分析化学怎么测荧光

⑴ 荧光分光光度计测试步骤是怎么样的

测试步骤：
(一)样品准备

1.液体样品根据用户提供的技术指标，检查浓度范围是否合适，如果需要稀释，则要考虑所需溶剂类型和稀释倍数。

2.固体样品均匀粉末、片状或具有光滑平面的块状样品，均可直接测定。

(二)操作步骤

1.开机：接通电源，打开主机开关，点燃(打开)光源后，根据说明书要求启动计算机。

2.检测前准备：参照仪器说明书，在20天内至少进行一次激发校准和发射校准，检测前仪器应预热。

3.工作条件的选择：环境温度应在20℃±5℃;相对湿度不大于70%;电源稳定，无磁场、电场干扰。根据样品的特性及荧光强度，选择合适的仪器工作条件(如狭缝、PM增益、响应时间等)。

4.基本测定

(1)荧光激发光谱测定

设置仪器参数，扫描发射波长，找到maxλem，以此为发射波长，记录发射强度作为激发波长的函数，便得到激发光谱。

(2)荧光发射光谱测定

设置仪器参数，扫描激发波长，找到maxλex，以此为激发波长，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。

(3)差谱测定

设置仪器参数，选择合适的工作方式，测定背景溶液的发射光谱并储存起来，在一定的工作方式下，扫描样品溶液的发射波长，得到当时的光度值和储存的背景值之间的差示值，即差谱。

(4)峰面积积分

选择适当的工作方式，对样品溶液进行积分操作，即得到峰面积积分。

(5)荧光强度

选择合适的测量参数，设置λex、λem，采用定点读数或扫描方式，即可测得所选波长处的荧光强度。

(6)定量测定

配制一系列已知浓度的标准溶液，在一定的测定条件下，设置λex、λem，按照由稀至浓的次序，测定标准溶液的荧光强度，绘制荧光强度—浓度的工作曲线，不改变仪器参数测定未知溶液的荧光强度，由工作曲线即可求出未知溶液的浓度。

(三)分析结果的表述

1.荧光激发光谱、发射光谱以及其他光谱由仪器控制电脑直接绘出。

2.峰面积积分、荧光强度由仪器控制电脑计算显示。

3.定量测试：在相同的测定条件下，测定一系列已知浓度的标准溶液的荧光强度，绘制出荧光强度-浓度的工作曲线。浓度未知的溶液的荧光强度测定后，由工作曲线求出该溶液的浓度。

(四)注意事项

1.在实验开始前，应提前打开仪器预热，并配制好所需的溶液，对于已经配制好的溶液，在不用时放在4℃冰箱中保存，放置时间超过一星期的溶液要重新配制。

2.实验所用的样品池是四面透光的石英池，拿取的时候用手指掐住池体的上角部，不能接触到四个面，清洗样品池后应用擦镜纸对其四个面进行轻轻擦拭。

3.在测试样品时，注意荧光强度范围的设定不要太高，以免测得的荧光强度超过仪器的测定上限。

4.实验结束后，要及时的清理台面，处理废液，清洗和放置好样品池，将下次要用的溶液放回冰箱，并且按规定登记实验记录，养成良好的实验习惯。

⑵ 荧光分光光度计如何测荧光强度怎么测

荧光光度计的两个单色器是不同的，一个叫做激发单色器，一个叫做发射单色器。在光路中是这样的，光源灯发出的光进入激发单色器中，然后进入样品池，激发样品中的物质发射出荧光，然后在样品池中呈90°角的方向，发射出的荧光进入发射单色器，然后再进入接收器得到荧光强度。激发单色器是用来激发物质的荧光，在某个波长，被测物质有最大的吸收，和可见分光光度计类似。发射单色器是荧光在某个波长上荧光强度是最大的。一般被测物质的发射波长比激发波长大。

⑶ 荧光物含量测定方法的定量测定

荧光分析法的定量测定方法较多，可分为直接测定法和间接测定法两类。
a.直接测定法：
利用荧光分析法对被分析物质进行浓度测定，最简单的便是直接测定法。某些物质只要本身能发荧光，只须将含这类物质的样品作适当的前处理或分离除去干扰物质，即可通过测量它的荧光强度来测定其浓度。具体方法有两种。
1. 直接比较法：配制标准溶液的荧光强度Fx，已知标准溶液的浓度Cs，便可求得样品中待测荧光物质的含量。
如果空白溶液的荧光强度调不到零，则必须从Fs和Fx值中扣除空白溶液的荧光强度F0，然后进行计算。
2. 标准曲线法：将已知含量的标准品经过和样品同样处理后，配成一系列标准溶液，测定其荧光强度，以荧光强度对荧光物质含量绘制标准曲线。再测定样品溶液的荧光强度，由标准曲线便可求出样品中待测荧光物质的含量。
为了使各次所绘制的标准曲线能重合一致，每次应以同一标准溶液对仪器进行校正。如果该溶液在紫外光照射下不够稳定，则必须改用另一种稳定而荧光峰相近的标准溶液来进行校正。例如，测定维生素B1时，可用硫酸奎宁溶液作为基准校正仪器。
b、间接测定法：
有许多物质，它们本身不能发荧光，或者荧光量子产率很低，仅能显现非常微弱的荧光，无法直接测定，这时可采用间接测定方法。
间接测定方法有以下几种：
1.化学转化法：通过化学反应将非荧光物质变为适合于测定的荧光物质。例如金属与螯合剂反应生成具有荧光的螯合物。有机化合物可通过光化学反应、氧化还原、偶联、缩合反等应，使它们转化为荧光物质。
2.荧光猝灭法：这种方法是利用本身不发荧光的被分析物质能使某种荧光化合物的荧光猝灭的性质，通过测量荧光化合物荧光强度的下降，间接地测定该物质的浓度。
3.敏化发光法：对于很低浓度的分析物质，如果采用一般的荧s光测定方法，其荧光信号太弱而无法检测，可使用一种物质（敏化剂）以吸收激发光，然后将激发光能传递给发荧光的分析物质，从而提高被分析物质测定的灵敏度。

⑷ 样品分析的X荧光方法

(一)基本原理

如果样品中元素的特征X射线峰计数率与被激发元素的含量成直线关系，则采用已知含量的标准样品进行比较方法，很容易求得样品中元素的含量为

放射性勘探方法

式中：I_i为样品中待分析元素A的特征X射线谱峰的计数率；I_标为与样品处于相同几何条件下测得的标准标品中元素i的X射线谱峰计数率；C_标为标准样品中元素i的质量分数，%。

如果样品与标准样品两者之一的特征X射线峰计数率与元素含量是非线性关系，那么利用上式得到的含量，就受到很大歪曲，甚至是极端错误的。

为了保证分析线性关系及分析的精度，一般可采用以下方法。

1.饱和厚度样品法

对样品中待测元素受激发产生的特征X射线，当样品厚度增加，而特征X射线强度不再增加，则认为样品达到了饱和厚度。

由方程(4-8)式，假定d是无限厚度，于是方程可写成

放射性勘探方法

由此可见上式中μ_m(E_x)+μ_m(i)表示在厚样品情况下非线性影响是始终存在的。因此，有人认为不作任何校正的厚样品X射线谱分析只能是近似或半定量的。

如果样品是多成分的复杂样品，那么吸收系数将变得更加复杂。其总质量吸收系数等于各成分质量吸收系数和质量分数乘积之和，即

放射性勘探方法

代入(4-38)式，可得

放射性勘探方法

岩石、矿石样品都是多成分样品，需要考虑到每个元素与荧光辐射和初始辐射光子的相互作用，产生吸收或激发(包括二次激发或三次激发)。测得的待测元素的荧光计数是受到吸收或增强效应的影响之后的结果，这样就会使I_i与C_i之间原来的正比关系受到了歪曲。

在这种情况下，只有标准样品成分与分析样品成分一致的时候，用公式(4-38)计算的含量才是正确的。这是很有局限性的，也是很重要的。特别对轻便X射线谱分析仪的应用，包括现场测量和样品分析，在大多数情况下就是这样取得的分析结果的。

2.薄样品

如ρd很小，也就是[μ_m(E_x)+μ_m(i)]ρ·d≤1，于是(4-8)式指数可取近似，即

exp{-[μ_m(E_x)+μ_m(i)]ρ·d}≈1-[μ_m(E_x)+μ_m(i)]

由方程(4-8)式代入替换后可得

放射性勘探方法

式中k=ηI₀(E_x)；M_i=ρdC_i为单位面积上元素i的质量，常用mg/cm²表示。

(4-41)式表明，只要样品薄到[μ_m(E_x)+μ_m(i)]ρ·d≤1时，测得的样品中待测元素的荧光计数I_i与单位面积上元素质量成线性关素。也就是说，无论是初始射线或荧光射线，都不被吸收，实际上消除了基体效应。也可以认为，薄样品中每一个原子发射的特征X射线与另一个原子无关，因此没有吸收或增强效应。

(二)样品测量方法

1.样品制备

厚样品制备比较简单，对于固体的岩矿样品、土壤样品等，一般粉碎到200目以下，混合均匀装入底上蒙有一层6～10μm聚酯膜的样品盒中压平(应为饱和层厚度)，即可测量。或者加入适量黏合剂，在压片机下压成圆片。如果是液体样品，可以直接装入样品杯中进行测量。

薄样品制备复杂得多，提出的制作方法也很多，主要可分为湿式和干式两类，现简单介绍几种样品制备方法。

1)将矿样磨成小于200目的粉末，放入含有5/105火棉胶的乙醚(85%)和乙醇(15%)混合溶液中，倒入拉平的聚酯镀铝薄膜上，并放在已仔细调平的水平台上，等乙醚挥发后即成。

2)由2份聚甲基丙烯酸甲酯，3份聚丁烯丙烯甲酯，7.5份甲苯和少量添加剂混合制成一种聚合溶液，可以保存多年待用。使用时一般每次取25mL，加入粉末样品(大约1.5～2.5g)，在0.5L左右的金属容器中同时放入1/8in直径的钢球盖好，放在振动器上振动20min，使其均匀分散，然后在聚酯膜上制成薄约50μm厚层。再烘干1min即成小于25μm的薄膜；再制成1/4in直径圆片进行测量；要注意的是样品与标准样品均要仔细称量。

3)溶解成膜方法。将矿粉先用HCl溶解成溶液，再加入聚乙烯醇混合后取该溶液1mL，放在直径47mm的滤纸上，安装在一个聚四氟乙烯片上，用红外灯干燥后测量。

4)使粉末样品沉积在微孔滤纸上制成薄样品。这个方法是先制成一个如图4-11所示的薄样品收集器，将样品研磨到325目放入真空瓶，同时在过滤器上放置一个直径2.5cm的0.8μm微孔滤纸，盖好橡皮盖，开动真空泵，进入的空气由快速活塞控制，成脉冲式进气，吹动样品成粉尘，使之在滤纸上沉积，即可获得需要的薄样品。

图4-11 粉末薄样品收集器

2.样品的测量方法

使用高能量分辨率的半导体探测器多道X射线能谱仪分析样品，主要测量样品中受激发元素发射的X射线特征能量峰，与标准样品比较，按(4-37)式计算元素含量。

3.仪器刻度

多道X射线能量谱的刻度与γ能谱仪的刻度要求是一样的，包括能量刻度和效率刻度。

能量刻度，主要是检查仪器的线性程度，线性好，定性确定元素比较准确。X射线多道谱仪能量刻度的单能辐射源比较容易得到。因为只要选用低能γ放射源激发纯元素的特征X射线，即可用来刻度仪器，容易做到能量峰分布均匀。

效率刻度是能量色散定量准确分析的基础。与所有γ射线能谱分析一样，必须受到重视，长期以来只重视增强、吸收基体效应校正，对效率刻度重视不够。

4.标准样品与标准工作曲线

标准样品是用来与待测样品进行比较分析用的已知元素含量样品，(4-37)式表明了这个关系，无论是薄样品或者厚样品都是如此。(4-41)式表明薄样品荧光峰计数与样品中待测元素含量呈线性关系，与样品中物质成分无关。因此，一个标准样品可以适用于任何成分的待测样品，只要测量几何条件一致、称量准确、没有其他谱线干扰，就可以获得满意的分析结果。

标准工作曲线的制作是：选一套含量由低到高的标准样品，其元素组成与待测样品相近似，在与样品测量相同的条件下进行测量；获得标准样品含量与X荧光计数率的校正曲线，由此曲线就可以根据相同条件下的样品测量的荧光计数率，在标准曲线上求得相应的待测元素含量。

⑸ 荧光分光光度计测试荧光强度与哪些条件有关

待测物质方面
1.含共轭π键体系，体系越大荧光越强
2.刚性平面构型，刚性平面越大，荧光强度越大
3.取代基的影响，给电子取代基加强，吸电子取代基减弱
4.最低电子激发单重态性质，π-π*跃迁比n-π*跃迁产生更强的荧光
环境方面
1.溶剂，溶剂弛豫造成吸收发射间的能极差，溶剂的极性增大会使荧光光谱发生红移，氢键也有一定影响
2.介质酸碱性，视待测物的酸碱性与结构而定
3.介质的温度和黏度，温度越高强度越小，黏度越大强度越大
4.有序介质（如表面活性剂）的影响，有序介质的存在会使强度增大
经供参考

⑹ 电致发光光谱原理及用什么仪器检测

电致化学发光检测仪应用领域: 药物、氨基酸、多肽、蛋白质及核酸检测分析
蛋白质与药物、核酸相互作用研究。
荧光分光光度计能测定：FS-2型FS-2型荧光分光光度计

荧光是荧光分子受到较短波长光的激发而发出较长波长荧光的一种现象。荧光激发光谱反映了激发波长和荧光强度的关系；荧光发射光谱反映了发射波长和荧光强度的关系。
相对于其他光学检测器，荧光检测器具有如下三个优点：高灵敏度，快速，安全。安全是指在测量过程中样品不会受到影响或者破坏，同时也没有危险的副产物生成。
灵敏度是一个重要的技术指标，因为荧光的强度和被测物质的浓度成一定的比例而细胞中离子浓度的很小的改变都会产生重大的生理影响。因此吸光光度法能够检测到几个十分之一微摩尔的物质而荧光光度法可以准确测量吸光光度法百万分之一(皮摩尔或者飞摩尔)的物质，数量级可达到10-18摩尔。利用荧光技术，可以测量物质浓度的快速变化，可以测量皮秒内的荧光强度的变化。
因为荧光技术是一种安全的技术，所以荧光不会对样品造成影响。激发光要求产生荧光强度要低并且要减少光源的影响并且生物物质可以在不受外来影响的自然生理条件下测量。
FluoroMate FS-2的构造
FluoroMate FS-2是由光源，激发和发射单色器和检测器，样品测量部分。150W的氙灯提供200-900NM的光源。光在样品前部被分光器分成两部分，一束光照射样品后通过光电二极管来检测激发能量。发射光在通过单色器后被PMT检测器检测，为了放大信号，我们使用了光电倍增管（PMT）检测器。
应用：
FluoroMate FS-2是高性能和高精确度的仪器，可以广泛应用到如下领域：
1． 生命科学
基础生物反应研究，低体积样品的测量，偏振现象和各向异性的研究
2． 医药和医学
痕量水平抗生素的测量，核酸，蛋白和病毒的结构分析
3． 分析化学
荧光物质的鉴别和测量，溶剂效应，光子产率和寿命，化学反应
4． 环境领域
空气，水，土壤中的有机和无机氧化物的鉴别和测量
5． 工业
食品中的营养物质量；油漆，聚合物，光学增白剂和荧光涂料；原油质量
6． 光化学
激发状态的表征，胶束结构，胶团的反应动力学。
技术参数
1.光源: 150W 氙灯
2.波长范围: 200 nm-900nm
3.灵敏度：S/N>500(峰对峰)
4.光栅: 1200grooves/250 nm blazing
5.波长扫描速度: 最大5000 nm/min
6.波长驱动器速度: 10,000 nm/min
7.波长精确度:+ 2 nm
8.波长重复性:+ 2 nm
9.狭缝宽度: 1，2，5，10，20 nm
10.尺寸: 518mm(W)×604mm(D)×272mm(H)
11.重量: 43.7kg
12.电源: 100~132V 50/60 Hz或者180~240V 50/60 Hz（可选）
http://www.chem17.com/procts/show/562839.asp

⑺ 荧光现象怎么检测和收集

现在也可以用单光子雪崩二极管（SPAD）去做传感器。 然后通过时间相关单光子计数（TCSPC）来成像。 这种方法可以去测量荧光强度的同时更重要的是可以去检测荧光的寿命也就是荧光寿命成像（FLMI）。荧光团受激发后会以指数衰减的方式发射出荧光。从最强点衰减到将近37%（好像是1/e）光强需要的时间就是他的荧光寿命，这个荧光寿命可以用来检测细胞或者蛋白质的内环境 像ph值，离子浓度啊之类的。SPAD可以做到很小并做成阵列。这样的话就不一定像PMT那样扫描了，厉害的话可以做成实时成像。现在荷兰那边和爱丁堡那边应该有做到512x512水平的SPAD阵列芯片。

⑻ 如何测定一种有机化合物是否具有荧光性质

如果化合物有紫外吸收，应该有荧光性质。
常温物质经紫外线或X射线照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光即荧光。。
荧光光谱有两个主要优点:第一是灵敏度高.由于荧光辐射的波长比激发光波长长,因此测量到的荧光频率与入射光的频率不同.另外,由于荧光光谱是发射光谱,可以在与入射光成直角的方向上检测,这样,荧光不受来自激发光的本底的干扰,灵敏度大大高于紫外-可见吸收光谱,测量用的样品量很少,且测量方法简便.第二,荧光光谱能提供较多的信息,例如激发谱,发射谱,峰位,峰强度,荧光寿命。

⑼ 荧光检测方法

荧光检测是一种自然发光反应，通过荧光素酶与 ATP进行反应，可检测人体细胞、细菌、霉菌、食物残渣，在15秒钟内得到反应结果。光照度通过专用设备进行测量，并以数字形式予以表示，在1975年首先被应用到食品工业中，在1985年在化妆品制造业中得到应用。
荧光定量：采用国际主流的荧光定量PCR技术，迅速提升技术水平。
结果稳定：检测结果CV值与进口全自动PCR仪接近，具有自检功能，避免错误数据的输出。
封闭操作：全部检测过程均为闭管操作，于反应管处检测荧光，有效防止污染，解决PCR技术中最棘手之难题。
准确定量：满足临床对量化的需求，定量荡围宽，可涵盖大部分病原微生物，自动曲线拟合。
灵敏度高：利用光谱信号灵敏性的优势，有效提高检测灵敏度。
安全：全程无毒检测。
操作简便：省去后处理的烦琐过程。
直接打印：直接打印结果，无须记录大量数据。
升级版：FS1000有与电脑连接的数传输口，可以连接电脑，根据用户需要提供先进分析软件，全面分析实验数据。（电脑和打印机选配件）
故障率低：维护非常简单。
节约资源：可利用现用PCR扩增仪，最大限度节约资源。