细胞免疫化学爬片怎么看

Ⅰ 爬片的什么叫爬片

爬片又名细胞爬片 ，细胞爬片就是让玻片浸在细胞培养基内，细胞在玻片上生长，主要用于组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等.

Ⅱ 如何判断细胞爬片细胞固定后皱缩

我们实验室做过，小编顺便推荐一下细胞爬片是从上海晶安买的，实验效果不错. 细胞免疫荧光步骤： 1.细胞爬片；首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜，捞酸后流水洗。
【爬片的准备】

1. 爬片：
24*24盖玻片，刚好用于6孔板。也可用更大的盖玻片，放在大的培养皿中爬片。

2. 盖玻片泡酸过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再置于无水酒清中浸泡6小时，再用三
蒸水冲洗3遍（个人认为主要目的是将酸冲洗干净就可以了，如果不干净的话，细胞帖壁不
好），放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒、烤干。

3．盖玻片浸泡75%乙醇10分钟消毒，然后酒精灯上烤干，直接放入培养皿，开始种细胞。重点是玻片是干净的、无菌的。

4.盖玻片在液体中经常有贴壁吸附力，用一般镊子很难一次性夹起，将注射器针头针尖
向背面弄个小钩，这样将爬片轻轻勾起，用小镊子取出就可以。

【细胞爬片】

1. 胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中。

2. 加细胞时，根据玻片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基，目的是使
玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起，然后放玻片，防止加细胞悬液时玻片漂起，造成双层细胞贴片。整个过程注意无菌操作。

3. 根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可

4. 按照实验设计，作用一定时间后取玻片。注意细胞不能太密，否则容易掉片。

【细胞爬片的固定】

1. 细胞爬片取出后，PBS洗2遍。但比如做凋亡的TUNEL染色时就避免洗，因为凋亡的
细胞在洗的过程中有可能会脱落。

2.常用的固定液
1.） 冷丙酮，可用于一般的免疫组化染色。将纯的丙酮预先放入冰箱-20℃后便为冷丙酮，加入冷丙酮于-20℃（丙酮有很强的挥发性，注意将含有丙酮和爬片的器皿盖严，防止其挥发）固定10分钟。取出后，室温吹干，然后放入-20℃保存。

2. ）多聚甲醛(常用4%)：可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光以及TUNEL染色。主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等室温固定15分钟后，将表面液体吹干，入-20℃保存
3.） 95％乙醇，可用于免疫组化。
优点：穿透性强、抗原性保存较好。
缺点：但醇类对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质保存效果较差，使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度室温固定
15分钟后，将表面液体吹干，入-20℃保存
4. ）甲醛(福尔马林)应用最广
优点：形态结构保存好，且穿透性强，
缺点：甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色；分子间交联形成的网格
结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。室温固定15分钟后，将表面液体吹干，入-20℃保存。

【细胞爬片的组化染色】

1. PBS清洗标本 3次各2 min。

2. 0.5%Triton X-100( DPBS配) 孵育 1次20min。（此步骤用于胞浆、胞核抗原）

3. PBS清洗标本3次各 2 min。

4. 3%H2O2孵育 15 min。

5. 余下步骤同石蜡切片组化染色。

Ⅲ 细胞爬片染色免疫组化法步骤是什么

师兄用的晶安生物的细胞爬片。
晶安生物细胞爬片免疫组化法： 1 胰酶消化细胞，收集至离心管；调整样本细胞数为1×106 /ml； 2 将单细胞悬液滴加至平皿内无菌载玻片表面，置于37℃ 5%的加湿CO2孵箱中过夜，使细胞爬片。 3 吸弃平皿内培养上清，加入新鲜培养基，用无菌培养基洗3次； 4 PBS冲洗相应方案的载玻片3次； 5 将载玻片置于95%乙醇中固定约1h； 6 倒置相差显微镜下观察，并划定载玻片上细胞爬片密集区； 7 在相应区域滴加按一定比例稀释后一抗，4℃冰箱内过夜湿孵。阴性对照以PBS缓冲液代替一抗。 8 先暂复温30min，后PBS冲洗载玻片3次； 9 滴加二抗，室温湿孵30min；后PBS冲洗载玻片3次； 10 DAB显色：将配置好的DAB溶液滴加至载玻片上，室温下孵育3min至载玻片略显黄色； 11 清水充分冲洗载玻片，苏木素复染核3-5min，清水冲洗，盐酸酒精分化20s，清水冲洗，氨水返蓝3min，清水冲洗，后置于75%-80%-95%-无水酒精中脱水，每步骤约2min； 12 将载玻片置于1、2、3道二甲苯中，各约15min，中性树脂封片，置于阴凉通风处风干。

Ⅳ 什么叫细胞爬片细胞甩片滴片

爬片就是让玻璃片浸在细胞培养基内，细胞会向玻璃片生长，观察细胞迁移能力的。
甩片是将细胞在玻璃片上，再用甩片机讲残余液体甩掉
滴片就是将细胞悬液直接滴在玻璃片上观察。

Ⅳ 如何做细胞爬片

细胞爬片就是让细胞（贴壁细胞）在片子（盖玻片）上生长。主要用来做免疫细胞化学啊，原位杂交等吧。在做这些实验时，制作标本有两种，一是离心做细胞涂片，二是细胞爬片。利用贴壁细胞在玻璃等物质上贴壁生长的特点，让它在盖玻片上生长，可以使制作的细胞片子更牢固，在后面的洗涤过程中，不易脱落。特别是在用粘附剂如多聚赖安酸处理过的片子上，细胞贴得更牢固。
制作方法：将片子放在细胞培养板（均已经消毒）中，加入一定数量的细胞悬液，让它生长24小时。待它贴壁后，细胞爬片就制作好了。
需要的器材：多聚赖安酸、合适大小的盖玻片（根据细胞培养板孔大小而定）、细胞培养板、培养基。

Ⅵ 细胞爬片是什么

细胞爬片就是让玻片浸在细胞培养基内，细胞在玻片上生长，主要用于组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等.

Ⅶ 爬片具体步骤是什么

单位实验室做过，小编顺便推荐一下细胞爬片是从上海晶安生物公司买的，实验效果不错.
细胞免疫荧光步骤：
1.细胞爬片；首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜，捞酸后流水洗净，烤干，置于器皿中高压灭菌，然后再烤箱中大约8小时烤干备用。
爬片可以在培养皿 六孔板或24孔板中都可，我选择在培养皿中爬。一为节约经费（培养皿可以重复利用）二来觉得培养皿口大，操作比较方便。培养皿消毒同上，消毒时记得消两把镊子
具体操作是：用胰酶消化好细胞，充分吹打，使之成单细胞悬液（注意：这一点很重要，关系到将来爬出来片子的质量）
取出消毒的培养皿，可以先加少量培养基（以使玻片与培养皿紧密接触），将玻片小心放入摆放其中，然后将单细胞悬液一滴一滴的滴到玻片上。最后盖上培养皿置于37度5％CO2的暖箱中培养，根据细胞生长状况，24小时或更长时间适时取出爬片。
爬片置于37度PBS中洗三次，每次3到5秒钟，然后在4％多聚甲醛中固定15分钟，然后再用37度去离子水将甲醛冲干净，注意手法轻柔，要不然掉片很厉害。同时操作过程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功尽弃。
将做好的爬片置于滤纸上晾干，然后用中性树胶粘在载玻片上。注意一定要等中性树胶彻底干了之后才能做后续实验，要不然玻片会掉下来的，就又是前功尽弃了 做好的细胞爬片可以放在－20保存备用，具体能保存多长时间不太清楚，当然尽量早用。
2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)；
3.PBS漂洗5min；
4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)；
5.PBS漂洗2次，每次5min；
6.1%BSA封闭30min；
7.加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2h；
8.PBS漂洗2次，每次5min；
9.加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1h；
10.PBS漂洗2次，每次5min；
11.5ug/ml DAPI染色2min；
12.抗淬灭封片剂封片。
抗淬灭封片剂:
2.5% DABCO (w/v)
50mM Tris(pH8.0)
90%甘油