组织化学法怎么检查

㈠ gus基因的检测方法

根据gus基因检测所用的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学法、分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检测法最高）。其中最为常用的是组织化学法。
组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸（X-Gluc）作为反应底物，将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡。若组织细胞发生了gus基因的转化，并表达出Gus，在适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物。这是由其初始产物经氧化二聚作用形成的靛蓝染料，它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性。因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚至单个细胞内的表达情况。

㈡ 组织化学法B是检查什么的

组织化学,外文名histochemistry,是指以常用的组织化学技术,对细胞内主要化学成分和活性的粗略(一般性)的研究,研究身体细胞和组织的化学构成,

㈢ 免疫组织化学染色诊断是什么意思

指在抗体上结合萤光或可呈色的化学物质，利用免疫学原理中抗原和抗体间专一性的结合反应，检测细胞或组织中是否有目标抗原的存在，此方式不只可以用来测知抗原的表现量也可观察抗原所表现的位置。只要是能够让抗体结合的物质，也就是具有抗原性的物质包括蛋白质、核酸、多糖、病原体等都可侦测。

免疫组织化学的优势在于专一性、灵敏度、简便快速以及成本低廉，所以广为医院采用，通常是借由特定的肿瘤标记来筛选癌症。免疫组织化学染色法对基础研究及预防和诊疗上都是相当重要的一个方法。

(3)组织化学法怎么检查扩展阅读

应用的基本原则简述如下：

1、确定细胞类型和形态。组织细胞内有些蛋白具有组织特异性，如胶质原纤维酸性蛋白只存在于星形胶质细胞内，神经丝蛋白只存在于神经细胞内。通常把这些具有组织特异性的蛋白称为标记性蛋白。通过标记性蛋白的特异性抗体可确定细胞种类。

有些细胞在光镜下不易辨认，通过对胞质内的特定蛋白实施免疫组化染色，便能清楚显示此类细胞外形轮廓。这种作用在神经科学研究和肿瘤临床病理中显得尤为重要。

2、辨认细胞产物的来源。利用某些细胞产物为抗原，制备相应的抗体，对组织细胞实施免疫组织化学染色，以确定细胞产物的来源。如内分泌细胞产生的各种激素，大多数可用免疫组化染色技术辨认，据此可研究细胞的分泌功能及对内分泌肿瘤作功能分类，检测分泌异位激素的肿瘤等，了解细胞分化程度。

3、确定细胞的分化程度。不同的同一类细胞多表达不同的标志性蛋白，根据对这些不同蛋白的鉴定可确定细胞的分化程度。例如，神经上皮细胞的标志性蛋白是巢蛋白，当其分化为放射状胶质细胞时表达波形蛋白。

在神经元发生期分化为成神经细胞时则表达Ⅲβ神经微管蛋白，成神经细胞分化为成熟的神经元时表达神经丝蛋白。

4、追踪神经纤维束和它的投射区。用于此目的的免疫组织化学方法常与轴浆运输示踪法相结合来研究神经元之间的联系，轴浆运输示踪法是利用某些物质可被神经末梢摄取，经轴质逆行运输到胞体的特点，用组织化学方法显示出神经元的轮廓。常用示踪剂有辣根过氧化物酶和荧光金等。

5．在临床病理中的应用。如鉴定病变性质，发现微小病灶，探讨肿瘤起源或分化表型，确定肿瘤分期，指导治疗和预后。辅助疾病诊断和分类，寻找感染病因等。

㈣ 免疫组织化学染色法的检查过程

用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法，称荧光抗体法。用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法，称荧光抗原法。免疫荧光组织化学分直接法、间接法和补体法。一、直接法(1) 检查抗原方法这是最简便、快速的方法，用已知特异性抗体与荧光素结合，制成特异性荧光抗体，直接用于细胞或组织抗原的检查。此法特异性强，常用于肾穿刺，皮肤活检和病原体检查，其缺点是一种荧光抗体只能检查一种抗原，敏感性较差。(2)检查抗体方法将抗原标记上荧光素，用此荧光抗原与细胞或组织内相应抗体反应，而将抗体在原位检测出来。二、间接法(1)检查抗体(夹心法)方法此法是先用特异性抗原与细胞或组织内抗体反应，再用此抗原的特异性荧光抗体与结合在细胞内抗体上的抗原相结合，抗原夹在细胞抗体与荧光抗体之间，故称夹心法。(2)检查抗体方法用已知抗原细胞或组织切片，加上待检血清，如果血清含有切片中某种抗原的抗体，抗体结合在抗原上，再用间接荧光抗体(抗种属特异性IgG荧光抗体)与结合在抗原上的抗体反应，在荧光显微镜下可见抗原抗体反应部位呈现明亮的特异性荧光。此法是检验血清中自身抗体和多种病原体抗体的重要手段。(3)检查抗原法此法是直接法的重要改进，先用特异性抗体与细胞标本反应，随后用缓冲盐水洗去未与抗原结合的抗体，再用间接荧光抗体与结合在抗原上的抗体结合，形成抗原-抗体-荧光抗体的复合物。同直接法相比荧光亮度可增强3或4倍。此法除灵敏性高外，它只需要制备一种种属间接荧光抗体，可以适用于同一种属产生的多种第一抗体的标记显示，这是现在最广泛应用的技术。三、补体法(1)直接检查组织内免疫复合物方法用抗补体C3荧光抗体直接作用组织切片，与其中结合在抗原抗体复合物上的补体反应，而形成抗原-抗体-补体—抗补体荧光抗体复合物，在荧光显微镜下呈现阳性荧光的部位就是免疫复合物上补体存在处，此法常用于肾穿刺组织活检诊断等。(2)间接检查组织内抗原方法常将新鲜补体与第一抗体混合同时加在抗原标本切片上，经37℃孵育后，如发生抗原抗体反应，补体就结合在此复合物上，再用抗补体荧光抗体与结合的补体反应，形成抗原-抗体-补体—荧光抗体的复合物，此法优点是只需一种荧光抗体可适用于各种不同种属来源的第一抗体的检查。[1]四、双重免疫荧光组织化学标记方法在同一组织标本上需要同时检查两种抗原时要进行双重荧光染色，一般均采用直接法，将两种荧光抗体(如抗A和抗B)以适当比例混合，加在标本上孵育后，按直接法洗去未结合的荧光抗体，抗A抗体用异硫氰酸荧光素标记，发黄绿色荧光;抗B抗体用TMRITC或RB200标记，发红色荧光，可以明确显示两种抗原的定位。

㈤ 活组织检查的检查方法

组织检查有多种方法：
1.体表浅层活组织检查 小手术切取体表浅层的肿块或病变组织标本，如皮肤、浅表淋巴结、外露的肿瘤等。
2.内窥镜活组织检查 在内窥镜内用活组织钳咬取标本，如用胃镜、乙状结肠镜、腹腔镜、支气管镜和膀胱镜等。
3.穿刺或抽吸活组织检查 淋巴结、骨髓、肝脏、脾脏、肾脏等可用特殊的穿刺针穿刺，抽取组织标本。
4.体腔穿刺液检查 在腹腔、胸腔等处穿刺抽取液体进行检查。
5.手术切片检查 把手术切除的组织固定后染色、切片，做病理细胞检查。有条件的医院在手术中还可以冰冻切片，马上在手术台旁检查，20分钟就可以报告结果。根据报告结果，立即决定手术治疗方案。
医生可以将取下的病变组织制成病理切片、涂片、压片，也可以进行组织培养、组织化学染色、细胞培养等，以明确诊断。

㈥ 妇科组织化学法和TCT的区别

宫颈活检和TCT的区别，主要体现在以下两个方面：第一、检查的部位和检查的方式不一样。宫颈TCT检查只是在女性宫颈的鳞柱状交接处，使用器械取一些细胞做检查。它的取材料非常小，而且取材的部位只局限于鳞柱状交接处，所以最后的检查结果准确率并不高。宫颈活检检查时一般是在阴道镜检查后，或者涂碘检查之后，在可疑病变部位取材，而且取材组织比较多，多点取材，所以它的准确率相对比较高。第二、在疾病诊断中的地位不一样。TCT主要适用于宫颈癌筛查的第一步，而宫颈活检是宫颈癌筛查的第三步，也是最后的金标准。最后确诊要以宫颈活检的标准为标准，并不以TCT检查的结果为标准。

㈦ 什么是“组织化学”

组织化学是指以常用的组织化学技术,对细胞内主要化学成分和活性的粗略(一般性)的研究.
概要介绍如下:
一,______ 核酸(DNA和RNA)

(一)__ 化学特性
1.分布: DNA (细胞核内)
RNA(核仁10% ;细胞质-核糖体90%)
2. 分子结构:戊糖 + 磷酸 + 碱基
特点:① 大量的磷酸基团→酸性
(嗜碱性的基础)
② 戊糖—被盐酸水解→醛基
(成为Feulgen法显示核酸的基础)
② 戊糖—被盐酸水解→醛基 (成为Feulgen法显示核酸的基础)

③ 可以完全水解或部分水解
④ 可以用RNAase或DNAase消化
[ 对照实验(—)]
_
(一)__ 显示方法
1. 福尔根(Feulgen)反应显示DNA
[ 原理 ] 在60℃温度下,将DNA用1N盐酸水解,DNA双链打开成单链,先释出碱基,然后脱氧核糖释出醛基,该醛基与Schiff氏液形成紫红色沉淀.
[ Schiff试剂显色原理 ]
碱性品红 亚硫酸 → 白亚黄酸
(无色试剂,称为Schiff试剂)
[方法]
固定剂的选择可用一般的组织学固定液,常
用Carnoy固定液.
Carnoy固定液:
纯酒: 氯仿: 冰醋酸 = 6:3:1
(60ml) (30ml) (10ml)
恒冷箱切片机的具体染色步骤如下:
⑴ 切片固定在冰醋酸与纯乙醇(1:3 V/V)
中10分钟.
⑵ 由乙醇降至蒸馏水中.
⑶ 用1N盐酸浸泡.
⑷ 放入预热到60℃的1N盐酸中,留6分钟.
⑸ 放入室温的1N盐酸中.
⑹ 放入Schiff液试剂,保持在暗处,60分钟
⑺ 用新配制的SO2水浸洗3次(脱掉未反应
的Schiff液).
⑻ 蒸馏水浸洗净(必须用蒸馏水→洗净无色品红,
否则,残留试剂→有色品红).
⑼ 脱水透明,封固.
结果:核内DNA染为红紫色.
对照:仅改变第4步为1N盐酸,室温15分钟→(-).
[ 注意事项 ]
⑴ 不用醛类固定剂如Bouin,戊二醛,丙烯醛等.
常用Carnoy液,甲醇等.
⑵ 控制水解时间,不同的固定剂用不同的时间,
如:Carnoy 8分钟;Genker 5分钟;
Susa 18分钟 ★ 最适条件应自行试验.
⑶ 控制温度,一般1N盐酸60℃;
如果5N盐酸18～25度.
⑷ 保证Schiff试剂的纯净度.
⑸ SO2要新配制,除去多余的 Schiff液宜用之.
⑹ 必须对照.

2._ 显示核酸的其它方法
⑴ Kurnick甲绿Methylgreen显示DNA法
⑵ 甲绿派若宁Methy green-Pyronin显示DNA和
RNA法
⑶ 菊花青铬明矾(GC)显示核酸法
⑷ 丫啶橙Acridine Orange显示DNA和RNA法
⑸ 核酸提取法
_一,______ 蛋白质(Protein)
_
(一)蛋白质的分子结构
蛋白质的基本单位是氨基酸,肽键将不同的氨基酸结合在一起,除氨基和羧基之外,还含有其它基团,如:—羟基,硫氢基,二硫基等.依其结构特点可分为:酸性氨基酸 和碱性氨基酸 ;芳香族氨基酸:苯丙氨基酸,酪氨基酸;杂环类氨基酸:组氨基酸,色氨基酸,亚氨基酸,脯氨基酸,羟脯氨基酸.
_
(二)目前应用

1._ 用于蛋白质的一般定性
① 确定是否为蛋白质
② 确定蛋白质的酸碱性
③ 显示蛋白质的特殊基团
2._ 用于蛋白质功能定性和定位
_(三)染色方法
目前,研究蛋白质功能定性和定位时多用酶
组织化学法,配体—受体结合法,免疫组化法以
显示特殊的蛋白质.这里仅介绍一般的染色方法.
1.四氮化联邻茴香胺法
(Tetra-azotized-o-anisidine)
[ 应用 ] 广泛应用于显示酶的活性
[ 原理 ] 芳香伯胺与亚硝酸作用,在低温下(<
5℃)可生成重氮盐,此即重氮反应.重氮盐可
与酚类作用生成有色化合物——偶氮化合物.上
述反应必须在酸性条件下进行.
本实验,联邻茴香胺在酸性,低温条件
下与亚硝酸作用生成四氮盐.四氮盐有两个
重氮盐,其中一个重氮基在碱性条件下与所
要显示的组氨酸,色氨酸及酪氨酸的苯环结
合产生偶联反应,另一个重氮基与酚类或奈
类发生偶联反应以增色.因此,可以用生成
的偶氮染料来代表组织细胞的蛋白质含量.
[ 方法 ]
1._ 四氮盐配制
⑴ 天平称取联邻茴香胺0.25g(有毒,通
风橱内进行).
⑵ 在冰浴下,加入已预冷8%盐酸10ml,
玻璃搅拌,促其溶解,混合后为悬浊液.
⑶ 称NaNO2 0.15g溶于1ml蒸馏水中(冰浴
下).
⑷在冰浴下,将配好的NaNO2溶液分三次倒入邻联茴香胺悬浊液内,每次倒入都须玻棒搅动,因产生NO2可有黄烟冒出,至黄烟停止再倒下一次液体.放入冰箱(4℃)内,约20分钟,待溶液变为黄色.
⑸倾出上清液,勿将沉渣泛起,弃去沉渣.
⑹用NaHCO3细粉(约0.5～0.6g)逐渐加
入上清液内,边加边搅拌(冰浴下).
⑺以刚果红试纸测中和点,待试纸不变蓝即达到中和.收集于标本瓶(或广口瓶)内,置冰箱备用.此液不稳定,置冰箱内可保存两周,若变为橘红色则失效.
_
2._ 偶氮反应
—Carnoy固定的大鼠肝,肠等石蜡切片.
⑴ 切片脱蜡至水.
⑵ 将切片放入下列溶液中(在冰浴中至2～3℃),
浸染10分钟.
用前配制:
四氮化联邻茴香胺溶液 4ml
0.1巴比妥缓冲液 (pH9.2) 20ml
24ml
⑶ 入1N盐酸(冰浴中2～3℃)浸洗10秒,多余盐
酸以滤纸吸干.
⑷ 入H酸饱和液,浸染30分钟(冰浴或冰
箱内).
H酸饱和液配制:H酸 0.4g
0.1M巴比妥缓冲液 20ml
(pH9.2) 过滤后使用!
⑸ 蒸馏水冲洗,脱水,透明,封固(树胶)
[ 结果 ]
酪氨酸,组氨酸,色氨酸染成红棕色(+)
※ 0.1M巴比妥钠50ml配制
① 分析天平称巴比妥钠(MW=206.18)
1.0309g
② 于量瓶内+蒸馏水50ml至刻度即可.
0.1M巴比妥缓冲液,pH9.2(20ml)配
制: 0.1M巴比妥钠 19.1ml
0.1N盐酸 0.9 ml
20 ml
2.其它的显示蛋白质的方法
⑴ 米朗反应(Millon Reastion)→显示酪氨
酸的方法
酪氨酸→羟苯基 亚硝酸 →亚硝基苯+Hg→有色物
注:胶原蛋白不显色,其它蛋白质都显色(+)
⑵二硝基氟苯Dinitro—fluoro—benzene (DNFB)法
DNFB与—NH2,SH和酪氨酸产生弱有色反应,
可被偶氮染料加强.
⑶ 酪氨酸重氮化偶联反应
⑷ 蛋白质硫氢基DDD法(固定时避免
氧化剂)
⑸ 铁—铁氰化钾反应显示SH基
⑹ 高甲酸阿尔辛蓝显示SS基法
⑺ 免疫荧光法显示蛋白质
三,碳水化合物
中性多糖——糖原
碳水化合物 酸性多糖——硫酸软骨素 A,B,
C,肝素,硫酸角
(组织中—多糖类) 质素,透明质酸等
蛋白多糖——粘蛋白,唾酸粘蛋白
糖 脂——脑苷脂类
※ 组织中糖的种类较多,因此,要特异性地显示各种
糖类必须用抑制和酶水解来对照实验.
本章仅以高碘酸雪夫法(PAS法)说明之,其它的
方法还有Alcian blue法,甲苯胺蓝异染性染色法等.

高碘酸雪夫法 Periodic—Schiff(PAS)method
[ 原理 ] 高碘酸为强氧化剂,它可以氧化多糖
分子内1,2—乙二醇(顺式和反式)而
产生醛基,此醛基再与Schiff试剂结合即
产生红 紫色.
[ 方法 ] 改良的McManus(1946),高碘酸雪夫法
标本:
① Carnoy固定的大白鼠肝,肾,肠石蜡切片
② 大白鼠肝横冷箱切片(未固定)
[ 步骤 ]
(1) 切片脱蜡入水(横冷箱切片免)
(2) 入0.5%高碘酸水溶液,室温,2～5分钟
(3) 蒸馏水涮洗
(4) 入Schiff试剂,洗3次,每次2分钟
(5) 入SO2水中,洗3次,每次2分钟
(6) 自来水洗5～10分钟
(7) 蒸馏水稍洗
(8)入Mayer氏苏木精副复染核1分钟
(9) 自来水5分钟,换蒸馏水
(10)脱水,透明,封固
[ 结果 ]
PAS(+)→红紫色或红色;核→蓝色
Carnoy固定,糖原原位定位不佳,有
移位现象.
[ 对照 ]
① 用唾液酸淀粉于37℃消化20～30分钟.
② 苯甲酰或乙酰化法作对照(抑制法)
[ 注意事项 ]
①必须按照规定配方配制试剂,按规定的时间 反应.以避免非特异反应.例如:入高碘酸水溶液时间不宜过长,否则非特异着色.
②多糖大多都易溶于水,固定时应避免扩散或移位.
冰冻切片+苦味酸福尔马林→固定→避免扩散或移位.
③注意溶液的pH值:高碘酸液的pH不应超过5.
④注意温度.反应宜在<25℃的室温下进行,否则可氧化醛基为羧酸.
⑤高碘酸溶液的浓度宜控制在0.5%～1%(0.02—0.1M)浓度过高则会发生非特
异反应.
⑥为充分显示多糖中的糖原,可在过碘酸
中加入5%醋酸或纯乙醇固定,但往往有
溶解和扩散.
⑦为阻止胶原纤维和网状纤维阳性反应,
可使用还原液,于使用Schiff液之前.
[ 分析结果 ] PAS反应阳性物质:糖原,中
性粘蛋白,中性唾液性粘蛋白.
四,脂类
[ 组织中的脂类 ]
单纯脂类 脂肪酸
醇的化合物(如:甘油三脂等)
复合脂类 磷脂(卵磷脂,脑磷脂)
脂类 鞘磷脂
糖脂(脑苷脂,神经苷脂)
衍生脂类 胆固醇
肾上腺素
性激素
[ 显示脂类的基本原理 ]
用易溶于脂类的染料,使之溶于所检
的脂质(如脂滴)中,使组织内的脂类着色.
[ 常用方法 ]
苏丹黑B法,油红O法,硫酸尼罗蓝法
[ 基本要求 ]
⑴ 不用石蜡切片.
⑵ 固定剂一般用Formalin保存磷脂较好.
⑶ 方法:
① 物理法:脂溶性染料,不溶于水,属偶
氮染料.常用苏丹Ⅲ,Ⅳ,苏
丹黑 ,油红O等.
② 化学方法:硫酸尼罗蓝显示脂肪酸.
③ 选择性提取法(对照)
实验举例:苏丹黑B法
[ 原理 ]
苏丹黑为偶氮染料,具有脂溶性,可
溶于无水酒精,但不溶于水(常用70%酒
精饱和液).当组织切片入染液时,苏丹
黑B便离开染液而溶于组织内的脂质(如脂
滴中)使组织内脂类着色.
标本:
兔肾上腺和睾丸横冷箱切片,10μm厚,不
固定(或用10%Formalin固定10分钟后水洗).
[ 方法 ]
① 入蒸馏水洗
② 于70%乙醇内涮洗
③ 入苏丹黑B 70%B饱和液,染5～10分钟
④ 于50%酒精内浸洗
⑤ 蒸馏水中洗
⑥ 入Mayer苏木精(复染细胞核)1分钟
⑦ 自来水冲洗5～10分钟
⑧ 入蒸馏水
⑨ 甘油明胶(或Apathy糖胶)封固
[ 结果 ] 细胞内脂滴均呈黑色

㈧ 什么是免疫组化检查

免疫组化检查指应用免疫学抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色，确定组织或细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对的定量检查。

免疫组织化学利用抗体和抗原具有高度特异性结合的原理：

先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性抗体，再以此抗体探测组织或细胞中的同类抗原。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此必须借助组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显现，以达到对未知抗原进行定性、定位或定量。

(8)组织化学法怎么检查扩展阅读

意义：

近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。

免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面：

1、恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断。

2、确定转移性恶性肿瘤的原发部位。

3、对某类肿瘤进行进一步的病理分型。

4、软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的。

5、发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。

6、为临床提供治疗方案的选择。

㈨ 医学上ihc是什么意思

医学上ihc就是免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）

免疫组织化学是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。免疫组织化学是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。

(9)组织化学法怎么检查扩展阅读：

免疫组织化学染色在生物医学研究中具有十分广泛的作用。并且涉及许多研究领域。但是，免疫组织化学技术也有其局限性，例如，组织细胞内的待测物质要有抗原性，而且需要有一定浓度方可检出；检出的免疫反应阳性蛋白不能被确定是细胞新合成的蛋白还是通过细胞间运输而来的蛋白，因此，在实验设计中应充分考虑这些特点。如果实验需要证明已知蛋白为何种细胞合成，需采用分子原位杂交技术解决。