怎么利用荧光猝灭进行化学分析

⑴ 利用荧光猝灭法进行定量分析的操作步骤是什么被测物质有什么特征

被测物本身或者被测物与配合剂结合后必须能够在特定波长的光激发下发出荧光。
操作步骤依据不同的分析方法有不同的步骤，没有统一的要求。但在激发波长和测定波长上要进行仔细的选择。

⑵ 荧光物含量测定方法的定量测定

荧光分析法的定量测定方法较多，可分为直接测定法和间接测定法两类。
a.直接测定法：
利用荧光分析法对被分析物质进行浓度测定，最简单的便是直接测定法。某些物质只要本身能发荧光，只须将含这类物质的样品作适当的前处理或分离除去干扰物质，即可通过测量它的荧光强度来测定其浓度。具体方法有两种。
1. 直接比较法：配制标准溶液的荧光强度Fx，已知标准溶液的浓度Cs，便可求得样品中待测荧光物质的含量。
如果空白溶液的荧光强度调不到零，则必须从Fs和Fx值中扣除空白溶液的荧光强度F0，然后进行计算。
2. 标准曲线法：将已知含量的标准品经过和样品同样处理后，配成一系列标准溶液，测定其荧光强度，以荧光强度对荧光物质含量绘制标准曲线。再测定样品溶液的荧光强度，由标准曲线便可求出样品中待测荧光物质的含量。
为了使各次所绘制的标准曲线能重合一致，每次应以同一标准溶液对仪器进行校正。如果该溶液在紫外光照射下不够稳定，则必须改用另一种稳定而荧光峰相近的标准溶液来进行校正。例如，测定维生素B1时，可用硫酸奎宁溶液作为基准校正仪器。
b、间接测定法：
有许多物质，它们本身不能发荧光，或者荧光量子产率很低，仅能显现非常微弱的荧光，无法直接测定，这时可采用间接测定方法。
间接测定方法有以下几种：
1.化学转化法：通过化学反应将非荧光物质变为适合于测定的荧光物质。例如金属与螯合剂反应生成具有荧光的螯合物。有机化合物可通过光化学反应、氧化还原、偶联、缩合反等应，使它们转化为荧光物质。
2.荧光猝灭法：这种方法是利用本身不发荧光的被分析物质能使某种荧光化合物的荧光猝灭的性质，通过测量荧光化合物荧光强度的下降，间接地测定该物质的浓度。
3.敏化发光法：对于很低浓度的分析物质，如果采用一般的荧s光测定方法，其荧光信号太弱而无法检测，可使用一种物质（敏化剂）以吸收激发光，然后将激发光能传递给发荧光的分析物质，从而提高被分析物质测定的灵敏度。

⑶ 荧光的猝灭现象在荧光分析法中的利弊

溶液荧光的猝灭荧光猝灭广义地说包括了任何可使荧光强度降低的作用。
狭义的仅仅指那些由于荧光物质分子与溶剂或溶质分子之间所发 生的导致荧光强度下降的物理或化学作用过程。相互作用所引起。

⑷ 荧光分析的应用

在紫外线照射下能发生荧光的无机物很少，但许多元素与有机试剂所组成的络合物,在紫外线照射下会发生荧光,由其荧光强度和标准曲线可以测定该元素的含量。现在借助于有机试剂进行荧光分析的元素已达60余种。至于非金属元素（如氟、氯、溴、碘、硫等）或过渡金属元素（如铜、铁、钴、镍、汞等）则可用荧光猝灭法进行测定。
荧光分析法的灵敏度很高，一般为微克/升，较紫外-可见分光光度法高二、三个数量级，与原子吸收光谱法相近。如采用激光时间分辨荧光法，灵敏度还可大大提高。例如,测定海水中铀的检出限可达0.04微克/升，测定铕的检出限可达2皮克/升。 光离解反应常生成自由基，但自由基存在的时间很短,难于鉴定。随着激光荧光法的发展,建立起皮秒脉冲激光荧光法，可用于卤素芳族化合物的光离解反应的研究并用以鉴别所生成的自由基。在某一波长的皮秒激光脉冲的激发诱导下，卤素芳族化合物发生光离解反应，C-X键分裂而生成自由基,用较第一种激光脉冲延迟数十皮秒的另一波长的皮秒激光脉冲进行激发，并绘制荧光光谱，可以对这些自由基进行鉴定。

⑸ 荧光猝灭的方法

荧光分子本身浓度增大使其荧光猝灭的现象称为浓度猝灭或自猝灭。由于荧光的再吸收、荧光物质发生化学变化而观察不到荧光的现象一般不称为荧光猝灭。在利用荧光进行定量、液体闪击计数等包含荧光过程的测定方法中，一定要注意溶剂、共存杂质、氧气等猝灭剂的影响。
利用某种物质对某一种荧光物质的荧光猝灭作用而建立的对该猝灭剂的荧光测定方法，即为荧光猝灭法。一般而言，荧光猝灭法比直接荧光测定法更为灵敏，具有更高的选择性。

⑹ 原子荧光光谱分析的基本原理

原子荧光光谱法是通过测量待测元素的原子蒸气在辐射能激发下产生的荧光发射强度，来确定待测元素含量的方法。
气态自由原子吸收特征波长辐射后，原子的外层电子从基态或低能级跃迁到高能级经过约10-8s，又跃迁至基态或低能级，同时发射出与原激发波长相同或不同的辐射，称为原子荧光。原子荧光分为共振荧光、直跃荧光、阶跃荧光等。
发射的荧光强度和原子化器中单位体积该元素基态原子数成正比，式中：I f为荧光强度；φ为荧光量子效率，表示单位时间内发射荧光光子数与吸收激发光光子数的比值，一般小于1；Io为激发光强度；A为荧光照射在检测器上的有效面积；L为吸收光程长度；ε为峰值摩尔吸光系数；N为单位体积内的基态原子数。
原子荧光发射中，由于部分能量转变成热能或其他形式能量，使荧光强度减少甚至消失，该现象称为荧光猝灭。

⑺ 关于荧光分析的问题，急!!!!!!!!!

一般来说，化学分析法比荧光分析法更为准确。 但是荧光分析以其不需要复杂的制样过程，分析时间短，可实现多种元素同时无损检测等特点得到越来越广泛地应用。
提高荧光分析法准确度的方法如下：
（1）溶剂：溶剂能影响荧光效率，改变荧光强度，因此，在测定时必须用同一溶剂。

（2）浓度：在较浓的溶液中，荧光强度并不随溶液浓度呈正比增长。因此，必须找出与荧光强度呈线性的浓度范围。

（3）酸度：荧光光谱和荧光效率常与溶液的酸度有关，因此，须通过条件试验，确定最适宜的pH值范围。

（4）温度：荧光强度一般随温度降低而提高，因此，有些荧光仪的液槽配有低温装置，使荧光强度增大，以提高测定的灵敏度。在高级的荧光仪中，液槽四周有冷凝水并附有恒温装置，以便使溶液的温度在测定过程中尽可能保持恒定。

（5）时间：有些荧光化合物需要一定时间才能形成；有些荧光物质在激发光较长时间照射下会发生光分解。因此，过早或过晚测定荧光强度均会带来误差。必须通过条件试验确定最适宜的测定时间，使荧光强度达到量大且稳定。为了避免光分解所引起的误差，应在荧光测定的短时间内才打开光闸其余时间均应关闭。

（6）共存干扰物质 有些干扰物质能与荧光分子作用使荧光强度显着下降，这种现象称为荧光的猝灭（quenching）；有些共存物质能产生荧光或产生散射光，也会影响荧光的正确测量。故应设法除去干扰物，并使用纯度较高的溶剂和试剂。

⑻ 荧光淬灭是什么什么原理

荧光猝灭是荧光物质分子与溶剂分子之间发生猝灭，荧光猝灭分为静态猝灭和动态猝灭。利用某种物质对某一种荧光物质的荧光猝灭作用而建立的对该猝灭剂的荧光测定方法，即为荧光猝灭法。

荧光分子本身浓度增大使其荧光猝灭的现象称为浓度猝灭或自猝灭。由于荧光的再吸收、荧光物质发生化学变化而观察不到荧光的现象一般不称为荧光猝灭。在利用荧光进行定量、液体闪击计数等包含荧光过程的测定方法中，一定要注意溶剂、共存杂质、氧气等猝灭剂的影响。

荧光淬灭注意事项

标记样品的荧光淬灭是在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察时遇到的主要问题。由于激光扫描共聚焦显微镜具有更强的功率和聚焦更准确的光束，与普通荧光显微镜相比，标本的光漂白作用更为明显，荧光素的荧光可在连续观察过程中逐渐减弱或消失。

因此，应考虑使用抗荧光淬灭剂(抗荧光衰减剂)。常用抗荧光淬灭剂有P-苯二胺(Para-phenylene diamine，PPD)、n-丙基没食子酸盐(propyl gallate，NPG)、1，4-二偶氮双环[2，2，2)-辛烷(1，4-diazobicyelo(2，2，2)-octane，DABCO)等。

⑼ 简述荧光猝灭法与直接荧光法所得工作曲线的异同

淬灭是激发态通过非辐射复合的途径达到弛豫，光稳定的一种。Quench本意为用水浇灭，淬灭为外来词汇，并没有“突然熄灭”中“突然”之意，故“猝灭”应为误传。

荧光淬灭是指荧光物质分子与溶剂分子之间发生淬灭，荧光猝灭分为静态淬灭和动态淬灭。利用某种物质对某一种荧光物质的荧光淬灭作用而建立的对该淬灭剂的荧光测定方法，即为荧光猝灭法。

中文名

荧光淬灭

外文名

fluorescence quenching

释义

淬灭剂的荧光测定方法

性质

化学术语

定义

荧光淬灭（fluorescence quenching）是指荧光物质分子与溶剂分子之间所发生的导致：



EB-DNA体系发射光谱图

①荧光强度变化

或

②相关的激发峰位变化

或

③荧光峰位变化

物理或化学作用过程。与荧光物质分子发生相互作用而引起荧光强度变化和相关的激发峰位和荧光峰位变化的物质被称为荧光淬灭剂（quencher）。

在光合作用的光反应中，电子受体即为荧光淬灭剂。[1]

分类

荧光淬灭分为静态淬灭和动态淬灭。

基态荧光分子与淬灭剂之间通过弱的结合生成复合物，且该复合物使荧光完全淬灭的现象称为静态淬灭。

激发态荧光分子与淬灭剂发生能量转移或物理碰撞使其荧光淬灭则称为动态淬灭。

方法

荧光分子本身浓度增大使其荧光猝灭的现象称为浓度猝灭或自猝灭。由于荧光的再吸收、荧光物质发生化学变化而观察不到荧光的现象一般不称为荧光猝灭。在利用荧光进行定量、液体闪击计数等包含荧光过程的测定方法中，一定要注意溶剂、共存杂质、氧气等猝灭剂的影响。

利用某种物质对某一种荧光物质的荧光猝灭作用而建立的对该猝灭剂的荧光测定方法，即为荧光猝灭法。一般而言，荧光猝灭法比直接荧光测定法更为灵敏，具有更高的选择性。

影响因素

分子结构和化学环境是影响物质发射荧光和荧光强度的重要因素. 至少具有一个芳环或具有多个共轭双键的有机化合物容易产生荧光,稠环化合物也会产生荧光.饱和的或只有一个双键的化合物,不呈现显着的荧光.最简单的杂环化合物,如吡啶,呋喃,噻吩和吡咯等,不产生荧光。

取代基的性质对荧光体的荧光特性和强度均有强烈影响.苯环上的取代基会引起最大吸收波长的位移及相应荧光峰的改变.通常给电子基团,如-NH2-,-OH,-OCH3,-NHCH3和-N(CH3)2等,使荧光增强;吸电子基团,如-CL,-Br,-