420 nm 处测定2 种菌悬液(培养原液,培养液离心后经无菌盐水定容) 的吸光值分别为0. 519 和0. 368 。经1/ 10 梯度稀释后采用平板法计数,培养液中活细菌数为5. 082 ×1023个/ mL ,根据Lambert2Beer 定律,2 种方法测得的活细菌数与吸光度的关系分别为
logI0/ I = 1. 021 ×10 - 24 ·C , logI0/ I = 7. 241 ×10 - 25·C。显微计数培养液中细菌总数为5. 285×1024 ,是其中活菌数的10. 4 倍,证明在细菌培养液中存在大量已经死亡的细菌。
3 讨 论
在比浊法测定细菌浓度时,有的方法采用未接种的液体培养基作为空白对照[1 ,3 ] ,但是,在细菌的生长过程中培养基质与原培养基并不完全一致。本实验结果证实:不同细菌浓度培养物经离心沉淀后,上清液的吸光度并不完全相等,即使使用原培养基作为空白对照,也不能完全消除不同培养时期或不同培养条件下培养基对吸光度的影响。死细菌对液体环境中细菌浓度的测定也有一定影响,试验对原培养液进行稀释培养和显微计数的结果差异明显,说明培养液离心沉淀物中存在大量死的细菌。活的和死的细菌之间的比例与培养条件、细菌接种量及培养时间等密切相关,如何消除这些影响,作者认为在研究细菌生长特性时应区分活细菌和细菌总数与吸光度的关系。
希望我的回答可以为你提供一些帮助~O(∩_∩)O~
我个人认为，在实验并不需要浓度有多么精确的前提下，可以利用分光光度法测定活菌浓度。
㈥ 测定微生物的生长有哪些方法各有何优缺点
常用测定微生物生长的方法有：
1)称干重法.可用离心法或过滤法测定.
优点：可适用于一切微生物,
缺点：无法区别死菌和活菌.
2)比浊法.
原理：由于微生物在液体培养时,原生质的增加导致混浊度的增加,可用分光光度计测定.
优点：比较准确.
3)测含氮量,
大多数微生物的含氮量占干重的比例较一致,根据含氮量再乘以6.25即可测得其粗蛋白的含量.
4)血球计数板法.
优点：简便、快速、直观.
缺点：结果包括死菌和活菌.
5)液体稀释法.
对未知菌样作连续的10倍系列稀释,经培养后,记录每个稀释度出现生长的试管数,然后查MPN表,再根据样品的稀释倍数就可计算其中的活菌含量.
优点：可计算活菌数,较准确.
缺点：比较繁琐.
6)平板菌落计数法.
取一定体积的稀释菌液涂布在合适的固体培养基,经培养后计算原菌液的含菌数.
优点,可以获得活菌的信息.
缺点：操作繁琐,需要培养一定时间才能获得,测定结果受多种因素的影响.
㈦ 微生物试验中，菌种的传代实验怎么做微生物的酶活怎么测
微生物传代最常用的就是斜面接种法，大致意思就是你从原代菌种里挑一点划线法保存到小试管里的斜面培养基上，进而让菌种不断增殖保存下来。 其方法步骤如下：首先，点燃酒精灯。将菌种和斜面培养基的两只试管平行放在左手上，用拇指与其它四指夹住，并使中指位于两试管之间，两试管的管口齐平（图9－5①）。其次，用右手先将棉塞拧转松动，并稍拉出一些，以利又质卑纬觯ㄍ?9－5②）。第三，右手持接种针，在酒精灯将针头部分烧红灭菌（图9-5③）。针头以上凡是接种时可能进入试管的部分，均应用火灼烧。以下操作都要使试管口靠近火旁。第四，用右手的小指与掌间拔掉左手上两只试管上的棉塞，同时迅速将试管口在酒精灯上烧灼3秒钟左右，使管口上可能沾染的少量杂菌得以烧死。第五，将烧过的接种针伸入菌种管内，先将针头接触培养基上没有菌的部位（如斜面的顶端），使其冷却，以免烫死被接种的菌体。然后轻轻接触菌体，取出少许，慢慢将接种针抽出试管，接种针抽出时不要使针头部分碰到管壁和管口，取出后，不可使针头通过火焰，更不可触及其它无关物品或桌面。第六，迅速将接种针伸进另一试管，在培养基上轻轻划线，接种菌体于其上。划线时，要由底部起划较密的平行线，一直划到顶部，以充分利用斜面面积，但不要将培养基划破。第七，烧灼试管口，将棉塞塞上。塞棉塞时，不要移动试管迎接棉塞，以免试管在移动中纳入可能含菌的空气。第八，将针头在火焰上烧灼灭菌。放回原处后，腾出手将棉塞塞紧。二、关于微生物酶活性测定，比较复杂，网上比较多，不同酶测定方法也不一样，同学你自己慢慢查吧，O(∩_∩)O哈哈~
㈧ 试述微生物活菌计数方法有哪几种
v常用测定微生物生长的方法有：1)称干重法。可用离心法或过滤法测定。优点：可适用于一切微生物，缺点：无法区别死菌和活菌。2)比浊法。原理：由于微生物在液体培养时，原生质的增加导致混浊度的增加，可用分光光度计测定。优点：比较准确。3)测含氮量，大多数微生物的含氮量占干重的比例较一致，根据含氮量再乘以6.25即可测得其粗蛋白的含量。4)血球计数板法。优点：简便、快速、直观。缺点：结果包括死菌和活菌。5)液体稀释法。对未知菌样作连续的10倍系列稀释，经培养后，记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查MPN表，再根据样品的稀释倍数就可计算其中的活菌含量。优点：可计算活菌数，较准确。缺点：比较繁琐。6)平板菌落计数法。取一定体积的稀释菌液涂布在合适的固体培养基，经培养后计算原菌液的含菌数。优点，可以获得活菌的信息。缺点：操作繁琐，需要培养一定时间才能获得，测定结果受多种因素的影响。
㈨ 如何测量益生菌的存活数
可以采用常用的倍比稀释法，用对应培养基，培养里面计数；快速的就可以用血球计数板，常规革兰氏染色看见的是活菌和死菌总数，不染色也可，分菌，然后再染死菌，减掉就是活菌数。
1、倍比稀释培养法：先稀释，再培养，在数数。
2、血球计数板：稀释菌液，染色或不染色，点样，数数，计算即可。
㈩ 生物肥料中有效活菌数（枯草芽孢杆菌和侧孢芽孢杆菌）的测定
培养基选用营养琼脂培养基
涂布计数
培养
间12-24
需
需要鉴定看
需要
知道
品
否
两种菌
其
菌
酵母
培养基
添加真菌抑制剂
乳酸菌
则适
缩短培养
间
乳酸菌
比芽孢菌慢