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化学发光法与蛋白芯片法哪个更高级

发布时间:2022-05-12 08:32:07

⑴ 电化学发光法和电化学方法哪个灵敏度更高

这根本就是一种方法。都是罗氏的电化学发光法,业内简称就说电化学。

⑵ 化学发光法和酶联法哪个检查准确

化学发光法检查更准确

化学发光法采用化学发光燃料进行测试的方法,灵敏度高,分析方法简单快捷,检测时间短及诊断范围宽等优点,相对于酶联法,化学发光法检查更准确。

化学发光法主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理,利用仪器对体系化学发光强度的检测,而确定待测物含量的一种痕量分析方法。

(2)化学发光法与蛋白芯片法哪个更高级扩展阅读:

一、化学发光法分类:

1、依据供能反应的特点,可将化学发光分析法分为:

1)普通化学发光分析法(供能反应为一般化学反应);

2)生物化学发光分析法(供能反应为生物化学反应;简称BCL);

3)电致化学发光分析法(供能反应为电化学反应,简称ECL)等。

2、根据测定方法该法又可分为:

1)直接测定CL分析法;

2)偶合反应CL分析法(通过反应的偶合,测定体系中某一组份);

3)时间分辨CL分析法(即利用多组份对同一化学发光反应影响的时间差实现多组份测定);

4)固相、气相、液相CL分析法;

5)酵联免疫CL分析法等

二、酶联法实验步骤

1、将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应,后加入酶标抗体与免疫复合物结合,用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离的未结合成分。

2、加入酶反应底物,根据底物被酶催化产生的颜色及其吸光度(A)值的大小进行定性或定量分析的方法, 步骤其实很简单:ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清。

3、将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品,这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内。

4、经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。

⑶ 生物芯片的定义\原理\作用\应用领域

生物芯片技术是随着"人类基因组计划"(human genome project, HGP)的进展而发展起来的,它是90年代中期以来影响最深远的重大科技进展之一,它融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的高度交叉的新技术,具有重大的基础研究价值,又具有明显的产业化前景。生物芯片技术包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片、以及元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、生物传感芯片等新型生物芯片(1)。本文主要讨论基因芯片技术,它为"后基因组计划"时期基因功能的研究提供了强有力的工具,将会使基因诊断、药物筛选、给药个性化等方面取得重大突破,该技术被评为1998年度世界十大科技进展之一。

1 基本概念

基因芯片(gene chip)也叫DNA芯片、DNA微阵列(DNA microarray)、寡核苷酸阵列(oligonucleotide array),是指采用原位合成(in situ synthesis)或显微打印手段,将数以万计的DNA探针固化于支持物表面上,产生二维DNA探针阵列,然后与标记的样品进行杂交,通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测或医学诊断,由于常用硅芯片作为固相支持物,且在制备过程运用了计算机芯片的制备技术,所以称之为基因芯片技术。

2 技术基本过程

2.1 DNA方阵的构建

选择硅片、玻璃片、瓷片或聚丙烯膜、尼龙膜等支持物,并作相应处理,然后采用光导化学合成和照相平板印刷技术可在硅片等表面合成寡核苷酸探针;(2)或者通过液相化学合成寡核苷酸链探针,或PCR技术扩增基因序列,再纯化、定量分析,由阵列复制器(arraying and replicating device ARD),或阵列机(arrayer)及电脑控制的机器人,准确、快速地将不同探针样品定量点样于带正电荷的尼龙膜或硅片等相应位置上,再由紫外线交联固定后即得到DNA微阵列或芯片(3)。

2.2 样品DNA或mRNA的准备。

从血液或活组织中获取的DNA/mRNA样品在标记成为探针以前必须进行扩增提高阅读灵敏度。Mosaic Technologies公司发展了一种固相PCR系统,好于传统PCR技术,他们在靶DNA上设计一对双向引物,将其排列在丙烯酰胺薄膜上,这种方法无交叉污染且省去液相处理的繁锁;Lynx Therapeutics公司提出另一个革新的方法,即大规模平行固相克隆(massively parallel solid-phase cloning)这个方法可以对一个样品中数以万计的DNA片段同时进行克隆,且不必分离和单独处理每个克隆,使样品扩增更为有效快速(4)。

在PCR扩增过程中,必须同时进行样品标记,标记方法有荧光标记法、生物素标记法、同位素标记法等。

2.3 分子杂交

样品DNA与探针DNA互补杂交要根据探针的类型和长度以及芯片的应用来选择、优化杂交条件。如用于基因表达监测,杂交的严格性较低、低温、时间长、盐浓度高;若用于突变检测,则杂交条件相反(5)。芯片分子杂交的特点是探针固化,样品荧光标记,一次可以对大量生物样品进行检测分析,杂交过程只要30min。美国Nangon公司采用控制电场的方式,使分子杂交速度缩到1min,甚至几秒钟(6)。德国癌症研究院的Jorg Hoheisel等认为以肽核酸(PNA)为探针效果更好。

2.4 杂交图谱的检测和分析

用激光激发芯片上的样品发射荧光,严格配对的杂交分子,其热力学稳定性较高,荧光强;不完全杂交的双键分子热力学稳定性低,荧光信号弱(不到前者的1/35~1/5)(2),不杂交的无荧光。不同位点信号被激光共焦显微镜,或落射荧光显微镜等检测到,由计算机软件处理分析,得到有关基因图谱。目前,如质谱法、化学发光法、光导纤维法等更灵敏`、快速,有取代荧光法的趋势。

3 应用

3.1 测序

基因芯片利用固定探针与样品进行分子杂交产生的杂交图谱而排列出待测样品的序列,这种测定方法快速而具有十分诱人的前景。Mark chee等用含135000个寡核苷酸探针的阵列测定了全长为16.6kb的人线粒体基因组序列,准确率达99%(7)。Hacia等用含有48000个寡核苷酸的高密度微阵列分析了黑猩猩和人BRCA1基因序列差异,结果发现在外显子11约3.4kb长度范围内的核酸序列同源性在98.2%到83.5%之间,提示了二者在进化上的高度相似性(8)。

3.2 基因表达水平的检测。

用基因芯片进行的表达水平检测可自动、快速地检测出成千上万个基因的表达情况。Schena等采用拟南芥基因组内共45个基因的cDNA微阵列(其中14个为完全序列,31个为EST),检测该植物的根、叶组织内这些基因的表达水平,用不同颜色的荧光素标记逆转录产物后分别与该微阵列杂交,经激光共聚焦显微扫描,发现该植物根和叶组织中存在26个基因的表达差异,而参与叶绿素合成的CAB1基因在叶组织较根组织表达高500倍。(9)Schena等用人外周血淋巴细胞的cDNA文库构建一个代表1046个基因的cDNA微阵列,来检测体外培养的T细胞对热休克反应后不同基因表达的差异,发现有5个基因在处理后存在非常明显的高表达,11个基因中度表达增加和6个基因表达明显抑制。该结果还用荧光素交换标记对照和处理组及RNA印迹方法证实(10)。在HGP完成之后,用于检测在不同生理、病理条件下的人类所有基因表达变化的基因组芯片为期不远了(11)。

3.3 基因诊断

从正常人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出标准图谱。从病人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出病变图谱。通过比较、分析这两种图谱,就可以得出病变的DNA信息。这种基因芯片诊断技术以其快速、高效、敏感、经济、平行化、自动化等特点,将成为一项现代化诊断新技术。例如,Affymetrix公司,把P53基因全长序列和已知突变的探针集成在芯片上,制成P53基因芯片,将在癌症早期诊断中发挥作用。又如,Heller等构建了96个基因的cDNA微阵,用于检测分析风湿性关节炎(RA)相关的基因,以探讨DNA芯片在感染性疾病诊断方面的应用(12)。现在,肝炎病毒检测诊断芯片、结核杆菌耐药性检测芯片、多种恶性肿瘤相关病毒基因芯片等一系列诊断芯片逐步开始进入市场。基因诊断是基因芯片中最具有商业化价值的应用。

3.4 药物筛选

如何分离和鉴定药的有效成份是目前中药产业和传统的西药开发遇到的重大障碍,基因芯片技术是解决这一障碍的有效手段,它能够大规模地筛选、通用性强,能够从基因水平解释药物的作用机理,即可以利用基因芯片分析用药前后机体的不同组织、器官基因表达的差异。如果再用m RNA 构建c DNA表达文库,然后用得到的肽库制作肽芯片,则可以从众多的药物成分中筛选到起作用的部分物质。或者,利用RNA、单链DNA有很大的柔性,能形成复杂的空间结构,更有利与靶分子相结合,可将核酸库中的RNA或单链DNA固定在芯片上,然后与靶蛋白孵育,形成蛋白质-RNA或蛋白质-DNA复合物,可以筛选特异的药物蛋白或核酸,因此芯片技术和RNA库的结合在药物筛选中将得到广泛应用。在寻找HIV药物中,Jellis等用组合化学合成及DNA芯片技术筛选了654536种硫代磷酸八聚核苷酸,并从中确定了具有XXG4XX样结构的抑制物,实验表明,这种筛选物对HIV感染细胞有明显阻断作用。(13)生物芯片技术使得药物筛选,靶基因鉴别和新药测试的速度大大提高,成本大大降低。基因芯片药物筛选技术工作目前刚刚起步,美国很多制药公司已开始前期工作,即正在建立表达谱数据库,从而为药物筛选提供各种靶基因及分析手段。这一技术具有很大的潜在应用价值。

3.5 给药个性化

临床上,同样药物的剂量对病人甲有效可能对病人乙不起作用,而对病人丙则可能有副作用。在药物疗效与副作用方面,病人的反应差异很大。这主要是由于病人遗传学上存在差异,如药物应答基因,导致对药物产生不同的反应。例如细胞色素P450酶与大约25%广泛使用的药物的代谢有关,如果病人该酶的基因发生突变就会对降压药异喹胍产生明显的副作用,大约5%~10%的高加索人缺乏该酶基因的活性。现已弄清楚这类基因存在广泛变异,这些变异除对药物产生不同反应外,还与易犯各种疾病如肿瘤、自身免疫病和帕金森病有关。如果利用基因芯片技术对患者先进行诊断,再开处方,就可对病人实施个体优化治疗。另一方面,在治疗中,很多同种疾病的具体病因是因人而异的,用药也应因人而异。例如乙肝有较多亚型,HBV基因的多个位点如S,P及C基因区易发生变异。若用乙肝病毒基因多态性检测芯片每隔一段时间就检测一次,这对指导用药防止乙肝病毒耐药性很有意义。又如,现用于治疗AIDS的药物主要是病毒逆转录酶RT和蛋白酶PRO的抑制剂,但在用药3-12月后常出现耐药,其原因是rt、pro基因产生一个或多个点突变。Rt基因四个常见突变位点是Asp67→Asn、Lys70→Arg、Thr215→Phe、Tyr和Lys219→Glu,四个位点均突变较单一位点突变后对药物的耐受能力成百倍增加(14)。如将这些基因突变部位的全部序列构建为DNA芯片,则可快速地检测病人是这一个或那一个或多个基因发生突变,从而可对症下药,所以对指导治疗和预后有很大的意义。

此外,基因芯片在新基因发现、药物基因组图、中药物种鉴定、DNA计算机研究等方面都有巨大应用价值。

4 基因芯片国内外现状和前景

自从1996年美国Affymetrix公司成功地制作出世界上首批用于药物筛选和实验室试验用的生物芯片,并制作出芯片系统(15),此后世界各国在芯片研究方面快速前进,不断有新的突破。美国的Hyseq公司、Syntexi公司、Nanogen公司、Incyte公司及日本、欧洲各国都积极开展DNA芯片研究工作;摩托罗拉、惠普、IBM等跨国公司也相继投以巨资开展芯片研究。98年12月Affymefrix公司和Molecular Dynamics公司宣布成立基因分析协会(Genetic Analysis Technology Consortium)以制定一个统一的技术平台生产更有效而价谦的设备,与此相呼应,英国的Amershcem Pharmacia Biotechnology公司也在同一天宣布将提供部分掌握的技术以推动这项技术的应用(16)。美国关于芯片技术召开了两次会议,克林顿总统在会上高度赞赏和肯定该技术,将基因芯片看作是保证一生健康的指南针(17)。预计在今后五年内生物芯片销售可达200-300亿美元;据《财富》杂志预测(97.3),在21世纪,生物芯片对人类的影响将可能超过微电子芯片。

⑷ 大哥们.请问化学发光法相当于几代

大哥们.请问化学发光法相当于几代干嘛对“相当于”这个数词这么偏执?

就是3代-4代

现在哪里还有2代试剂?早停产了!

⑸ 和化学发光法哪个更准

这个具体看你要测什么指标。 化学发光法:其是利用化学反应产生的能量进行激发发光,其具有仪器简单、检测限低、线性范围宽等优点,在化学分析方面应用广泛。与荧光法相比,化学发光法不需要外来的光源,从而减少了光散射,降低了噪音信号的干扰

⑹ 关于化学发光检测法

化学发光检测法有很多,不知你说的是不是焰色反应,如果是焰色反应,则是由于金属原子内部电子能级跃迁导致的,不同金属会发出不同颜色(波长)的光。这时一般只能作为定性检测,不能作为定量检测。
如果指的是原子发射光谱,其发光原理也是原子中最外层电子受到激发(可以是光致也可以是热致等等),由基态转化为激发态,然后跃迁回基态以光的形式辐射能量。这时可以作为定量分析(可定量必可以定性),这时可以看发射光谱谱图曲线的高度,一般有几种方法来测量,像外标法,内标法,标准曲线法等等,如果想知道更详细的东西可以参考仪器分析的有关内容。

⑺ 化学发光法是几代

化学发光法是四代。

HIV化学发光法一般是指第四代艾滋病检测试剂,也就是艾滋病抗体联合p24抗原的检测。第三代是单纯艾滋病抗体的检测,P24抗原的产生要早于抗体,所以与第三代相比,第四代抗原抗体联合检测的结果更加精准。

其窗口期是高危接触后14天,我国有专家认为,在14天后,如果结果是阴性,基本就可以排除艾滋病病毒感染的可能,但更多的研究人员更倾向于两周后初筛,六周后复检。如果二者结果都为阴性,那么就可以排除艾滋病感染了。

化学发光法分类:

依据供能反应的特点,可将化学发光分析法分为:

1、普通化学发光分析法(供能反应为一般化学反应);

2、生物化学发光分析法(供能反应为生物化学反应;简称BCL);

3、电致化学发光分析法(供能反应为电化学反应,简称ECL)等。

⑻ 化学发光法和酶联免疫法的区别,哪个更准确

1、原理上的区别

化学发光法依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理,利用仪器对体系化学发光强度的检测,而确定待测物含量。

酶联免疫法原理是在测定时把受检标本和酶标抗原或抗体与固相载体表面的抗原或抗体起反应加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。

2、分类上的区别

化学发光法依据供能反应的特点,可将化学发光分析法分为普通化学发光分析法,供能反应为一般化学反应;生物化学发光分析法,供能反应为生物化学反应;电致化学发光分析法,供能反应为电化学反应。根据测定方法又可分为直接测定CL分析法、偶合反应CL分析法等。

酶联免疫法根据测定方法可分为双抗体夹心法;双位点一步法;间接法测抗体法,利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体;竞争法,以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。

3、作用上的区别

化学发光法在痕量金属离子、各类无机化合物、有机化合物分析及生物领域都有广泛的应用。

酶联免疫法可用于测定抗原,也可用于测定抗体,ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题 。

⑼ 化学发光法(HIV定量检测)和酶联三代(HIV定性检测)有什么区别

化学发光法相当于酶联四代试剂,这种方法既可以测出抗原,也可测出抗体。由于可以测定抗原,所以它比三代酶联试剂更优越(因三代试剂仅能测抗体)。因此,化学发光法检测4周基本可排除,但为了保险起见还是建议在6周后检测一下,就彻底排除了。

⑽ 关于hiv化学发光法,求解答

1、首先,男性为女性WT主动KJ,假设对方有艾滋,只要你的口腔没有新鲜的、出血的伤口,且对方没有大量的分泌物喷射入你的口中,你是不可能感染HIV的。因为HIV无法通过正常的口腔黏膜感染人体,更重要地是,人的唾液中含有大量的酶和蛋白质,会抑制HIV的活性,到达你口腔的分泌物会被你的唾液中和,其中的HIV便无法构成感染。
2、化学发光法相当于4代酶联法,HIV(p24+ab)的意思是检查HIV的p24抗原和HIV抗体(ab是antibody)的缩写。化学发光是目前精度最高的检查之一,你的检查是既查抗原,又查抗体的。通常认为4周=28天用化学发光法阴,即可基本排除了。所以你29天,数值0.17<1,说明是阴性,可以基本排除感染了。放心吧!
3、如果你2周后的症状是HIV急性期症状引起的,那么29天检查化学发光,是可以查出抗原或抗体阳性的,因为急性期症状正是由于体内HIV大量复制所导致。所以你的症状与HIV无关。
4、你本来就没什么风险,现在又29天阴,其实可以不必再检查了。祝你健康!

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