‘壹’ 化学发光免疫分析法有哪三类
1、化学发光免疫分析,是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发扰搜光剂。标记物为吖啶酯(雅培)或者ABEI(新产业);
2、化学发光酶免疫分析,是以酶标记生物活性物质进李李尺行免疫反应,免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光,用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP )和碱性磷酸酶(ALP ),它们有各自的发光底哪高物。HRP 最常用发光底物是鲁米诺及其衍生物 。标记物为碱性磷酸酶(厦门波生)或者辣根过氧化物酶(强生);
3、电化学发光免疫分析,电化学发光是指由电化学反应引起的化学发光过程。标记物为三联吡啶钌(罗氏)。
‘贰’ 化学发光有什么试剂
您好!
原理:
化学发光是物质在进行化学反应过程中伴随的一种光辐射现象,可以分为直接发光和间接发光。直接发光是最简单的化学发光反应,有两个关键步骤组成:即激发和辐射。如A、B两种物质发生化学反应生成C物质,反应释放的能量被C物质的分子吸收并跃迁至激发态C*,处于激发的C*在回到基态的过程中产生光辐射。这里C*是发光体,此过程中由于C直接参与反应,故称直接化学发光。
间接发光又称能量转移化学发光,它主要由三个步骤组成:首先反应物A和B反应生成激发态中间体C*(能量给予体);当C*分解时释放出能量转移给F(能量接受体),使F被激发而跃迁至激发态F*;最后,当F*跃迁回基态时,产生发光。
化学发光分析测定的物质可以分为三类:第一类物质是化学发光反应中的反应物;第二类物质是化学发光反应中的催化剂、增敏剂或抑制剂;第三类物质是偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂等。这三类物质还可以通过标记方式用来测定其他物质,进一步扩大化学发光分析的应用范围。
物质:
萤火虫、蜡蝉等昆虫体内化学组分(如腺苷酰萤光素等)的发光作用。
‘叁’ 化学发光剂的常用发光剂
酶促反应的发光底物
酶促反应的发光底物是指经酶的降解作用而发出光的一类发光底物,目前化学发光酶免疫技术中常用的酶有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)。HRP的发光底物为鲁米诺或其衍生物和对-羟基苯乙酸。AP的发光底物为3-(2-螺旋金刚烷-4-甲氧基-4-甲基-4-(3-磷酸氧基)-苯基-1,2-二氧乙烷(AMPPD)和4-甲基伞形酮磷酸盐(4-MUP,荧光底物)。
(1).鲁米诺或其衍生物。 鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行,通常以0.1mol/L pH8.6Tris缓冲液作底物液。要注意是:首先,鲁米诺和H2O2在无HRP催化时也能缓慢自发发光,而在最后光强度测定中造成空白干扰,因而宜分别配制成2瓶试剂溶液,只在用前即刻混合;其次, HRP发光增强剂如某些酚试剂(如邻-碘酚)或萤火虫荧光素酶可增强HRP催化鲁米诺氧化的反应和延长发光时间,提高发光敏感度。
(2).对-羟基苯乙酸(HPA)。 对-羟基苯乙酸(HPA)在H2O2存在下被HRP氧化或氧化二聚体(荧光物质),在350nm激发光作用下,发出450nm波长的荧光,可用荧光光度计测量。
(3).AMPPD。 AMPPD在碱性条件下,被ALP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子,其有2-30min的分解半衰期,发出波长为470nm的持续性光,在15min时其强度达到高峰,15-60min内光强度保持相对稳定。
(4)4-MUP。 4-MUP被ALP催化生成4-甲基伞形酮,在360nm的激发光的作用下,发出448nm的荧光,用荧光光度计进行测量。
直接化学发光剂
直接化学发光剂不需酶的催化作用,只需改变溶液的pH等条件就能发光的物质,如吖啶酯(acridinium, AE)在有过氧化氢的稀碱溶液中即能发光。
电化学发光剂
电化学发光剂是指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质。化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+(图16-7)和电子供体三丙胺(TPA)在阳性电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价,成为强氧化剂,TPA失去电子后被氧化成阳离子自由基TPA+,它很不稳定,可自发地失去一个质子(H+),形成自由基TPA.,成为一种很强的还原剂,可将一个高能量的电子递给三价的[Ru(bpy)3]3+使其形成激发态的[Ru(bpy)3]2+.。激发态的三联吡啶钌不稳定,很快发射出一个波长为620nm的光子,回复到基态的三联吡啶钌。这一过程可在电极表面周而复始地进行,产生许多光子,使光信号增强。
‘肆’ ivd体外诊断检测中有哪些常用的发光底物发光剂
直接发给剂有吖啶酯、三联吡啶钌,酶促发光有鲁米诺,这些都是最常用的。
‘伍’ 直接化学发光常用的发光剂是
吖啶酯和三联吡啶钌。
吖啶闷颂碧酯是一类可用作化学发光标记物的化学物质,加入发光启动试剂后0.4s左右发射樱旅光强度达到最大,半衰期为0.9s左右。
三联吡啶钌其标记物的发光原理是,一蚂举种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应。
‘陆’ 使用酶促发光底物的是
使用酶促发光底物的是酶促反应发光剂。
酶促反应化学发光是利用标记酶的催化作用,使发光剂(底物)发光,这一类需酶催化后发光的发光剂 称为酶促反应发光剂。酶促化学发光灵敏度高,但速度慢,酶活性容易受外界影响,其代表性的发光物质有鲁米诺及其衍生物、AMPPD。
优点主要有:
1、背景发光低,信噪比高。
2、发光反应干扰因素少。
3、光释放快速集稿迅中、发光效率高、发光强度大。
4、易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少。
5、标记物稳定(在2-8 ℃下可保存数月之久)。
‘柒’ 化学发光剂有哪些,有哪些类型的试剂
光现象是一种常见的自然现象,利用光测定光反应反应物、催化剂、增敏剂、抑制剂,偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂的方法叫做光法。光是物质在化学反应过程中,其物质分子吸收化学能产生光的辐射现象。
‘捌’ 常见的化学发光反应体系有哪些
最常见的是鲁米诺及其衍生物-过氧化氢体系,其次,吖啶脂类如光泽精-过氧化氢体系,二氧杂环丁烷类如AMPPD在碱性知磷酸酶ALP的催化下分解,然后,还有过氧化草酰酯+染料体系,钌联吡啶道+TPA体系等等。除此之外还有版很多,像鲁米诺体系里的氧化剂未必只有过氧化氢,还有高锰酸钾、Br2、甲醛等等。催化剂也可以是过氧化物酶或者过渡金属离子还有就是诸如乙醇蒸汽、异丙醇蒸汽这些,在纳米金属粒子上也是可权以产生催化化学发光的。
‘玖’ 3-氨基邻苯二甲酰肼发光原理
3-氨基邻粗神苯二甲酰烂凳物肼发光原理?鲁米诺(3-氨基邻苯二甲酰肼),又名发光氨,饥液是黄色晶状粉末,不溶于水,溶于大部分极性有机溶剂。
2) 发光机理
在碱性条件下,被氧化剂氧化生成3-氨基邻苯二酸的激发态中间体,当其返回到基态过程中发出光子。
3) 优势
鲁米诺化学发光具有选择型好、简便、低成本、高灵敏及水溶性好等优点。
4) 新型鲁米诺类化学发光试剂。新型衍生物发光试剂的研究方向有两种:一种是在原有发光试剂的基础上进行结构改造,发现更优越的发光试剂;另一种是将不同的芳香环引入鲁米诺的氨基位置上,增加化学发光强度。常见的鲁米诺发光试剂包括有异鲁米诺异硫氰酸酯(ILITC)、N-(4-氨基丁基) -N-乙基异鲁米诺(ABEI)以及 4,5-二氨基邻苯二酰肼(DPH)等已经应用于很多领域。因为含有鲁米诺部分的发光试剂发光强度低而且合成困难,所以相关新型衍生物的报道不太多。
5) 应用
发光试剂运用夹心化学发光免疫分析(CLIA)与蛋白质的氨基共价结合,用于临床病人 HIV p24的免疫诊断。检测基于 HIV p24 抗原与生物素化的抗体(anti-p24mAb) 及发光试剂1标记的抗体 (anti-p24mAb)作用,形成一个夹心状的抗体-抗原-抗体免疫复合物,接着免疫复合物被包有链霉亲和素的磁性颗粒捕获,诱导化学发光而被检测。
‘拾’ 鲁米诺试剂是用来干嘛的
鲁米诺试剂除了用于生化检测中、羧酸和氨类化合物标记、金属离子检测外,还经常用刑侦血迹检测,灵敏度非常高。
我们常说的鲁米诺试剂是鲁迅芹米诺与过氧化氢(双氧水的主要成分)的混合物。
鲁米诺试剂使用识别血液的试剂,血迹即使被擦拭,血液中的血红素还是会残留下来,当鲁米诺试剂喷在血红素上,会与活性氧产生氧拿链化作用,释放出蓝紫色荧光。被称为鲁米诺反应。是鉴定血液用的有机物质。
鲁米诺试剂的特点及缺点:
鲁米诺是一种化学发光试剂,又可以叫做发光氨。通常温度下的物质状态为黄色晶体或者米黄色的粉末,且本身的性质很稳定。
一般常说的鲁米诺试剂就是鲁米诺与过氧化氢的混合物。鲁米诺的溶液具有显着的强酸性,会刺激人体器官,如眼睛、口鼻、皮肤、呼吸道等等。
鲁亩敏毕米诺有众所周知的缺点,例如缺乏特异性,这可能导致血液存在的假阳性指示,以及要求在完全黑暗的情况下进行测试以获得最佳结果。