① 用薄层色谱法鉴别异黄酮时,一般展开剂用什么
摘 要 目的 探讨鉴别广金钱草黄酮和生物碱成分的方法。方法 应用薄层色谱法鉴别广金钱草黄酮和生物碱成分，黄酮采用ρ=3%AlCl3（乙醇）溶液显色，生物碱采用稀碘化铋钾试液显色。结果与结论 以薄层色谱鉴别广金钱草黄酮和生物碱成分，不同于一般化学鉴别（试管法），其分离效果较好，专属性强，具有实际参考价值。 关键词 广金钱草；薄层色谱鉴别；黄酮；生物碱广金钱草是豆科植物广金钱草Desmodium styracifolium (Osb.)Merr. 的干燥地上部分，为较常用中药［1，2］。中国药典2000年版收载有“清热除湿，利尿通淋”的作用［1］。对广金钱草的鉴别，文献主要介绍性状鉴别、显微鉴别及一般的化学鉴别（试管法） ［1，3］。本文以薄层色谱法鉴别广金钱草中的黄酮和生物碱成分，报道如下。1 仪器及试剂1.1 仪器 20 cm×10 cm双槽展开缸。1.2 试剂 薄层层析硅胶G(化学纯)，GF254(化学纯)，青岛海洋化工厂产品。 层析氧化铝（碱性），100～200目，上海社园精细有限公司产品。羧甲基纤维素钠，上海化学试剂分装，黏度2%水溶液为300～800 mPa/s。其余试剂均为分析纯。2 供试品及对照药材2.1 广金钱草药材购自采芝林药店北京路分店，经广东药学院药用植物与生药学教研室鉴定为豆科广金钱草Desmodium styracifolium (Osb.)Merr.（中国药典2000年版一部）的全草。2.2 广金钱草对照药材由广东省药品检验所中药室提供。3 广金钱草黄酮薄层色谱鉴别［2］取广金钱草粉末1 g，置圆底瓶中，加甲醇20 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，滤过，滤液用醋酸乙酯提取2次，每次10 mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取广金钱草对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2000版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一以ρ=0.3%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以ψ(醋酸乙酯∶甲酸∶水)=（8∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以ρ=3%AlCl3（乙醇）溶液［4,5］， 105 ℃加热约5 min，置紫外光灯（365 nm）下检视［6］，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1。4 广金钱草生物碱薄层色谱鉴别取广金钱草粉末1 g，置圆底瓶中，加浓氨溶液5 mL［6］，密塞，摇匀，放置30 min，加氯仿50 mL，加热回流2 h，取出放冷，分取氯仿液，药渣再用氯仿适量洗涤，合并氯仿液，用无水硫酸钠脱水，置水浴上蒸至约1 mL，加于碱性氧化铝柱（5 g，直径15 mm）上，用ψ(氯仿∶无水乙醇)=（1∶1）混合溶液50 mL洗脱［6］，收集洗脱液，置水浴上蒸至约1 mL，作为供试品溶液。另取广金钱草对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2000版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各4 μL，分别点于同一以ρ=3%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以ψ(苯∶丙酮∶甲醇)=（8∶3∶0.5）为展开剂，另槽用等量的浓氨溶液预平衡15 min，展开，取出，晾干。置254 nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的暗斑点；喷以稀碘化铋钾试液［6,8］，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
② 大豆异黄酮产品怎么辨别正品
我买保健品都会要具备这些我才会购买的：1、选择名牌或者品牌产品2、选择生产经营多年的产品3、选择产品标签上有明确的大豆异黄酮含量的产品4、选择有防伪标识的产品5、选择非转基因，天然原料提取的产品6、选择专业公司生产的产品。有了这些条件我才会放心。大豆异黄酮我一直是选购的紫一家的，效果真心不错，主要是现在活动期间，比我之前购买的还要实惠。好有送礼品、
③ 检识黄酮类化合物的常用化学方法有哪些
黄酮类化合物（flavonoids）是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮（flavone）结构的化合物。它们分子中有一个酮式羰基，第一位上的氧原子具碱性，能与强酸成盐，其羟基衍生物多具黄色，故又称黄碱素或黄酮。黄酮类化合物在植物体中通常与糖结合成苷类，小部分以游离态（苷元）的形式存在。绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物，它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防病等方面起着重要的作用。
盐酸-镁粉还原反应
取药材粉末少许与试管中，用乙醇或甲醇数毫升温浸提取，取提取液加镁粉少许振摇，滴加几滴浓盐酸，1-2min内即出现颜色。大多黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类显红-紫红色，黄酮类显橙色，异黄酮及查尔酮类无变化。如芦丁的盐酸镁粉反应中溶液由黄色变红色。
其他还原反应还有：盐酸-锌粉反应，黄酮、黄酮醇类常不显色，只有二氢黄酮醇类可被锌粉还原呈深红色；钠-汞齐反应，黄酮类成分可产生黄、橙、红等色；四氢硼钠（钾）反应，仅二氢黄酮醇类可被四氢硼钠还原呈红色，其他黄酮类不反应。
金属盐类试剂络合反应
黄酮类成分和铝盐、镁盐、铅盐、锆盐等试剂反应，生成有色的络合物，可供某些类型黄酮的鉴别。产生络合作用的条件是黄酮类成分必须具备下列条件之一，如5-羟基、3-羟基或邻二羟基。根据有色络合物的最大吸收波长，可进行定量测定。常用的试剂有三氯化铝、醋酸铅、醋酸镁与二氯氧化锆等试剂。
④ 如何用HNMR,谱区别黄酮、异黄酮及二氢黄酮c环上的质子
若是鉴别的话：
1.纸色谱（PC）：适用于分离各种天然黄酮类化合物及其苷类混合物。混合物的鉴定常采用双向色谱法。以黄酮苷类来说，一般第一向展开采用某种醇性溶剂，如正丁醇-醋酸-水（4：1：5，上层）等，主要是根据分配作用原理进行分离。第二向展开溶剂则用水或其他含水溶液，如2～6%醋酸等，主要是根据吸附作用原理进行分离。
黄酮类化合物苷元中，平面性分子如黄酮、黄酮醇、查耳酮等，用含水溶剂如3%～5%HOAC展开时，几乎停留在原点不动（Rf＜0.02）；而非平面性分子如二氢黄酮、二氢黄酮醇、二氢查耳酮等，因亲水性较强，Rf 值较大（ 0.10～0.30）。黄酮类化合物分子中羟基苷化后，极性随之增大，在醇性展开剂中Rf 值相应降低，同一类型苷元，Rf值依次为：苷元＞单糖苷＞双糖苷。但在用水或2～8%醋酸、3%氯化钠水溶液或1%盐酸展开时，则苷元几乎停留在原点不动，Rf 值大小顺序为：苷元＜单糖苷＜双糖苷。
2.硅胶薄层色谱：用于分离和鉴定弱极性黄酮类化合物。分离黄酮苷元常用的展开剂是甲苯-甲酸乙酯-甲酸（5：4：1）。
3.聚酰胺薄层色谱：特别适合于分离含游离酚羟基的黄酮及其苷类。展开剂中多含有醇、酸和水。
用紫外及可见光谱对黄酮类化合物进行结构测定的一般程序：
(1)测定样品在甲醇溶液中的UV光谱。
(2)测定样品在甲醇中加入各种诊断试剂后得到的UV及可见光谱。常用的诊断试剂有甲醇钠（NaOMe）、醋酸钠(NaOAc)、醋酸钠-硼酸(NaOAc-H3BO3 )、三氯化铝(AlCl3)、三氯化铝-盐酸(Al?鄄Cl3-HCl)等。
(3)样品如为黄酮苷类，需先进行水解或甲基化后水解，得到苷元或甲基化苷元，再测定苷元或其衍生物的UV光谱。
黄酮类化合物在甲醇溶液中的UV光谱特征:
1.黄酮及黄酮醇类：黄酮、黄酮醇等多数黄酮类化合物，因分子中存在桂皮酰基及苯甲酰基组成的交叉共轭体系，故其甲醇溶液在200～400nm的区域内存在两个主要的紫外吸收带，称为峰带Ⅰ（300～400nm）及峰带Ⅱ（220～280nm）。黄酮、黄酮醇可通过带I的最大吸收峰波长予以鉴别，小于350nm者为黄酮，而大于350nm者为黄酮醇。
2.查耳酮及橙酮类：共同特征是带Ⅰ很强，为主峰，而带Ⅱ较弱，为次强峰。查耳酮中，带Ⅱ位于220～270nm， 带Ⅰ位于340～390nm，有时分裂为Ⅰa (340～390nm)及Ⅰb（300～320nm）。
3.异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇：除有由A环苯甲酰基系统引起的带Ⅱ吸收（主峰）外，因B环不与吡喃酮环上的碳基共轭（或共轭很弱），带Ⅰ很弱，常在主峰的长波方向处有一肩峰。根据主峰的位置，可以区别异黄酮与二氢黄酮及二氢黄酮醇。前者在245～270nm，后者在270～295nm。
黄酮类化合物的1HMNR谱主要特征:
一、A环质子
1.5,7-二羟基黄酮：H-6及H-8将分别作为二重峰（J=2.5Hz），出现在δ5.7～6.9区域内，且H-6总是比H-8位于高场。
2.7-羟基黄酮：A环上有H-5、H-6、H-8三个芳香质子。H-5因有C-4位羰基强烈的负屏蔽效应的影响，以及H-6的邻偶作用，将作为一个二重峰（J=9.0Hz）出现在δ8.0左右。H-6因有H-5的邻偶（J=9.0Hz）及H-8的间偶（J=2.5Hz）作用，将表现为一个双二重峰。H-8 因有H-6的间位偶合作用，显现为一个裂距较小的二重峰（J=2.5Hz）。
二、B环质子
1.4’-氧取代黄酮：B环质子分为H-3’，H-5’和H-2’，H-6’两组，各以相当于2个氢的双峰信号（（J=8.5Hz）出现在δ6.5～7.9区域。H-3’，H-5’的化学位移总是比H-2’，H-6’的化学位移值小，原因是有4’-OR取代基的屏蔽作用，以及C环对H-2’，H-6’的负屏蔽效应。
2.3’,4’,5’-三氧取代黄酮类：当B环有3’,4’,5’-羟基时，则H-2’及H-6’将作为相当于两上质子的一个单峰，出现在δ6.50～7.50范围内。
三、C环质子
1.黄酮类：H-3常常作为一个尖锐的单峰信号出现在δ6.30处。
2.异黄酮类：异黄酮上的H-2，因正好位于羰基的β位，且通过碳和氧相接，故将作为一个单峰出现在比一般芳香质子较低的磁场区（δ7.60～7.80）。
3.二氢黄酮及二氢黄酮醇类
①二氢黄酮类：H-2与两个磁不等同的H-3偶合（Jtrans=11.0Hz，Jcis=5.0Hz），故作为一个双二重峰出现，中心位于δ5.2处。两个H-3，因有相互偕偶（J=17.0Hz）及H-2的邻偶，将分别作为一个双二重峰出现，中心位于δ2.80处，但往往相互重迭。
②二氢黄酮醇类：在天然存在的二氢黄酮醇中，H-2及H-3多为反式二直立键，故分别作为一个二重峰出现（J=11.0Hz）。H-2位于δ4.9前后，H-3则位于δ4.30左右。
流化喷雾干燥是近十年来迅速发展的一种制粒技术。该技术利用流化床干燥器使粉末呈流化态，再喷洒药液（或黏合剂），使之与粉末黏合成颗粒。其将浸膏与粉末混合、干燥、粉碎、制粒等工序合并在一起，具有工艺简单、减少污染机会、减轻劳动强度、可连续生产等优点。最近几年，各种符合GMP要求的流化干燥设备不断创新，使这项技术日趋成熟。
在该项研究中，技术人员采用FLP型流化造粒包衣机对全浸膏粉胶囊及部分生药粉加浸膏的胶囊，分别用流化喷雾干燥制粒工艺进行了小试制备。
首先，制备含生药加浸膏的养血胶囊，即将中药提取液浓缩至相对密度达1.15～1.18，将生药粉粉碎成细粉（100目），按生药粉∶浸膏为1∶1的重量比，将生药粉置流化床内，加热至80℃，抽风，使粉末流化，采用顶喷式喷洒浓缩液，50分钟后结束喷液，沸腾干燥15分钟，将所得颗粒分填胶囊。随后，制备全浸膏的清热胶囊，即将药液浓缩到相对密度1.14～1.18的范围，取该品种干浸膏细粉（100目），按浸膏粉∶浸膏液为1∶1的重量比，将上述浸膏粉置于流化床内，之后使药粉流化，喷洒药液，床内温度控制在40℃以下，50分钟后喷液完成，沸腾干燥15分钟，将所得颗粒分填胶囊。所得样品为均匀细粒状浅褐棕色粉末。
研究表明，颗粒粒径与喷洒药液的雾化程度、喷洒过程中流化床内的温度有关。液滴大，温度低，颗粒粒径大；反之则小。用新工艺方法制备的颗粒粒径在45～60目之间，外观性状均较常规方法为好，颗粒均匀，颜色稍浅，溶散也较常规方法快。并且新工艺制得的颗粒剖面可见许多微孔。用这些细颗粒填充胶囊，流动性好，装量比常规制法稳定，装量差异小。研究人员对制备的细颗粒与传统工艺制得的颗粒按产品质量标准检验，结果表明，薄层分析的斑点以新工艺法明显清晰，这可能与两种方法加热时间长短不同对所含成分的影响有关。