疫组织化学染色怎么做

⑴ 免疫组化及特殊染色 是啥意思

其为制成病理切片，将病变组织包埋在石蜡块里，用切片机切成薄片，进行染色。

病理切片是用组织病理学方法制作的一定大小的病理切片。病理组织包埋石蜡块，切片薄，苏木精－伊红（H－E）染色，在显微镜下进一步检查病变。观察病变的发生、发展，最后作出病理诊断。

部分病变组织或器官通过各种化学药品和埋葬方法进行处理，使其固定和硬化。在切片机上切成薄片，粘附于玻片上，染色后置于显微镜下观察病理变化，进行病理诊断，为临床诊断和治疗提供帮助。

(1)疫组织化学染色怎么做扩展阅读：

病理切片的相关内容：

1、根据各器官的组织结构确定切片方向。垂直或横向切割通常是显示组织形态的关键，如长管状器官。

2、根据解剖部位准确取样。病理标本应根据病理部位和性质的不同取样。

3、用锋利的刀剪开纸巾，不要来回剪文件。不要把组织夹得太紧，以免使组织、细胞因挤压而变形。

⑵ 酶免疫细胞如何进行化学染色

免疫细胞化学染色是将血液、骨髓液、浆膜腔积液等等各种体液组织制成的涂片和骨髓等组织的切片经各种单克隆抗体的标定和常用的过氧化物酶或碱性磷酸酶显色后对白血病细胞直接镜检，以确定细胞类型。
免疫组织化学染色方法繁多，可根据标记物的不同分为：免疫酶细胞化学染色、免疫荧光细胞化学染色、免疫金银染色技术以及亲合免疫组织化学染色技术等。目前血液系统疾病检查常用免疫细胞化学染色方法有三种：过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法、碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶（APAAP）法和亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC-AP）法。PAP法抗原、抗体反应及酶标原理与APAAP法完全相同，都属于免疫组织化学反应，只是所标记的酶不同。PAP法酶化学反应原理与ABC-AP法完全相同，但ABC-AP法为亲合免疫组织化学反应。在染色步骤及方法上PAP法和ABC-AP法完全相同。
免疫细胞化学能够识别抗原蛋白质一级结构中氨基酸的差别，从而对细胞结构、功能及细胞代谢等进行综合分析，确定细胞的类型、来源及细胞的分化阶段。应用骨髓切片免疫组织化学技术可以对骨髓细胞进行原位观察，通过对细胞特异性抗原的定性、定位和定量分析，了解骨髓组织和细胞的结构和变化，这对血液系统疾病尤其是血液系统肿瘤的诊断、鉴别诊断，以及血液肿瘤的分类、分型和预后的判断提供了有利的研究手段。

⑶ 免疫组化 如何复染（免疫组化，苏木精，盐酸，石

（一）、仪器设备

1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；2）水浴锅

（二）、试剂

1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L.

2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g.

3）0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0，加水至1000ml.

4）1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH8.0，加水至1000ml.

5）酶消化液： a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2（pH7.8） 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。

6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。

7）封裱剂：

a、甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（pH9.0～9.5）等量混合；

b、油和TBS（或PBS）配制。

8）TBS/PBS pH9.0～9.5，适用于荧光显微镜标本；pH7.0～7.4适合于光学显微镜标本。

（三）、操作流程

1、脱蜡和水化

脱蜡前，应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。

1）组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟；

2）无水乙醇中浸泡5分钟；

3）95%乙醇中浸泡5分钟；

4）70%乙醇中浸泡5分钟；

2、抗原修复

用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。

1）抗原热修复

（1）高压热修复 在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）。盖上不锈钢高压锅的盖子，但不进行锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡5分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后，去除热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。本方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。

（2）煮沸热修复 电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入组织芯片加热10~15分钟。

（3）微波热修复 在微波炉里加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至沸腾后将组织芯片放入，断电，间隔5~10分钟，反复1-2次。适用的抗原有：AR，Bax，Bcl-2，C-fos，X-jun，C-kit，C-myc，E-cadherin，Chromogranin A，Cyclin，ER，Heat shock protein，HPV，Ki-67，MDMZ，p53，p34，p16，p15，P-glycoprotein，PKC，PR，PCNA，ras，Rb，TopoismeraseⅡ等。

2）酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热至37℃，切片也预热至37℃，消化时间约为5~30分钟；胃蛋白酶消化37℃时间为30分钟。适用于被固定遮避的抗原，其中有：Collagen，Complement，Cytokeratin，C-erB-2，GFAP，LCA，LN等。

3、免疫组织化学染色

SP法

1）脱蜡、水化；

2）PBS洗2～3次各5分钟；

3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室温静置10分钟；

4）PBS洗2～3次各5分钟； 5）抗原修复；

6）PBS洗2～3次各5分钟；

7）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。

8）滴加Ⅰ抗50μl，室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。

9）4℃过夜后需在37℃复温45分钟。

10）PBS洗3次各5分钟；

11）滴加Ⅱ抗40～50μl，室温静置，或37℃1小时；

12）II抗中可加入0.05%的tween-20.

13）PBS洗3次各5分钟；

14）DAB显色5～10分钟，在显微镜下掌握染色程度；

15）PBS或自来水冲洗10分钟；

16）苏木精复染2分钟，盐酸酒精分化；

17）自来水冲洗10～15分钟；

18）脱水、透明、封片、镜检。

SABC法

1）脱蜡、水化。

2）PBS洗两次各5分钟。

3）用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭5～10分钟，蒸馏水洗3次。

4）抗原修复。

5）PBS洗5分钟。

6）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。

7）滴加Ⅰ抗，室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45分钟）。

8）PBS洗三次每次2分钟。

9）滴加生物素化二抗，20℃～37℃20分钟。

10）PBC洗3次每次2分钟。

11）滴加试剂SABC，20℃～37℃20分钟。

12）PBS洗4次每次5分钟。

13）DAB显色：DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。

14）蒸馏水洗。苏木素复染2分钟、盐酸酒精分化。

15）脱水、透明、封片、镜检。

⑷ 常用免疫组织化学染色方法有哪些

常用免疫组织化学染色方法, LSAB法.(SP法)(Labelled streptavidim biotln) 1.切片脱蜡至水. 2.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟. 3.水洗. 4.抗原修复. 5.PBS洗3次,1分钟/次. 6.加入血清孵育10分钟. 7.摔去血清,加入一抗孵育30-60分钟. 8.PBS洗3次,每次2分钟.加入二抗,孵育20分钟. 9.PBS洗3次,每次2分钟. 10.加入SP复合物孵育20-30分钟. 11.PBS洗3次,每次2分钟. 12.DAB-H2O2孵育5-10分钟. 13.PBS洗,水洗. 14.Harris苏木素染核5-10分钟. 15.水洗,分化 ,蓝化,脱水,透明并封固.

⑸ 酶免疫细胞如何进行化学染色

免疫细胞化学染色是将血液、骨髓液、浆膜腔积液等等各种体液组织制成的涂片和骨髓等组织的切片经各种单克隆抗体的标定和常用的过氧化物酶或碱性磷酸酶显色后对白血病细胞直接镜检，以确定细胞类型。
免疫组织化学染色方法繁多，可根据标记物的不同分为：免疫酶细胞化学染色、免疫荧光细胞化学染色、免疫金银染色技术以及亲合免疫组织化学染色技术等。目前血液系统疾病检查常用免疫细胞化学染色方法有三种：过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法、碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶（APAAP）法和亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC-AP）法。PAP法抗原、抗体反应及酶标原理与APAAP法完全相同，都属于免疫组织化学反应，只是所标记的酶不同。PAP法酶化学反应原理与ABC-AP法完全相同，但ABC-AP法为亲合免疫组织化学反应。在染色步骤及方法上PAP法和ABC-AP法完全相同。
免疫细胞化学能够识别抗原蛋白质一级结构中氨基酸的差别，从而对细胞结构、功能及细胞代谢等进行综合分析，确定细胞的类型、来源及细胞的分化阶段。应用骨髓切片免疫组织化学技术可以对骨髓细胞进行原位观察，通过对细胞特异性抗原的定性、定位和定量分析，了解骨髓组织和细胞的结构和变化，这对血液系统疾病尤其是血液系统肿瘤的诊断、鉴别诊断，以及血液肿瘤的分类、分型和预后的判断提供了有利的研究手段。

⑹ 什么是免疫组化染色，它的原理和步骤是什么

是病理学诊断方法，尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可。
免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面：
(1)恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；
(2)确定转移性恶性肿瘤的原发部位；
(3)对某类肿瘤进行进一步的病理分型；
（4）软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；
（5）发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。
（6）为临床提供治疗方案的选择。

⑺ 免疫组织化学染色法的介绍

免疫组织化学染色法是指在抗体上结合萤光或可呈色的化学物质，利用免疫学原理中抗原和抗体间专一性的结合反应，检测细胞或组织中是否有目标抗原的存在，此方式不只可以用来测知抗原的表现量也可观察抗原所表现的位置。只要是能够让抗体结合的物质，也就是具有抗原性的物质包括蛋白质、核酸、多糖、病原体等都可侦测。免疫组织化学的优势在于专一性、灵敏度、简便快速以及成本低廉，所以广为医院采用，通常是借由特定的肿瘤标记来筛选癌症。免疫组织化学染色法对基础研究及预防和诊疗上都是相当重要的一个方法。