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化学发光竞争法有哪些

发布时间:2022-07-31 06:27:30

㈠ 关于化学发光检测法

化学发光检测法有很多,不知你说的是不是焰色反应,如果是焰色反应,则是由于金属原子内部电子能级跃迁导致的,不同金属会发出不同颜色(波长)的光。这时一般只能作为定性检测,不能作为定量检测。
如果指的是原子发射光谱,其发光原理也是原子中最外层电子受到激发(可以是光致也可以是热致等等),由基态转化为激发态,然后跃迁回基态以光的形式辐射能量。这时可以作为定量分析(可定量必可以定性),这时可以看发射光谱谱图曲线的高度,一般有几种方法来测量,像外标法,内标法,标准曲线法等等,如果想知道更详细的东西可以参考仪器分析的有关内容。

㈡ 免疫分析方法有哪些

(1)放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)。RIA技术是使用以放射性同位素(如125I、32P、3H等)作标记的抗原或抗体,用γ-射线探测仪或液体闪烁计数器测定γ-射线或β-射线的放射性强度,来测定抗体或抗原量的技术。它包括以标记抗原为特点的放射免疫分析和以标记抗体为特点的免疫放射分析(immunoradiometricassay,IRMA)。前者以液相竞争结合法居多,既测大分子抗原又测小分子抗原;后者以固相法测大分子抗原为主。

RIA在早期建立的农药免疫分析方法中占了很大比重,建立了狄氏剂、艾氏剂、2,4-D和2,4,5-T、对硫磷和百草枯等农药的放射免疫分析法。尽管该方法灵敏度非常敏锐(RIA通常为10-9g、10-12g,甚至10-15g),应用范围广,但进行RIA需使用昂贵的计数器,也存在放射线辐射和污染等问题,因此在农药残留检测领域的应用和发展受到了一定的限制,并逐步为其他免疫分析方法所取代。

(2)酶免疫分析法(enzymeimmunoassay,EIA)。EIA是继RIA之后发展起来的一项免疫分析技术。其检测原理与放射免疫法类似,但所用的标记物为酶,它将抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来,通过测定结合于固相的酶的活力来测定被测定物的量。用做标记物的酶有辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)和碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP)、葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase,GO)、脲酶(urease)等。酶标记反应的固相支持物有聚苯乙烯塑料管、膜等。目前大多数采用96孔酶标板(MTP)作为固相支持物。这种板的检测容量大,样本数量多,只需有台简单的酶标仪就可得出准确的检测数据。也有学者采用磁珠作为固相材料进行EIA研究,其原理是将高分子材料(聚苯乙烯、聚氯乙烯等)包裹到金属小颗粒(Fe2O3,Fe3O4)外面,再通过化学方法键合上氨基(-NH2)、羧基(-COOH)、羟基(-OH)等活性基团,再与抗体或抗原耦联,制成免疫性微珠。该方法的优点是微珠比表面积大,吸附能力强,能悬浮在液相中快速均匀的捕获样品中的待测物,通过外加磁场后能够实现微珠与样品液的快速分离,从而减少检测时间、提高检测灵敏度。

由于酶标试剂制备容易、稳定、价廉,酶免疫分析的灵敏度接近放射免疫技术,故近年来EIA技术发展很快,已开发了多种EIA方法。其中酶联免疫法(,ELISA)是目前农药残留检测中应用最广泛的酶免疫分析技术。

(3)荧光免疫分析法(fluorescenceimmunoassay,FIA)。FIA检测的基本原理是将抗原抗体的高度特异性与荧光的敏感可测性有机地结合,以荧光物质作为示踪剂标记抗体、抗原或半抗原分子,制备高质量的特异性荧光试剂。当抗原抗体结合物中的荧光物质受到紫外光或蓝光照射时,能够吸收光能进入激发态。当其从激发态回复基态时,能以电磁辐射形式放射出所吸收的光能,产生荧光。绘制农药浓度-荧光强度曲线,可以定性、定量检测样品中的农药残留量。

适用于抗体、抗原或半抗原分子标记的荧光素须符合要求:①应具有能与蛋白质分子形成稳定共价键的化学基团,或易转变成这类反应形式而不破坏其荧光结构;②标记后,荧光素与抗体或抗原各自的化学结构和性质均不发生改变;③荧光效率高,与蛋白质结合的需要量很少;④荧光素与蛋白质结合的过程简单、快速,游离的荧光素及其降解产物容易除去;⑤结合物在一般储存条件下性能稳定,可保存使用较长时间。

(4)化学发光免疫分析法(luminescentimmunoassay,LCIA)。LCIA又可分为化学发光免疫测定(chemiluminescentimmunoassay,CLCIA)和生物发光免疫测定(bio-luminescentImmunoassay,BLCIA)。

1976年,Shroeder首先用生物素(B)-亲和素(A)系统建立了均相化学发光免疫测定技术,尔后Halman和Velan又将其引伸到非均相体系,现已渗入到生物学研究的各个领域。其原理是以发光指示抗原与抗体的结合,当发光标记物与相应的抗体或抗原结合后,底物与酶作用,或与发光剂产生氧化还原反应,或使荧光物质(例如红荧烯等)激发,释放光能。最后用光度计测定其发光强度,进行定量分析。常用发光标记物有辣根过氧化物酶(HRP)、鲁米诺(luminol)、异鲁米诺(isoluminol)、咯粉碱(lophine)、光泽精(lucigen)、双(2、4、6-三氯苯)草酸酯、联苯三酚和6[N-(4-二氨基丁基)-N-乙基]-氨基-2,3-二氢吩嗪-1,4-二酮(ABEI)等。用上述发光标记物标记的抗体(或抗原)在一定的pH缓冲溶液中与相应的抗原(或抗体)结合时,在协同因子(例如H2O2等)的作用下发光,其发光强度与被测物的浓度成正比,故可以用于定量分析。

发光免疫测定具有特异性强、灵敏度高(检测限量达10-15mol/L)、快速(1~3h)、发光材料易得等优点。但其发光过程和强度常受到发光物质本身的化学结构、介质的pH、协同发光物质和金属离子杂质等影响。

(5)金免疫层析分析法(goldimmuno-chromatographyassay,GICA)。GICA检测原理是将配体(抗体或抗原)以线状包被固化于硝酸纤维素膜等微孔薄膜上,胶体金标记另以配体或其他物质并以干态固定在吸水材料上,通过毛细作用,使样品溶液在层析条上泳动,当泳动至胶体金标记物处时,如样品中含有待检受体,则发生第一步高度特异性的免疫反应,形成的免疫复合物继续泳动至线状包被区时,发生第二步高度特异性的免疫反应,形成的免疫复合物被截留在包被的线状区,通过标记的胶体金而显红色条带(检测带),而游离的标记物则越过检测带,与结合的标记物自动分离。通过检测带上颜色的有无或色泽深浅来实现定性或定量测定2。

2金标试纸条检测

GICA法具有快速(5~20min)、廉价、结果明确、无需复杂操作技巧和特殊设备、携带方便等优点。但相对于其他免疫分析方法,该方法检测灵敏度稍低,主要适合现场快速定性或半定量测定。目前该方法已被应用于医学和生物学等众多研究领域,尤其在发达国家已经得到了广泛的应用。

(6)免疫分析与仪器分析技术的联用技术。使用单一的IA技术进行农药残留分析获得的信息量少,而理化分析方法的选择性又比较差。Kramer等人将免疫分析法和液相色谱法(LC)联合起来使用,从而简化了分析方法,提高了检测效率。LC-IA的联用,将LC的高分离能力和IA的高灵敏性和高特异性融为一体。该分析法尤其适合多组分残留分析和微量分析。免疫分析与气相色谱/质谱(GC/MS)的联用可减少结构相似的农药或代谢产物分析中的交叉反应,以降低假阳性。

㈢ 化学发光法和酶联免疫法的区别

1、原理上的区别

化学发光法依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理,利用仪器对体系化学发光强度的检测,而确定待测物含量。

酶联免疫法原理是在测定时把受检标本和酶标抗原或抗体与固相载体表面的抗原或抗体起反应加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。

2、分类上的区别

化学发光法依据供能反应的特点,可将化学发光分析法分为普通化学发光分析法,供能反应为一般化学反应;生物化学发光分析法,供能反应为生物化学反应;电致化学发光分析法,供能反应为电化学反应。根据测定方法又可分为直接测定CL分析法、偶合反应CL分析法等。

酶联免疫法根据测定方法可分为双抗体夹心法;双位点一步法;间接法测抗体法,利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体;竞争法,以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。

3、作用上的区别

化学发光法在痕量金属离子、各类无机化合物、有机化合物分析及生物领域都有广泛的应用。

酶联免疫法可用于测定抗原,也可用于测定抗体,ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题 。

㈣ 化学发光包括哪些方法

化学发光是物质在进行化学反应过程中伴随的一种光辐射现象,可以分为直接发光和间接发光。直接发光是最简单的化学发光反应,有两个关键步骤组成:即激发和辐射。如A、B两种物质发生化学反应生成C物质,反应释放的能量被C物质的分子吸收并跃迁至激发态C*,处于激发的C*在回到基态的过程中产生光辐射。这里C*是发光体,此过程中由于C直接参与反应,故称直接化学发光。

㈤ 什么是化学发光分析方法

化学发光分析法就是对化学发光进行分析的。如伯乐生命的chemidoc
xrs+
系统与chemidoc
mp
系统就是进行化学发光分析法的。化学发光分析法具有灵敏度高、设备简单、操作方便、线性范围广、分析快、也便于实现自动化等优点。无论是测定微时金属元素、大气污染检测还是降低噪音等方面,都会运用化学发光分析法。
希望采纳

㈥ “化学发光法”指的是什么

化学发光法是利用化学发光测定化学发光反应反应物、催化剂、增敏剂、抑制剂,偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂的方法。
化学发光现象是一种常见的自然现象。
化学发光是物质在化学反应过程中,其物质分子吸收化学能产生光的辐射现象,如:REK-20N型化学发光定氮仪是兴化睿科采用化学发光检测原理,待测样品(或标样)被引入到高温裂解炉后,在1050℃左右的高温下,样品被完全气化并发生氧化裂解,其中的氮化物定量地转化为一氧化氮(NO)。样品气经过膜式干燥器脱去其中的水份。亚稳态的一氧化氮在反应室内与来自臭氧发生器的O3气体发生反应,转化为激发态的NO2*。当激发态的NO2*跃迁到基态时发射出光子,光信号由光电倍增管按特定波长检测接收。再经微电流放大器放大、计算机数据处理,即可转换为与光强度成正比的电信号。在一定的条件下,反应中的化学发光强度与一氧化氮的生成量成正比,而一氧化氮的量又与样品中的总氮含量成正比,故可以通过测定化学发光的强度来测定样品中的总氮含量。

㈦ 化学发光分析法的分类

化学发光分析法分为:
1、普通化学发光分析法 ( 供能反应为一般化学反应 ) ;
2、生物化学发光分析法 ( 供能反应为生物化学反应;简称 BCL) ;
3、电致化学发光分析法 ( 供能反应为电化学反应,简称 ECL) 等。
根据测定方法该法又可分为:
a、直接测定 CL 分析法;
b、偶合反应 CL 分析法 ( 通过反应的偶合,测定体系中某一组份;
c、时间分辨 CL 分析法 ( 即利用多组份对同一化学发光反应影响的时间差实现多组份测定 ) ;
d、固相、气相、掖相 CL 。分析法;
e、酵联免疫 CL 分析法等。

㈧ 化学发光免疫分析法有哪三类

1、直接化学发光,标记物为吖啶酯(雅培)或者ABEI(新产业)

2、酶促化学发光,标记物为碱性磷酸酶(厦门波生)或者辣根过氧化物酶(强生)

3、电化学发光,标记物为三联吡啶钌(罗氏)


注:括号内为代表厂家。

㈨ 目前化学发光检测方法有几种是不是有板式化学发光检测,磁微粒化学发光检测法等几种方法

不知道你是要问哪方面,是方法学?还是运行方式?还是说抗原抗体的包被方式?
方法学里边分为辉光和闪光,辉光就是发光的时间长,无需原位进样,常见的就是碱性磷酸酶和鲁米诺方法学。闪光就是发光的时间短,需原位进样,常见的就是吖啶酯方法学。还有一种是电化学发光和荧光学。
运行方式有板式和单管式。板式的需要集齐样本再做实验,单管式的是样本随来随做。
抗原抗体的包被方式常见的有有磁微粒和固相包被

㈩ 化学发光免疫分析法有哪三类

1、直接化学发光,标记物为吖啶酯(雅培)或者ABEI(新产业)
2、酶促化学发光,标记物为碱性磷酸酶(厦门波生)或者辣根过氧化物酶(强生)
3、电化学发光,标记物为三联吡啶钌(罗氏)
括号内为代表厂家

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